人源化免疫调节单克隆抗体的变体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及人源化单克隆抗体，包含该人源化单克隆抗体的药物组合物，和其用于治疗多种适应症、特别是癌症和免疫缺陷疾患的用途。特别地，本发明提供了与被称为hBAT-1的人源化单克隆免疫调节抗体相比，具有特定氨基酸修饰的经修饰的抗体或其片段。
【专利说明】人源化免疫调节单克隆抗体的变体
发明领域
[0001]本发明涉及免疫治疗领域且更具体地涉及用于多种适应症的治疗、特别是在癌症和免疫缺陷疾患的治疗中有用的人源化单克隆抗体。
[0002]发明背景
[0003]最近几年中，关于免疫调节、特别是在T细胞应答水平的分子和细胞基础的快速增长的了解，提供了包括抗肿瘤疫苗的研发的免疫治疗方法的新的武器(arsenal)。某些单克隆抗体显示具有免疫调节活性，包括结合T细胞的表面的决定簇和诱导这些细胞的增殖、活化、成熟或分化的能力。
[0004]BAT (也称为mBAT-Ι或BAT-1)是针对Burkitt淋巴瘤细胞系(Daudi)的膜制备物产生的显示呈现针对多种类型的肿瘤的抗肿瘤和免疫刺激效果的鼠(murine)单克隆抗体(Hardy等人,2001，Int.J.0ncol.19:897)。该单克隆抗体最初在Hardy等人的美国专利号5，897，862中被公开。BAT-1由具有CNCM登录号1-1397的杂交瘤细胞系分泌。还体外研究了鼠BAT的免疫调节作用。鼠BAT活化⑶4+T细胞并诱导IFN- Y从这些细胞的分泌(Hardy等人，2000，Int.1mmunol.12:1623 和 Quaglino E.等人，2005，Vaccine9:23 (25): 3280-7)。另外，发现BAT触发T细胞的增殖并增加它们的细胞溶解活性(Hardy，B.等人，1997，Hum.Antibodies, 8:95)。
[0005]在Hardy等人的W000/58363和美国专利号7，695，715中公开了鼠BAT的多核苷
酸和氨基酸序列。
[0006]基于鼠BAT的一些人源化单克隆抗体(mAb)在美国专利号7，332，582中被公开，其内容通过引用并入本文。在美国7，332，582的特定实施方案中，人源化单克隆抗体包含选自SEQ ID NO: 1-4的轻链可变区(分别表示为BATRKD、BATRKa, BATRKb和BATRK。)和选自SEQ ID NO: 5-9 的重链可变区(分别表`示为 BATRH。、BATRHa, BATRHb, BATRHd 和 BATRHe)。在本文以下的表1中描绘轻链和重链抗体变体的氨基酸序列。用灰色背景描绘所述可变区中不同的残基(轻链区的位置2、30、69、77、97和98和重链的位置35、69、70和71)。
[0007]根据美国7，332，582，人源化单克隆BAT抗体呈现诱导大于由亲本鼠BAT抗体诱导的抗肿瘤作用的抗肿瘤作用。在检测的多种模式系统中，在SCID (严重联合免疫缺陷型疾病)小鼠、NK细胞缺陷的浅褐色小鼠和T细胞缺陷的裸鼠(nude mice)中研究了 BAT抗肿瘤活性(Hardy, B.，1997, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA94:5756)。用随后在肺中形成肿瘤的鼠B16黑色素瘤细胞静脉注射所有小鼠。BAT抗体仅在用鼠或人淋巴细胞移植的SCID小鼠中发挥抗肿瘤作用。在无胸腺裸鼠和浅褐色小鼠中BAT抗体发挥抗肿瘤活性，尽管与BAT抗体在野生型小鼠中的抗肿瘤活性相比，该活性的效果更低。
[0008]应该牢牢记住的是BAT抗体不是预期祀向肿瘤细胞本身而是祀向受试者或患者的免疫功能细胞，以便以有益的方式调节免疫应答。
[0009]Berger等人(2008 )公开了向患有晚期血液系统恶性肿瘤的患者施用基于mBAT-Ι的人源化单克隆抗体CT-Oll和相关的药代动力学(Berger等人，Clin.CancerRes.2008; 14 (10) 2008 年 5 月 15 日)。[0010]W009/101611涉及用于抑制肿瘤生长、增加患有肿瘤的受试者的存活并针对哺乳动物中肿瘤复发诱导保护的方法，包括施用包含源自指定为mBAT-Ι的鼠单克隆抗体的CDR区的人源化单克隆抗体与至少一种化疗剂的组合。
[0011]在任何地方的【背景技术】中都没有教导或表明，使用包含至少一个位点特异性的氨基酸修饰的人源化mBAT-Ι单克隆抗体将对多种适应症的治疗、特别是在癌症和免疫缺陷相关的疾病和疾患的治疗中是有益的。
[0012]发明概述
[0013]本发明提供了突变的人源化单克隆抗体或其片段，与已知的人源化单克隆抗体hBAT-Ι相比，其具有位点特异性氨基酸修饰，包括但不限于，氨基酸取代和缺失。本发明还提供了包含经修饰的抗体或其片段的药物组合物，和其用于癌症和免疫缺陷疾患的治疗的用途。在一些实施方案中，本发明的经修饰的抗体保持hBAT-Ι的免疫调节活性，结合B淋巴母细胞并诱导外周血淋巴细胞的增殖和活化。
[0014]本发明的抗体凭借hBAT-Ι抗体变体的至少一个氨基酸的特定修饰，如本文以下的详细说明，显示优越的特征，例如，增强的生物活性和稳定性和/或减少的免疫原性。
[0015]表1=已知的hBAT二I轻链和重链的可夺区和恒定区
[0016]`
【权利要求】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含选自由SEQ ID NO: K2、3和4组成的组的轻链可变区和选自由SEQ ID NO: 5、6、7、8和9组成的组的重链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自以下位置处的至少一个氨基酸取代:所述轻链可变区的Phe97和Phe93到Ala、Leu或Val，或所述重链可变区的Trpl07到Ala、Leu、Val或Tyr的取代。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含所述轻链可变区的Phe97的氨基酸取代和所述重链可变区的Trp 107的氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含所述轻链可变区的Phe93的氨基酸取代和所述重链可变区的Trp 107的氨基酸取代。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列:SEQ ID N0:14、15、16、17、18、19、20和21。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含如在SEQID NO: 14或15中任一项中展示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含如在SEQID NO:29中展示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含如在SEQID NO:30中展示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1 所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列:SEQ ID NO:24、25、26、27和28。
9.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含如在SEQID NO:24中展示的氨基酸序列。
10.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含如在SEQID NO: 31中展示的氨基酸序列。
11.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段还包含选自由以下组成的组的位置处的至少一个氨基酸修饰:所述轻链可变区的Thr5、Thr20、Cys71、Asn75和Ser76和所述重链可变区的Asp54和Ser55。
12.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区的组合，所述组合选自由以下组成的组:SEQ ID NO:5/SEQ IDNO:USEQ ID N0:6/SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:7/SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:7/SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:8/SEQ ID NOUPSEQ ID N0:7/SEQ ID NO:1。
13.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含对应于SEQ ID N0:5/SEQ ID NO:1的可变区。
14.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有与mBAT-Ι相似的、或大于mBAT-1的抗肿瘤活性。
15.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有与hBAT-Ι相似的、或大于hBAT-Ι的抗肿瘤活性。
16.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化抗体的所述片段选自由以下组成的组:Fv、F (ab')、F (ab') 2和单链抗体。
17.—种编码根据权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段的多核苷酸序列。
18.—种包含根据权利要求17所述的多核苷酸序列的载体。
19.一种含有根据权利要求18所述的包含多核苷酸序列的载体的宿主细胞。
20.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段作为活性成分、和药学上可接受的载体、稀释剂或稳定剂。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗癌症。
22.一种用于治疗有相应需要的受试者的癌症或免疫缺陷疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求20所述的药物组合物。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述受试者患有选自实体瘤或非实体瘤的肿瘤。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述受试者患有非实体瘤。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述受试者患有恶性血液病。
26.根据权利要求23所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组:结肠直肠癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)、乳腺癌；黑色素瘤；卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、头颈癌、胃肠道癌、食管肿瘤、肝细胞癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、前列腺肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、套细胞淋 巴瘤、卡波济氏肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组:结肠直肠癌、黑色素瘤、胰腺癌、头颈癌、食管肿瘤、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、非霍奇金淋巴瘤和霍奇金病。
28.包含选自SEQID NO: 1-4的轻链可变区和选自SEQ ID NO:5-9的重链可变区的抗体或其抗原结合片段用于制备用于治疗肿瘤的药剂的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自以下位置处的至少一个氨基酸取代:所述轻链可变区的Phe93和Phe97到Ala、Leu或Val,或所述重链可变区的Trpl07到Ala、Leu、Tyr或Val的取代。
【文档编号】C07K16/28GK103687877SQ201280033970
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年7月23日 优先权日:2011年7月24日
【发明者】R·罗泰姆-耶胡达, 迈克尔·席克勒尔 申请人:治疗科技公司