一种促皮质素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种以哺乳动物脑垂体前叶为原料，提取促皮质素的制备方法。将哺乳动物脑垂体前叶经干燥、研磨成粉后，添加有机溶剂、无机酸提取，过滤去杂蛋白等步骤，得到促皮质素。该技术的优点在于操作简单，成本低，产品的效价达到2单位/mg。
【专利说明】一种促皮质素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体地说涉及一种制备促皮质素的方法。
【背景技术】
[0002]促皮质素是从猪、牛、羊等动物的脑垂体前叶中提取出来的一种多肽类药物，呈白色或淡黄色粉末，无臭，有吸湿性，易溶于水，在干燥和酸性溶液中较稳定，100°c加热活力不减，在碱性溶液中容易失活。
[0003]促皮质素是维持肾上腺正常形态和功能的重要激素。促皮质素能刺激肾上腺皮质合成和分泌氢化可的松、皮质酮等，故临床用途与皮质激素基本相同。在极少数情况下用皮质激素疗效不佳时，改用促皮质素后有较好疗效。
[0004]除此之外，促皮质素还有兴奋肾上腺皮质功能。长期应用皮质激素在停药前或肾上腺皮质功能亢进实施肾上腺术后，可短期应用促皮质素，以兴奋肾上腺皮质的功能。促皮质素试验，原发性肾上腺皮质功能减退者，对本品无反应。继发性肾上腺皮质功能减退者，在滴注促皮质素3~5日后，类固醇的排出量逐渐增加，呈延迟反应。此试验还有助于区分肾上腺皮质功能亢进者的病理性质。如为双侧皮质增生，反应常高于正常；如为皮质腺瘤，反应正常或稍高；如为皮质腺癌则无明显反应。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供了一种促皮质素的制备方法。其技术方案是:将哺乳动物脑垂体经脱水干燥、取垂体前叶研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，过滤去杂蛋白等步骤得促皮质素，包括如下步骤:
[0006](I)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3-5次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，真空干燥，磨粉，得前叶干粉；
[0007](2) 一次提取:取前叶干粉，按1:5-1:10的比例加入丙酮，再按1:2_1:5的比例，加入0.5mol/L-5mol/L盐酸溶液，搅拌溶解，加热至40°C -60°C，保温20-40分钟，然后冷却至10-25°C，离心20-40分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至1_5°C ；
[0008](3) 二次提取:将一次提取中的渣子再加入步骤(2) —半量的丙酮0.05mol/L~
0.5mol/L盐酸溶液，搅拌溶解，加热至40°C~60°C，保温20~40分钟，然后冷却至10~250C，离心20~40分钟，去渣过滤，取上清液；
[0009](4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至I~5°C，过滤至澄清；加入5~10倍量体积的丙酮，沉淀10~30分钟后，去上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤2~5次；
[0010](5)干燥:真空干燥，即得促皮质素成品。
[0011]本发明的优点和积极效果:
[0012]本制备方法的的优势之处在于，工艺简单，成本低，过程温和，制得的促皮质素的效价达到2单位/mg【具体实施方式】
[0013]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0014]实施例1
[0015]所述的利用将哺乳动物脑垂体经脱水干燥、研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，去杂蛋白过滤等步骤得促皮质素，包括如下步骤:
[0016](I)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，分别干燥，磨粉，得前叶干粉；
[0017](2) 一次提取:取3.2kg前叶干粉，加入22.4L丙酮，在搅拌下加入IOL的lmol/L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至50°C，保温28分钟，然后冷却至18°C，离心30分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至3 °C ；
[0018](3) 二次提取:将一次提取中的渣子加入11.2L丙酮，搅拌下加入5L的0.lmol/L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至50°C，保温30分钟，然后冷却至20°C，离心25分钟，过滤，取上清液；
[0019](4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至:TC，过滤至澄清；加入336L丙酮，沉淀15分钟后，吸出上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤3次；
[0020](5)干燥:真空干燥，天平称重即得促皮质素成品230g。
[0021]实施例2[0022](I)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水4次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，分别干燥，磨粉，得前叶干粉；
[0023](2) 一次提取:取3.6kg前叶干粉，加入21.6L丙酮，在搅拌下加入8L的lmol/L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至40°C，保温35分钟，然后冷却至25°C，离心20分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至2 °C ；
[0024](3) 二次提取:将一次提取中的渣子加入10.8L丙酮，搅拌下加入4L的0.lmol/L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至40°C，保温35分钟，然后冷却至20°C，离心20分钟，过滤，取上清液；
[0025](4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至2 V，过滤至澄清；加入200L丙酮，沉淀20分钟后，吸出上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤5次；
[0026](5)干燥:真空干燥，天平称重即得促皮质素成品248g。
[0027]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【权利要求】
1.一种促皮质素的制备方法，其特征在于:将哺乳动物脑垂体前叶经脱水干燥、研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，过滤去杂蛋白等步骤，得促皮质素。
2.根据权利要求1所述的制备促皮质素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: (1)原料处理:将哺乳动物的脑垂体取出后，用丙酮浸泡脱水，至垂体变硬，分离出前叶；真空干燥，磨粉； (2)一次提取:取前叶干粉，加入有机溶剂、无机酸，搅拌溶解，然后加热、保温、冷却，离心过滤取上清液，； (3)二次提取:将一次提取中的渣子再次加入步骤(2) —半量的有机溶剂和无机酸，搅拌溶解，然后加热、保温、冷却，离心过滤取上清液，预冷； (4)沉淀:合并两次上清液，冷却，过滤，加入有机溶剂进行沉淀，沉淀完成后，去上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤； (5)干燥:真空干燥，得促皮质素成品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(1)中，所述的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、马中的一种，优选为猪、牛、羊。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，有机溶剂为丙酮，前叶干粉与有机溶剂的重量比为1:5至1:10 ;无机酸为0.5mol/L~5mol/L盐酸溶液，前叶干粉与无机酸的重量比为1:2至1:5。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，有机溶剂为丙酮，前叶干粉与有机溶剂的重量比为1:6至1:8 ;无机酸为2mol/L~3mol/L盐酸溶液,前叶干粉与无机酸的重量比为1:3至1:4。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)、步骤(3)中，加热至40°C~60°C，保温20~40分钟，然后冷却至10°C 2~25°C，离心过滤上清液预冷至I~5°C。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于:步骤(2)、步骤(3)中，加热至50°C~55°C，保温30分钟，然后冷却至15°C~20°C，离心过滤上清液预冷至I~2°C。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤⑷上清液冷却至I~5°C;用有机溶剂丙酮沉淀，上清液与丙酮的体积比例为1:5至1:10，沉淀10~30分钟。
9.一种由权利要求1-8任意之一所述的方法制备得到的促皮质素。
【文档编号】C07K14/695GK103694341SQ201310613227
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年11月23日 优先权日:2013年11月23日
【发明者】刘乃山, 葛翠凤, 刘翠珍, 张晓涵 申请人:青岛康原药业有限公司