布鲁氏菌噬菌体多核苷酸及其用途的制作方法

专利名称：布鲁氏菌噬菌体多核苷酸及其用途的制作方法
技术领域：
本发明在其一些实施方式中涉及布鲁氏菌(Brucella)噬菌体核酸序列及其用途。
背景技术：
布鲁氏菌(布鲁氏菌属，Brucella)是革兰氏阴性的小球杆菌属细菌。它们是导致天然宿主在怀孕的最后阶段流产的动物病原体。布鲁氏菌属包括10个物种，这10个物种分为带有光滑和粗糙外膜LPS的生物。分别与小反刍动物、牛和猪的布鲁氏菌病相关的三个光滑型布鲁氏菌物种(马尔他布鲁杆菌(羊布鲁氏菌，B. melitensis)、流产布鲁氏菌(流产布鲁杆菌，B. abortus)和猪布鲁氏菌(猪布鲁杆菌，B. suis))是人畜共患病的(zoonotic to humans)。将与海洋哺乳动物布鲁氏菌病相关的鲸型布鲁氏菌(B. ceti)和鳍型布鲁氏菌(B.pinnipedialis)记载为人布鲁氏菌病的致病物(致病因素)的报告不常见。另外，与犬布鲁氏菌病相关的犬布鲁氏菌(B. canis)是导致人感染的粗糙型生物。该疾病在人中表现为波状热，也称为马尔他发热，且它可能是由脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎和其他并发症的慢性疾病或表现造成的。在极少数情况下该疾病可能变成致命的。布鲁氏菌噬菌体是对布鲁氏菌物种有特异性的细菌病毒。布鲁氏菌噬菌体和它们的分类学关联性的综述出版于1981年。所有同时期已知的布鲁氏菌噬菌体显示包含属于短尾病毒科(Podoviradae)的相似的二十面体头和短尾形态。根据抗原和生理特性以及对化学试剂和物理试剂的抗性，显示所研究的噬菌体密切相关。这些研究结果激发作者将所概述的变体包括到单个物种中并提出噬菌体Tb为病毒类型(Ackerman，H. -W.，Simon, F.，和 Verger, J. -Μ. 1981. Intervirology 16:1-7)。布鲁氏菌噬菌体具有大小为约38千个碱基对的线性双链DNA。噬菌体Tb、Fi、Wb、Iz和R/C的限制酶消化分析在DNA上表现出相似性，而且几乎没有发现噬菌体的溶源性存在或者宿主中存在质粒形式的证据。先前的研究已确定鸟嘌呤核苷-胞嘧啶在噬菌体Tb中的含量为45. 3-46. 7%，而预期它在其他噬菌体中具有更高的百分比，为48. 9%。数位研究者已指出噬菌体作为病原性疾病治疗药剂的用途(Brils sow，H. 2005.Microbiol. 151:2133 - 2140;Summers, ff. C. 2001. Ann. Rev. Microbiol. 55:437-451)。另外，布鲁氏菌曬菌体已用于布鲁氏菌分型，且曬菌体敏感性试验已变成分类和确定布鲁氏菌属的分类树的工具。具体地，有人建议布鲁氏菌属的分类品种(nomen-spec i es )的划分部分地根据它们的物种特异性曬菌体敏感性判断,该物种特异性噬菌体敏感性也与菌株的宿主从属关系(亲和，affiliation)具有良好的相关性。布鲁氏菌噬菌体已根据它们对布鲁氏菌属某些种(Brucella spp)的感染性分成7组。噬菌体Izatnagar (Iz1)代表对所有光滑型布鲁氏菌分类品种(nomenspecies)和部分粗糙型菌株有感染性的组 6 (Corbel 和 Tolari, 1988，Res Vet Sci ; 44:45-49)。Zhu 等人，2009[Int. J. Mol. Sci. 10:2999 - 3011]教导了 Tb (Tbilisi，第比利斯)布鲁氏菌噬菌体的部分序列。
Rigby 等人，1989 [Can J Vet Res. 53:319-325]教导了 Nepean 卩遼菌体和布鲁氏菌物种的其他裂解性噬菌体的部分序列。美国专利No. 20030017449教导了利用布鲁氏菌噬菌体检测布鲁氏菌的方法
发明内容
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了包含布鲁氏菌曬菌体核酸序列的分离多核苷酸，该核酸序列对布鲁氏菌噬菌体有特异性并包含选自由SEQ ID NO: 396和387-393组成的组中的序列。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了与本发明分离多核苷酸杂交的长度为至少15个核苷酸的分离多核苷酸。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了下调目的基因在细菌中的表达的方法，该方法包括用包含布鲁氏菌噬菌体调节序列的核酸构建体转化细菌，从而下调目的基因的表达。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了包含SEQ ID N0:396中列出的核酸序列的至少100个核苷酸的核酸构建体。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了核酸构建体，其包含i.编码可操作地融合到布鲁氏菌启动子上的目的基因的多核苷酸；ii.融合到该启动子5’端上的第一布鲁氏菌卩遼菌体序列，该第一序列包含SEQ IDNO:394中列出的核酸序列的至少100个核苷酸；和iii.融合到目的基因3’端上的第二布鲁氏菌噬菌体序列，该第二序列包含SEQ IDNO:395中列出的核酸序列的至少100个核苷酸。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了重组布鲁氏菌曬菌体,其通过输出可检测信号鉴定布鲁氏菌属细菌。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了分离布鲁氏菌属细菌细胞，其包含本发明的重组布鲁氏菌曬菌体。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了诊断受验者布鲁氏菌感染的方法，该方法包含使受验者的样品与本发明重组布鲁氏菌噬菌体接触，从而诊断布鲁氏菌感染。根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了诊断受验者布鲁氏菌感染的方法，该方法包含使受验者的样品与本发明的分离布鲁氏菌属细菌细胞接触，从而诊断布鲁氏菌感染。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸包含SEQ ID NO: 396中列出的核酸序列的至少100个连续核苷酸。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸包含SEQ ID N0:396中列出的序列。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸包含SEQ ID NO: 387-393中列出的核酸序列。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸具有SEQ ID NO: I中列出的核酸序列。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸在正向或反向包含选自由SEQ IDNO: 394和395组成的组中的至少一个核酸序列。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸进一步包含异源核酸序列和引导(指导)异源核酸序列的表达的异源启动子序列。根据本发明一些实施方式，该核酸序列包含转录调节区。根据本发明一些实施方式，该转录调节区包含布鲁氏菌噬菌体启动子。根据本发明一些实施方式，该分离多核苷酸包含SEQ ID NO:2-386中列出的序列。根据本发明一些实施方式，该异源核酸序列编码可检测部分。根据本发明一些实施方式，该异源核酸序列编码对布鲁氏菌有致死性的多肽。根据本发明一些实施方式,该细菌包含布鲁氏菌属细菌。
根据本发明一些实施方式，该布鲁氏菌属细菌菌株包含猪布鲁氏菌或马尔他布鲁杆菌(羊布鲁氏菌)。根据本发明一些实施方式，该基因是对细菌内源的基因。根据本发明一些实施方式，该基因是对该细菌噬菌体内源的基因。根据本发明一些实施方式，该调节序列包含SEQ ID NO:396中列出的核酸序列的至少100个核苷酸。根据本发明一些实施方式，该调节序列包含SEQ ID N0:396中列出的序列。根据本发明一些实施方式，该调节序列进一步包含SEQ ID N0:397中列出的序列。
根据本发明一些实施方式，该调节序列的侧面有转座子序列。根据本发明一些实施方式，该核酸构建体包含SEQ ID NO:396中列出的核酸序列。根据本发明一些实施方式，该核酸序列的侧面有转座子序列。根据本发明一些实施方式，目的基因编码治疗性多肽。根据本发明一些实施方式，目的基因编码可检测部分。根据本发明一些实施方式，目的基因包含在Lux操纵子中。根据本发明一些实施方式,该可检测信号是发光信号。根据本发明一些实施方式,该重组布鲁氏菌曬菌体包含裂解活性。根据本发明一些实施方式，该噬菌体基因组包含编码可检测信号的多核苷酸序列。除非另有限定，否则本文使用的所有技术和/或科学术语的含义都与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同。虽然下面描述了示例方法和/或材料，但本发明实施方式的实践或试验中可使用与本文所描述的那些相似或者等效的方法和材料。如有冲突，以专利说明书为准，包括定义。另外，材料、方法和实例仅为了说明，并非为了限制。


本文仅参考附图举例说明本发明的一些实施方式。关于下面详细讨论的示图，要强调的是，所示细节仅为了举例，用于示意性地讨论本发明的实施方式。在这方面，参考示图所作的描述将使本领域普通技术人员明了本发明的实施方式如何实施。在图中图I示出在具有通过测序仪鉴定的38255个核苷酸的特异共有序列(consensus)最大重叠群(contigue)上证实的阅读序列。可以看出，C和A各自等同地分配在核苷酸5549和5550处的8个重叠群中，在一个或其他位置中留出单个核苷酸空隙。这表明SNP (或杂合子)分别位于C和A之间的位置5549处。在每个构建体中，N均被准确地鉴定为C。
图2描述了已成功亚克隆到质粒pBS中的9个噬菌体Iz1DNA片段。这些片段与全噬菌体Iz1基因组DNA杂交，并且核苷酸测序证实它们的准确序列，该序列与完整噬菌体基因组中的重叠序列相同。图3A-B是示出基于布鲁氏菌质粒pBBRlmcs-4. l-II1053LuxCDABE的两个质粒构建体的示意图。这些构建体包括延伸在核苷酸1550(Tl6509和18579 19630之间的噬菌体Iz1DNA片段，以及以正确取向添加到它们的3’端和5’端的Τη5镶嵌端(mosaic end)之一。这些工程化改造片段在两个取向上分别克隆到Lux的上游和下游。图4是示出用于构建图3B所示的质粒构建体的引物位置的示意图。图5是示出用以产生布鲁氏菌噬菌体载体克隆所采取的步骤的流程图。
具体实施方式

本发明在其一些实施方式中涉及布鲁氏菌噬菌体核酸序列及其用途。在详细解释本发明的至少一个实施方式之前，应理解本发明的应用不必局限于下面说明书中陈述的或通过实例举例说明的细节。本发明能够有其他实施方式，或能够以多种方式实践或实施。布鲁氏菌物种是影响多种哺乳动物的重要的人畜共患病病原体。在农业方面重要的家畜中，这些细菌导致流产和不孕，它们是严重的全世界性经济问题。感染人的布鲁氏菌物种引起波状热，波状热如果未经治疗，会表现为睾丸炎、骨关节炎、脊椎炎、心内膜炎、和神经障碍。在极少数情况下它可能是致命的。本发明人已对作为所有其他布鲁氏菌曬菌体基因型代表的布鲁氏菌曬菌体Iz1的整个基因组(38，254个碱基对)进行测序。鉴定出两个基因组布鲁氏菌噬菌体Iz1群体，它们之间的差异在于核苷酸5549处的C或A。对这个序列进行BLAST分析，发现与人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)ATCC 49188染色体I具有同源性的6个区一参见本文下面实施例部分中的表2。从全长基因组序列中扣除这些序列，使得本发明人发现对布鲁氏菌噬菌体有特异性的新的多核苷酸序列(例如，SEQ ID NO: 387-393)0从该序列搜集的信息已使本发明人能够鉴定最少数量的ORF的明显顺序，其可用于将目的基因(例如，编码可检测部分的那些)插入到该噬菌体中，而不影响它的裂解活性。因而，依据噬菌体基因组中这个位点被可检测信号(例如，Lux操纵子)重组替代，探索重组布鲁氏菌噬菌体的发育。由于输出这个信号，因此此种噬菌体可以用来鉴定布鲁氏菌属细菌。产生噬菌体载体布鲁氏菌克隆，其中噬菌体Iz1在质粒pBBRlmcs4. 1-111053/luxCDABE/15B-18B (图3B)的存在下共同存在(共同居住，co-residence)于该细胞中，为发生在质粒DNA上的Lux操纵子与布鲁氏菌噬菌体DNA之间的重组事件提供无限的机会。另外，本发明人已在噬菌体中鉴定出调节区，该调节区具有调节功能并且显示能够下调由质粒赋予的光表达，指示在布鲁氏菌属细菌内实施此种基因调节机制的可能性。因而，例如，本发明人鉴定出可在转化到布鲁氏菌属细菌中之后下调可操作地连接到其上的基因的噬菌体DNA片段(SEQ ID NO: 396; 19630-18579)。当这个序列与另外的噬菌体DNA片段(SEQ ID NO: 397; 16509-15500)—起转化到布鲁氏菌属细菌中时，它为布鲁氏菌物种赋予不同的致死活性，对流产布鲁氏菌菌株544具有最强的致死性，对羊布鲁氏菌具有较小的致死性，而对布鲁氏菌的猪布鲁氏菌菌株无致死性。相应地，这个片段的下调活性也显示出是物种特异性的。噬菌体调节区的知识有利于计算机鉴定布鲁氏菌基因组内另外未识别的调节序列。这种途径已在属于α-变形杆菌类别的豆科植物内共生菌苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti) (del Val C 等人，Mol Microbiol 2007;66:1080-1091),以及植物冠瘿病(Crown-Gall)的致病物根癌农杆菌(Agrobactrum tumefaciens)和布鲁氏菌中得到证明，表明这些生物之间存在密切的关系，因而可能具有共同的功能(Inon deIannino N 等人， JBacteriol 1998;180:4392-4400)。因而，根据本发明的一个方面，提供了包含布鲁氏菌噬菌体核酸序列的分离多核苷酸，该核酸序列对布鲁氏菌噬菌体有特异性并包括选自由SEQ ID NO:387-393组成的组中的序列。如本文所使用的，术语“噬菌体”(与术语“细菌噬菌体”同义)是指选择性地感染原核生物——如细菌的病毒。许多细菌噬菌体对细胞的特定属或种或菌株有特异性。该噬菌体通常为裂解性细菌噬菌体。裂解性细菌噬菌体是一种通过完成裂解循环，沿裂解途径前进，而不进入溶原途径的噬菌体。裂解性细菌噬菌体经历病毒复制，导致细胞膜的裂解、摧毁细胞并释放能够感染其他细胞的子代细菌噬菌体颗粒。溶原性细菌噬菌体是一种能够进入溶原途径的噬菌体，其中该细菌噬菌体在完成它的裂解循环之前变成细胞基因组的蛰伏、不活泼(passive)部分。根据一个实施方式，该噬菌体是Tb型噬菌体，例如，噬菌体Iz115对布鲁氏菌噬菌体有特异性的序列一种存在于该噬菌体中，但不存在于其他生物体中的序列——即对布鲁氏菌特有的序列。由于布鲁氏菌噬菌体基因组的序列现在是已知的，因此布鲁氏菌噬菌体特异性序列可以利用BLAST或其他类似程序鉴定。根据一个实施方式，布鲁氏菌曬菌体特异性序列与另一个核酸序列的同一'丨生不大于70%，如利用序列比对软件如BLAST分析证实的。根据一个实施方式，布鲁氏菌曬菌体特异性序列与另一个核酸序列的同一'丨生不大于60%，如利用序列比对软件如BLAST分析证实的。如本文所使用的，短语“分离多核苷酸”是指分离并以RNA序列、互补多核苷酸序列(cDNA)、基因组多核苷酸序列和/或复合多核苷酸序列(例如，上面的组合)形式提供的单链或双链核酸序列。如本文所使用的，短语“互补多核苷酸序列”是指利用逆转录酶或任何其他RNA依赖性DNA聚合酶逆转录信使RNA产生的序列。此种序列随后可以利用DNA依赖性DNA聚合酶在体内或体外扩增。如本文所使用的，短语“基因组多核苷酸序列”是指源(分离)自染色体的序列，因而它代表染色体的邻接部分。如本文所使用的，短语“复合多核苷酸序列”是指这样的序列，其至少部分是互补的且至少部分是基因组的。复合序列可以包括编码本发明的多肽所需的一些外显子(exonal)序列，以及介入其间的一些内含子序列。这些内含子序列可以是任何来源的，包括其他基因，并通常包括保守剪接信号序列。此种内含子序列可以进一步包括顺式作用的表达调节元件。
根据一个实施方式，该分离多核苷酸包含SEQ ID NO: 387-393中列出的序列的至少15个、至少20个、至少40个、至少50个、至少100个、至少200个、至少500个或至少1000个连续核苷酸。因而，本发明多核苷酸长度可以为15-38，254个核苷酸。应理解，本发明也涵盖了上文描述的序列的同源物。因此，本发明这个方面的多核苷酸可以具有与源自SEQ ID NO:387-393的序列有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少93%、至少95%或多至100%同一性的核酸序列，如利用国家生物技术信息中心(National Centerfor Biotechnology Information, NCBI)的 BlastN 软件利 用缺省参数测定的。因而，本发明包括上文所述的核酸序列、其片段、可与其杂交的序列、与其取向相反的序列、与其同源的序列、编码具有不同的密码子使用的类似多肽的序列、以突变为特征的改变序列，所述突变为，例如一个或多个核苷酸的缺失、插入或置换，这种突变是天然发生的或人工诱导的，随机或以靶向方式进行的。本发明考虑的示例性多核苷酸是包含SEQ ID NO: I和387-393中列出的核酸序列的那些。本发明考虑的其他示例性多核苷酸是这样的多核苷酸，其包含SEQID NO:387-393中列出的序列内的调节区，例如如本发明人给出的SEQ IDNO:395中列出的调节区的至少100个连续核苷酸，从而在以相反取向(B卩，SEQ ID NO:396)插入时具有下调可操作地连接到其上的基因的活性。另一个调节序列在正向或反向取向上都包括SEQ ID N0:394。这也存在于可能影响噬菌体Iz1基因的调节功能的完整噬菌体基因组中。利用生物信息学工具，本发明人在噬菌体中鉴定出可用作启动子序列的噬菌体基因组全长序列内的另外的调节区(即，转录调节区)(SEQ IDNO:2-386).此种启动子序列可以设置在异源性核酸序列的上游以便促进它的转录。而且，该下调活性可以用来鉴定改变转录调节区活性的重要化学物，从而有利于新药的开发。还提供了编码推定的多肽的其他序列，它们也被认为在本发明范围内。此种序列提供在本文下表I中。编码此种多肽的多核苷酸序列可以用于各种用途。因而，例如编码推定的溶解素(Iysin)和穿孔素(holin)的多核苷酸序列可以用来选择性地灭杀布鲁氏菌细胞。基于溶解素的治疗的优点很多它们可以高纯度制备并具有高特异活性；它们表现出迅速的致死作用；它们是无毒的；以及明显地，所形成的对抗这些蛋白质的抗体不会中和它们的裂解活性。最后，没有细菌对这些蛋白质产生抗性，可能是因为它们具有用于细胞壁结合和水解的多个结构域。另外的重要多肽的实例是I.包括鞭毛蛋白的分泌蛋白(分泌型III，这种装置与许多革兰氏阴性病原体使用的注射体(injectisome)和用于将效应蛋白质转移到宿主细胞中的共生体(symbiont)有关)和VirB (分泌型IV，DNA跨生物膜的易位是许多活生物体的必需过程。在细菌中，IV型分泌系统(T4SS)用于将DNA以及蛋白质底物从供体递送到靶细胞。T4SS是由一打或更多膜蛋白质响应于环境信号组装而成的结构复杂的布局(机器，machine)。DNA跨生物膜的易位是许多活生物体的必需过程。在细菌中，IV型分泌系统(T4SS)用于将DNA以及蛋白质底物从供体递送到靶细胞。T4SS是由一打或更多膜蛋白质响应于环境信号组装而成的结构复杂的布局(机器))。2.噬菌体整合酶一在溶原性循环中催化细菌噬菌体的位点特异性整合和切除。3.毒素，磷脂酶一降解磷脂，蛋白酶一降解蛋白质。表I·
权利要求
1.一种包含布鲁氏菌(Brucella)噬菌体核酸序列的分离多核苷酸，所述核酸序列对布鲁氏菌噬菌体有特异性并包含选自由SEQ ID NO:396和387-393组成的组中的序列。
2.根据权利要求I所述的分离多核苷酸,包含SEQID N0:396中列出的核酸序列的至少100个连续核苷酸。
3.根据权利要求2所述的分离多核苷酸，包含SEQID N0:396中列出的序列。
4.根据权利要求I所述的分离多核苷酸，包含SEQID N0:387-393中列出的核酸序列。
5.—种与根据权利要求I所述的分离多核苷酸杂交的长度为至少15个核苷酸的分离多核苷酸。
6.根据权利要求I所述的分离多核苷酸，具有SEQID NO: I中列出的核酸序列。
7.根据权利要求I所述的分离多核苷酸，在正向或反向包含选自由SEQID N0:394和 395组成的组中的至少一个核酸序列。
8.根据权利要求7所述的分离多核苷酸，进一步包含异源核酸序列和引导所述异源核酸序列的表达的异源启动子序列。
9.根据权利要求I所述的分离多核苷酸，其中所述核酸序列包含转录调节区。
10.根据权利要求9所述的分离多核苷酸，其中所述转录调节区包含布鲁氏菌噬菌体启动子。
11.根据权利要求10所述的分离多核苷酸，包含SEQID N0:2-386中列出的序列。
12.根据权利要求8所述的分离多核苷酸，其中所述异源核酸序列编码可检测部分。
13.根据权利要求8所述的分离多核苷酸，其中所述异源核酸序列编码对布鲁氏菌有致死性的多肽。
14.一种下调细菌中目的基因的表达的方法，所述方法包括用包含布鲁氏菌噬菌体调节序列的核酸构建体转化细菌，从而下调所述目的基因的表达。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述细菌包含布鲁氏菌属细菌。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述布鲁氏菌属细菌菌株包含猪布鲁氏菌 (B. Suis)或马尔他布鲁氏菌(B. melitensis)。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述基因是对所述细菌内源的基因。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述基因是对所述细菌的噬菌体内源的基因。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述调节序列包含SEQID N0:396中列出的核酸序列的至少100个核苷酸。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述调节序列包含SEQID N0:396中列出的序列。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述调节序列进一步包含SEQIDN0:397中列出的序列。
22.根据权利要求14所述的方法，其中所述调节序列的侧面有转座子序列。
23.—种包含根据权利要求2所述的分离多核苷酸的核酸构建体。
24.根据权利要求23所述的核酸构建体，包含SEQID N0:396中列出的核酸序列。
25.根据权利要求23所述的核酸构建体，其中所述核酸序列的侧面有转座子序列。
26.一种核酸构建体，包含i.编码可操作地融合到布鲁氏菌启动子上的目的基因的多核苷酸； .融合到所述启动子5’端上的第一布鲁氏菌噬菌体序列，所述第一序列包含SEQ ID NO:394中列出的核酸序列的至少100个核苷酸；和iii.融合到所述目的基因3’端上的第二布鲁氏菌噬菌体序列，所述第二序列包含SEQ ID NO:395中列出的核酸序列的至少100个核苷酸。
27.根据权利要求26所述的核酸构建体，其中所述目的基因编码治疗性多肽。
28.根据权利要求26所述的核酸构建体，其中所述目的基因编码可检测部分。
29.根据权利要求28所述的核酸构建体，其中所述目的基因包含在Lux操纵子中。
30.一种重组布鲁氏菌曬菌体,所述重组布鲁氏菌曬菌体通过输出可检测信号鉴定布鲁氏菌属细菌。
31.根据权利要求30所述的重组布鲁氏菌噬菌体，其中所述可检测信号是发光信号。
32.根据权利要求30所述的重组布鲁氏菌噬菌体，具有裂解活性。
33.根据权利要求30所述的重组布鲁氏菌噬菌体，其中所述噬菌体的基因组包含编码所述可检测信号的多核苷酸序列。
34.一种分离布鲁氏菌属细菌细胞，包含根据权利要求30至33中任一项所述的重组布鲁氏菌噬菌体。
35.一种诊断受验者的布鲁氏菌感染的方法，所述方法包含使所述受验者的样品与根据权利要求30所述的重组布鲁氏菌噬菌体接触，从而诊断所述布鲁氏菌感染。
36.一种诊断受验者的布鲁氏菌感染的方法，所述方法包含使所述受验者的样品与根据权利要求34所述的分离布鲁氏菌属细菌细胞接触，从而诊断所述布鲁氏菌感染。
全文摘要
本发明公开了包含布鲁氏菌噬菌体核酸序列的分离多核苷酸，该核酸序列对布鲁氏菌噬菌体有特异性并包含选自由SEQ ID NO387-393组成的组中的序列。示例性多核苷酸序列是包含SEQ ID NO396中列出的核酸序列的至少100个连续核苷酸的多核苷酸序列。进一步公开了此种序列的用途。
文档编号C07H21/00GK102933594SQ201080055381
公开日2013年2月13日 申请日期2010年10月7日 优先权日2009年10月7日
发明者梅纳赫姆·鲍瑙伊, 瓦莱里娅·斯特拉达, 斯韦特兰娜·巴登斯坦, 伊扎克·本-阿索利, 费尔哈特·奥斯曼 申请人:以色列农业与农村发展部，吉姆若恩兽医协会