专利名称：一种卡培立肽的纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽药物的纯化方法，特别涉及卡培立肽的纯化方法，属于药物化学领域。
背景技术：
急性心功能衰竭(包括慢性心衰急性加重)心衰是指是由于能量不足造成基因表达异常而引起的一种超负荷心肌病，终因能量不足、心肌缺血、心肌细胞的凋亡，心肌收缩单位减少，使得这种超负荷进入恶性循环。卡培立肽，商品名为卡哌利汀，为28个氨基酸组成的一种循环调节激素，其分子式为H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg- Met - Asp -Arg -IIe-Gly-A la-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH。卡培立妝作为一种治疗急性心功能衰竭(包括慢性心功能衰竭加重)的多肽药物，它通过刺激心肌伸展，由心室内颗粒合成的，然后通过冠静脉分布全身，作用于血管平滑肌和肾脏等组织，调节血压和体内电解质平衡。临床试验证明，卡培立肽在血管平滑肌及肾等组织中与GC-A受体结合，活化鸟苷酸环化酶，使环-磷酸鸟苷增多，而引起血管扩张和利尿用。目前，关于卡培立肽的研究报道较少，国内外专利数目不多，仅有的几篇专利也多数是采用基因重组技术合成卡培立肽，涉及卡培立肽纯化工艺的专利仅有一篇，公开号CN102382188A。该专利公布了一种采用磷酸缓冲液纯化、醋酸盐转盐的卡培立肽纯化工艺，但用磷酸缓冲盐纯化过程中，杂质难以得到有效控制，进而影响纯度和收率；用醋酸转盐的过程中，发现卡培立肽盐酸盐稳定性较差。采用现有技术CN102382188A的方法纯化卡培立肽，纯度只能达到98. 5%，总收率约32. 1%左右，较难达到成药的纯度和产业化生产的收率。本发明设计新纯化方案，选择新的流动相系统，采用硫酸盐纯化，盐酸转盐，使纯度达到99. 65%以上，收率提高到40%以上，显著提高了收率、纯度和更高的稳定性，更易于制药使用和工业化生产。
发明内容
本发明针对现有工艺缺陷，如醋酸盐不稳定、杂质难以分离、不利于放大生产等等，旨在提供一种成本低廉、高收率、工艺过程简单、样品杂质少且稳定可控、有利于实现产业化的卡培立肽纯化工艺。为实现上述目的，本发明采取以下技术方案一种卡培立肽的纯化方法，包括以下步骤
步骤I):用含有机溶剂的水溶液溶解样品(该步骤后述简称为“样品处理”)，制备得到浓度为100g/L的溶液；
步骤I)中，所述的溶解样品所用的有机溶剂为极性强的有机溶剂，包括甲醇、乙腈、二甲基亚砜(DMS0)、或异丙醇等，其中优选DMS0，有机溶剂的体积比浓度为3% 18%，优选5%-15%，更优选是 8%-12%。
申请人发现，由于卡培立肽本身结构组成的特征，粗品中容易含有各种合成不完全、或消旋化杂质，因此粗肽样品的溶解试剂要求很苛刻。经申请人反复试验后发现，有机溶剂含量在39Γ18% (ν/ν)范围内时，样品溶解性较好，浓度能达到20g/L以上，有机溶剂含量在8%-12% (v/v)范围时，效果最佳浓度能达到40g/L以上；而在摸索不同有机试剂时发现，DMS0、甲醇、乙腈、异丙醇等较强极性的有机试剂对样品的溶解效果较好，其中又以DMSO效果最佳，浓度能达到50g/L以上。当样品溶液浓度达到20g/L以上，有利于样品的上样和后续分离，优选100g/L的溶液。步骤2):以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以含高氯酸的硫酸缓冲盐为A相，乙腈为B相，梯度体积比浓度B%为17% 37%，进样，进行梯度洗脱(该步骤后述简称为“纯化”);
步骤2):使用该洗脱体系，可以有效的保证分离效果和纯化收率，其中，特别是当洗脱 体系中B%不在17% 37%范围内，易导致样品不挂柱或提前冲出，达不到分离效果(该步骤后述简称为“纯化”)。现有技术CN102382188A纯化方法收率低，纯度能达98. 5%，而本发明纯化收率可达70%以上，收率有大幅提高，纯度99. 5%以上且任一杂质不大于O. 1%，可以用来标定工作标准品和进行药品注册申报。步骤2)中，所述的硫酸缓冲盐为加有O. 1% — O. 8% (v/v)高氯酸的IOmmol/L-50mmol/L硫酸缓冲盐溶液。在对卡培立肽进行纯化过程中，申请人对不同流动相体系进行分析、对比，找寻最佳的流动相体系。过程中发现，大多数流动相体系只能单纯的除掉部分杂质，一次在纯化过程中为了保证纯度，往往要反复进行多次繁琐的回收纯化才能达到合乎要求的纯度；经过申请人的反复摸索，最终发现加入O. 1%—0.8% (v/v)高氯酸的10mmol/-50mmol/L硫酸盐缓冲体系,对除去粗肽中的杂质效果明显,只需一次纯化、一次回收，省去多步重复操作。步骤2)中，所述的硫酸缓冲盐包括硫酸铵或硫酸三乙胺。硫酸缓冲盐溶液用氢氧化钠或氢氧化钾或氨水调pH2. 0-3. O。申请人发现,卡培立肽对于pH值的要求较为苛刻，pH值高于5时，样品容易析出，pH值低于I时，样品稳定性变差，在室温下I小时内HPLC纯度会降低约2%左右。经过反复试验，发现pH2. 0-3. O时，样品稳定性最佳，在室温下I小时内HPLC纯度几乎不变。步骤3):将卡培立肽硫酸盐转成盐酸盐，采用反相HPLC方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，梯度洗脱，冻干得到卡培立肽(该步骤后述简称为“转盐”)。步骤3)中，所述的转盐包括下述两步骤用体积比95 5的盐酸缓冲盐的水溶液与乙腈的混合溶液转盐20min，所述的盐酸缓冲盐的水溶液中盐酸缓冲盐的体积比浓度为O. 02%-0· 1%、pH值范围为2. 0-4. 5 ;后用体积比浓度为O. 02%_0· 5%的盐酸水溶液为A相，乙腈为B相，以体积比浓度B%为5% 25%，进行梯度洗脱30min。申请人:发现，盐酸缓冲盐浓度低于O. 02%时，或高于O. 1%时，样品不稳定在室温下I小时内HPLC纯度会降低约2%左右。盐酸体系中，盐酸缓冲盐pH值范围为2. 0-4. 5时，样品均很稳定，在室温下I小时内HPLC纯度几乎不变。其中，盐酸铵配置体积比为O. 029Γ0. 1%的盐酸水溶液,用氨水调pH值2. (Γ4. 5即可。本发明中发现转盐低于20分钟转盐不彻底，达不到转盐要求。超过20分钟会导致生产时间延长和物料浪费，增加生产成本。步骤3)中，所述的反相HPLC的梯度，体积比浓度B%为5% 25%，进行梯度洗脱，时间为30min。申请人发现，该洗脱体系中B%低于5%样品无法从色谱柱上冲洗下来，B%高于25%虽可以将样品冲洗下来，但不能提高其纯度且会导致有机相的使用量增加，增加了生产成本，在规模化生产时尤为明显。洗脱低于30分钟会降低此步的分离效果，纯度无法达到99. 5%或以上，超过30分钟会使生产时间延长和增加物料的使用量，从而导致生产成本的增加。本发明此步骤不仅进行了转盐和脱盐，而且还将纯度提高到99. 5%以上。说明书中v/v指的是体积比浓度，二者使用相同的体积单位，例如mL。使用该洗脱洗脱是根据卡培立肽本身的极性，经过大量的实验筛选得到。如果浓 度更低会增加纯化时间，增大纯化成本；如果更高就不能好的转盐效果。本方法通过纯化，分别除去卡培立肽粗品中的杂质使纯度大于99. 65%、单杂小于
O.1%、并转成稳定的盐酸盐，工艺稳定可控、纯度高、产率高，稳定性好，具有广泛的实用价值和应用前景。
图I :采用实施例2、7、14方法得到卡培立肽精肽谱图
图2 :采用实施例2、7、14方法得到卡培立肽粗肽谱图对应的数据
具体实施例方式实施例I样品处理
用体积比3%的DMSO水溶液按照100g/L的浓度溶解粗肽，搅拌使样品完全溶解后用滤膜过滤,收集滤液。实施例2 样品处理
用体积比10%的乙腈水溶液按照100g/L的浓度溶解粗肽，搅拌使样品完全溶解后用滤膜过滤,收集滤液。实施例3样品处理
用体积比18%的甲醇水溶液按照100g/L的浓度溶解粗肽，搅拌使样品完全溶解后用滤膜过滤,收集滤液。实施例4样品处理
用体积比10%的DMSO水溶液按照100g/L的浓度溶解粗肽，搅拌使样品完全溶解后用滤膜过滤,收集滤液。实施例5样品处理
用体积比10%的异丙醇水溶液按照100g/L的浓度溶解粗肽，搅拌使样品完全溶解后用滤膜过滤,收集滤液。实施例6纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm。流动相A相加有0. 1%高氯酸的10mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氢氧化钠调ρΗ2· O ;Β相:乙腈，流速:60-80 ml/min，梯度B% 18% 28%，线性梯度洗脱30min ；检测波长230 nm。进样量为I. 5g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例7纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm。流动相A相加有O. 3%高氯酸的25mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氢氧化钾调pH2. 5 ;Β相:乙腈，流速:60-80 ml/min,梯度B% 18% 28%，线性梯度洗脱30min ；检测波长230 nm。进样量为I. 5g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例8纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm。流动相A相加有O. 8%高氯酸的50mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氨水 调ρΗ3· O ;Β相:乙腈，流速:60-80 ml/min,梯度B% 18% 28%，线性梯度洗脱30min ;检测波长230 nm。进样量为I. 5g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例9纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为10 cm X 25 Cm。流动相A相加有O. 3%高氯酸的20mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氢氧化钠ρΗ3· O ；Bffi :乙腈，流速:220-250 ml/min，梯度B% :18% 28%，线性梯度洗脱30min ；检测波长230 nm。进样量为15_20g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 V的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例10纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为10 cm X 25 Cm。流动相A相加有O. 5%高氯酸的50mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氢氧化钾调PH2. O ；B相乙腈，流速220-250 ml/min，梯度B% :18% 28%，线性梯度洗脱30min ;检测波长230 nm。进样量为15_20g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例11纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为15 cm X 30cm。流动相A相加有O. 25%高氯酸的45mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氨水调pH2. 6 ;Β相:乙腈，流速:450-500 ml/min,梯度B% 18% 28%，线性梯度洗脱30min ;检测波长230 nm。进样量为15_20g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °〇的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例12纯化
纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30 cm X 30cm。流动相A相加有O. 23%高氯酸的32mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氢氧化钾调ρΗ2· O ；Β相乙腈，流速=1900-2200 ml/min，梯度B% :18% 28%，线性梯度洗脱30min ;检测波长230 nm。进样量为60_855g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例13纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30 cm X 30 cm。流动相A相加有O. 18%高氯酸的45mmol/L硫酸盐缓冲(v/v),用氨水调pH2. 5 ;B相乙腈，流速1900-2200 ml/min,梯度B% 18% 28%，线性梯度洗脱30min ;检测波长230 nm。进样量为60_85g。收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C的条件下减压旋蒸浓缩至约15 mg/mL后备用。实施例14转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm。流动相A相O. 02%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈；C相0. 02%盐酸胺，ρΗ2· 0，流速:80ml/min，检测波长:230 nm。进样量为I. 5g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V)，线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 1条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 75%的卡培立肽， 其它杂质均小于O. 07%,收率为42. 5%。实施例15转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm。流动相A相O. 05%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0. 05%盐酸胺，PH2. 5，流速60 ml/min，检测波长230 nm。进样量为I. 5g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 68%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为41. 3%。实施例16转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm ο流动相A相O. 1%盐酸水溶液(v/v) ;B相:乙腈,C相:0. 08%盐酸胺,ρΗ3· 0，流速80 ml/min ;检测波长:230 nm。进样量为I. 5g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 68%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为41. 5%。实施例17转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为10 cm X 25 Cm O流动相A相O. 06%盐酸水溶液(v/v) ;B相:乙腈,流速220ml/min,检测波长230 nm。进样量为10_15g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 66%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为40. 8%。实施例18转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为10 cm X 25 cm。流动相A相0· 03%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0. 10%盐酸胺，PH4. 5，流速250 ml/min，检测波长230 nm。进样量为15_20g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 72%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为39. 5%。实施例19转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为15 cm X 30 cm。流动相A相O. 09%盐酸水 溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0· 07%盐酸胺，ρΗ3· 2，流速:400ml/min，检测波长:230 nm。进样量为15_20g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V)，线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 1条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 70%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为40. 5%。实施例20转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为15 cm X 30 cm。流动相A相O. 65%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0.06%盐酸胺，PH2. 0，流速450 ml/min，检测波长230 nm。进样量为15_20g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 70%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为39. 7%。实施例21转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30 cm X 30 cm。流动相A相O. 32%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0.05%盐酸胺，ρΗ2· 5，流速:1900ml/min，检测波长:230 nm。进样量为60_85g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 72%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为40. 6%。实施例22转盐
色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30cm X 30 cm。流动相A相O. 10%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0.02%盐酸胺，pH2. 0，流速2200 ml/min，检测波长230 nm。进样量为60_85g。步骤用5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 70%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为40. 2%。实施例23转盐色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30 cm X 30 cm。流动相A相O. 08%盐酸水溶液(v/v) ;B相乙腈，C相0.68%盐酸胺，ρΗ2· 3，流速:2000 ml/min，检测波长:230 nm。进样量为60_85g。步骤用 5%B+95%C (V/V)转盐 20min 后，用 5%B+95%A 25% B+75%A (V/V),线 性梯度洗脱30min ;收集目的峰，将收集的卡培立肽溶液于水温30 °C条件下减压旋蒸浓缩至约50-200 mg/mL后转至50ml西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于99. 70%的卡培立肽，其它杂质均小于O. 08%,收率为39. 8%。
权利要求
1.一种卡培立肽的纯化方法，包括以下步骤 步骤I):用体积比浓度为39Γ18%的极性强的有机溶剂的水溶液溶解样品，制备得到浓度为100g/L的溶液； 步骤2)以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以加体积比O. 1% — O. 8%的高氯酸的10mmol/L-50mmol/L硫酸缓冲盐溶液为A相，乙腈为B相，体积比浓度B%为17% 37%，进样步骤I)制得的溶液，进行梯度洗脱； 步骤3):将卡培立肽硫酸盐转成盐酸盐，采用反相HPLC方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，梯度洗脱，冻干得到卡培立肽。
2.根据权利要求I所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤I)有机溶剂为甲醇、乙腈、二甲基亚砜、或异丙醇。
3.根据权利要求I所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤I)中有机溶剂体积比含量为5%-15%，更优选是8%-12%。
4.根据权利要求2所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤I)中有机溶剂体积比含量为5%-15%，更优选是8%-12%。
5.根据权利要求I至4任意一项所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤2)中，硫酸缓冲盐是指硫酸铵或硫酸三乙胺，硫酸缓冲盐溶液用氢氧化钠或氢氧化钾或氨水调 pH2. 0-3. O。
6.根据权利要求I至4任意一项所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤3)中包括下述两步骤用体积比95 5的盐酸缓冲盐的水溶液与乙腈的混合溶液转盐20min，所述的盐酸缓冲盐的水溶液中盐酸缓冲盐的体积比浓度为O. 02%-0. 1%、pH值范围为2. 0-4. 5 ;后用体积比浓度为O. 02%-0. 5%的盐酸水溶液为A相，乙腈为B相，以体积比浓度B%为5% 25%，进行梯度洗脱，进行梯度洗脱30min。
7.根据权利要求5所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述步骤3)中包括下述两步骤用体积比95 5的盐酸缓冲盐的水溶液与乙腈的混合溶液转盐20min,所述的盐酸缓冲盐的水溶液中盐酸缓冲盐的体积比浓度为O. 02%-0. 1%、pH值范围为2. 0-4. 5 ;后用体积比浓度为O. 02%-0. 5%的盐酸水溶液为A相，乙腈为B相，以体积比浓度B%为5% 25%,进行梯度洗脱,进行梯度洗脱30min。
8.根据权利要求6所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述盐酸缓冲盐为盐酸胺。
9.根据权利要求7所述一种卡培立肽的纯化方法，其特征在于所述盐酸缓冲盐为盐酸胺。
全文摘要
本发明提供了一种卡培立肽的纯化方法，包括以下步骤步骤1)用体积比浓度为3%~18%的极性强的有机溶剂的水溶液溶解样品，制备得到浓度为100g/L的溶液；步骤2)以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以加体积比0.1%—0.8%的高氯酸的10mmol/L-50mmol/L硫酸缓冲盐溶液为A相，乙腈为B相，体积比浓度B%为17%～37%，进样步骤1)制得的溶液，进行梯度洗脱；步骤3)将卡培立肽硫酸盐转成盐酸盐，采用反相HPLC方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，梯度洗脱，冻干得到卡培立肽。本发明的目的是提供一种工艺稳定可控、高收率、纯度高、具有广泛的实用价值和应用前景的卡培立肽的纯化方法。
文档编号C07K14/58GK102875664SQ20121035396
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月21日 优先权日2012年9月21日
发明者黄志云, 刘建, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司