一种替可克肽脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明属于药物合成【技术领域】，公开了一种可以通过喷雾剂形式经鼻给药的替可克肽脂质体，其具有吸收迅速、起效快、生物利用度高、疗效确切、使用方便的特点，有效地避免了药物的肝首过效应，同时也避免了注射给药的不顺应性。此外，本发明还公开了制备上述替可克肽脂质体的方法，其采用薄膜蒸发-高压均质法进行制备。
【专利说明】一种替可克肽脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物合成【技术领域】，具体涉及一种替可克肽脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]替可克肽(Tetracosactide)为人工合成的24肽促皮质素类似物,氨基酸的排列顺序和天然促皮质素(人、牛、猪)氨基端24个氨基酸相同，与天然ACTH(促肾上腺皮质激素)具有相同的生理活性。最突出的特点是一般情况下不会产生抗体反应，无严重副作用，特别适用于对天然猪促皮质素有过敏反应或无效的患者。替可克肽能诱导肾上腺增生，刺激肾上腺皮质激素，尤其是氢化可的松(皮质醇)和某些盐皮质激素如皮质酮的分泌，其也能刺激雄激素的分泌，但作用较弱，其对醛固酮的分泌则几无影响。替可克肽的半衰期为3小时。2008年FDA批准诺华的替可克肽用于肾上腺皮质功能减退症的诊断。目前RandboudUniversity正在研究其对特发膜性肾病的治疗作用。
[0003]鼻腔给药系统(nasal drug delivery system, NDDS)是指在鼻腔内使用、经鼻黏膜吸收而发挥局部或全身治疗作用的给药系统。近年来，不断有中药鼻腔给药用于卒中、偏头痛、哮喘、冠心病治疗的报道，发挥全身治疗作用的鼻腔给药制剂也受到广泛关注。由于鼻粘膜的药物吸收量很有限，常规的药物粉末或溶液很容易被鼻纤毛迅速清除，滞留时间短，生物利用度低，导致许多药物的鼻腔给药收效甚微。脂质体的出现解决了这一问题。
[0004]脂质体也叫微脂囊(liposome)，是一种人工膜。在水中时，脂质体的磷脂分子亲水头部插入水中，疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25~1000nm不等。脂质体可以和细胞膜融合，从而将药物送入细胞内部，因此脂质体可用于转基因和制备药物。脂质体作为一种鼻腔给药系统的新型载体，具有生物黏附性强，可持续缓慢释药，生物利用度高，刺激性小，不良反应小等优点，日益受到重视。
[0005]目前，脂质体作为一种制剂形式，已经报道在以下方面均有应用:作为易被消化酶分解的多肽类药物的载体，如神经生长因子(NGF)脂质体；作为小分子药物的包封载体，如低分子肝素脂质体、硝苯地平脂质体；作为鼻黏膜免疫佐剂，如流感病毒脂质体；作为长效缓释制剂，如盐酸普萘洛尔前体脂质体；作为大分子药物的包封载体，如叶加压素的脂质体；作为靶向性制剂，如干扰素脂质体。
[0006]目前醋酸替可克肽通过注射的方式给药，对病患产生较差的顺应性，特别是针对需要长期给药的患者，急需开发一种能够有效克服该缺陷的给药方式。
【发明内容】
[0007]本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，一方面提供了一种替可克肽脂质体，其包含治疗有效量的替可克肽或其药学上可接受的盐、脂相成分和药物辅料。
[0008]在本发明优选的实施方案中，替可克肽药学上可接受的盐包括替可克肽与有机酸或无机酸形成的盐，有机酸可以是双羟萘酸、枸橼酸、草酸、马来酸、富马酸、酒石酸等，无机酸可以是硫酸、氢溴酸、磷酸、硝酸等。[0009]在本发明一个优选的实施方案中替可克肽药学上可接受的盐是醋酸替可克肽。
[0010]在本发明的替可克肽脂质体中，替可克肽或其药学上可接受的盐在该脂质体中的重量百分比为0.05%-0.5%。
[0011]在本发明的替可克肽脂质体中，药物辅料包含吸收促进剂、渗透压调节剂、增稠剂、防腐剂和pH缓冲液。
[0012]在本发明优选的实施方案中，本发明的替可克肽脂质体，按重量百分比计算，由以下成分组成:
[0013]替可克肽或其药学上可接受的盐:0.05%-0.5% ；
[0014]氢化大豆卵磷脂:0.025-3% ;
[0015]胆固醇:0.001-1.5% ;
[0016]pH 缓冲液:0.1-10% ;
[0017]吸收促进剂:0.3-3% ;
[0018]渗透压调节剂:0.1-5% ；
[0019]防腐剂:0.05-0.5%，
[0020]增稠剂:0.05-1% ；
[0021]其余为注射用水。
[0022]其中，吸收促进剂可以选自(I)饱和或不饱和脂肪酸及其酯，如月桂酸、油酸、肉豆蘧酸、癸酸、月桂酸酯、辛酸酯、癸酸酯、棕榈酸酯、乳酸乙酯等；(2)醇类，如丙二醇、异丙醇、十六醇、月桂醇、油醇等；(3)吡咯酮类，如a-吡咯酮、N-甲基吡咯酮、N-乙基吡咯酮、5-羧基吡咯酮等；(4)亚砜类，如十二烷基甲基亚砜、二甲基亚砜等；(5)氮酮类，十二烷基氮卓酮、拢牛儿基氮卓酮等；(6)离子型、非离子型表面活性剂，如十二烷基硫酸钠、辛酸单甘油酯、吐温80、司盘20等。
[0023]pH缓冲液可以选自枸橼酸缓冲盐、醋酸缓冲盐等，用量优选为0.05~0.2mol/L。
[0024]防腐剂可以选自尼泊金乙酯、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸及其盐、山梨酸、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、硫柳汞、醋酸洗必泰和季铵化合物类阳离子表面活性剂等。
[0025]渗透压调节剂可以选自乳糖、葡萄糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇及它们的无机盐类。
[0026]增稠剂可以选自纤维素类衍生物，如羧甲基纤维素、羟丙基纤维素等；聚乙二醇类、聚维酮类等；聚丙烯酸、聚乙烯醇、卡波普等高分子化合物。
[0027]本发明的替可克肽脂质体通过喷雾剂的形式经鼻腔给药，每次给药剂量优选为
0.5mg ~3mg。
[0028]本发明另一方面还提供了制备本发明所述的替可克肽脂质体的方法，其包括如下步骤:
[0029](I)称取氢化大豆卵磷脂、胆固醇，加入乙醚和甲醇的混合溶剂、无水乙醇或者乙醚和无水乙醇的混合溶剂，冷冻干燥形成均匀类脂粉末；
[0030](2)加入含替可克肽或其药学上可接受的盐、吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂，PH缓冲液，增稠剂和溶剂的溶液5mL，涡旋振荡使类脂粉末分散；
[0031](3) 2-8°C温控条件下200pa高压均质2min ；
[0032](4)经0.2um微孔滤膜过滤，即得分散均匀的脂质体混悬液。[0033]本发明的替可克肽脂质体通过喷雾剂的形式经鼻给药，具有吸收迅速、起效快、生物利用度高、疗效确切、使用方便的特点，有效地避免了药物的肝首过效应，同时又避免了注射给药的不顺应性。
【专利附图】
【附图说明】
[0034]图1:大鼠醋酸替可克肽脂质体连续给药7天后纤毛毒性-中隔黏膜扫描电镜图。
[0035]图2:大鼠生理盐水连续给药7天后纤毛毒性-中隔黏膜扫描电镜图。
【具体实施方式】
[0036]下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
[0037]实施例1:醋酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0038]精密称取氢化大豆卵磷脂50mg，胆固醇50mg置于茄形瓶中，加人乙醚-甲醇(3:1, v/v)混合溶剂40mL,冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0039]加入含醋酸替可克肽45mg、十二烷基氮卓酮270mg、甘露醇900mg、尼泊金甲酯-尼泊金乙酯(1: 1，M/M) 45mg、醋酸盐缓冲液lmol/L、羟丙基纤维素60mg和溶剂的溶液50mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。 [0040]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0041]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0042]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0043]实施例2:醋酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0044]精密称取氢化大豆卵磷脂60mg，胆固醇IOOmg置于茄形瓶中，加人乙醚-甲醇(3:1, v/v)混合溶剂50mL,冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0045]加入含醋酸替可克肽55mg、拢牛儿基氮卓酮300mg、右旋糖苷1200mg、尼泊金甲酯-尼泊金乙酯(1: l，m/m)70mg、醋酸盐缓冲液0.75mol/L、轻丙甲纤维素75mg和溶剂的溶液50mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0046]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0047]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0048]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0049]实施例3:醋酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0050]精密称取氢化大豆卵磷脂60mg，胆固醇120mg置于茄形瓶中，加人乙醚-甲醇(4:1, v/v)混合溶剂50mL,冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0051]加入含醋酸替可克肽120mg、肉豆蘧酸720mg、山梨醇3600mg、苯甲酸120mg、枸橼酸盐缓冲液0.9mol/L、羧甲纤维素90mg和溶剂的溶液70mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0052]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0053]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0054]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0055]实施例4:枸橼酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备[0056]精密称取氢化大豆卵磷脂60mg,胆固醇180mg置于爺形瓶中，加人无水乙醇55mL,冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0057]加入含枸橼酸替可克肽200mg、月桂酸酯-辛酸酯(1:1, v/v) 800mg、葡萄糖4000mg、苯甲酸120mg、枸橼酸盐缓冲液1.2mol/L、聚乙烯醇150mg和溶剂的溶液65mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0058]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0059]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0060]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0061]实施例5:枸橼酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0062]精密称取氢化大豆卵磷脂0.96g，胆固醇1.2g置于茄形瓶中，加人无水乙醇50mL，冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0063]加入含枸橼酸替可克肽0.24g、二甲基亚砜-吐温80 (19:1，v/v) 1.2g、葡萄糖4.2g、硫柳汞0.12g、枸橼酸盐缓冲液1.2mol/L、聚乙烯醇0.13g和溶剂的溶液70mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0064]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0065]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0066]将脂质体混悬 液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0067]实施例6:双羟萘酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0068]精密称取氢化大豆卵磷脂1.6g，胆固醇Ig置于茄形瓶中，加人乙醚-无水乙醇(1:1, v/v)混合溶剂35mL,冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0069]加入含双轻萘酸替可克肽0.2g、月桂酸1.5g、乳糖3.5g、苯乙醇0.35g、枸橼酸盐缓冲液1.2mol/L、卡波普0.2g和溶剂的溶液65mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0070]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0071]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0072]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0073]实施例7:双羟萘酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0074]精密称取氢化大豆卵磷脂2.lg，胆固醇Ig置于茄形瓶中，加人无水乙醇55mL，冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0075]加入含双羟萘酸替可克肽0.3g、十二烷基氮卓酮2g、葡萄糖4g、苯甲酸0.3g、醋酸盐缓冲液1.5mol/L、聚乙烯醇0.3g和溶剂的溶液65mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。
[0076]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0077]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0078]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0079]实施例8:磷酸盐替可克肽鼻腔给药系统的制备
[0080]精密称取氢化大豆卵磷脂3g，胆固醇1.5g置于茄形瓶中，加人无水乙醇40mL，冷冻干燥形成均匀类脂粉末。
[0081]加入含磷酸替可克肽0.5g、拢牛儿基氮卓酮3g、葡萄糖5g、泊金甲酯-尼泊金乙酯(1:1，m/m) 0.5g、醋酸盐缓冲液1.8mol/L、聚乙烯醇Ig和溶剂的溶液60mL，涡旋振荡使类脂粉末分散。[0082]2_8°C温控条件下200pa高压均质2min。
[0083]经0.2um微孔滤膜过滤即得分散均匀的脂质体混悬液。
[0084]将脂质体混悬液灌装于能定量调节用量的鼻喷雾剂泵的给药系统。
[0085]实施例9:醋酸替可克肽脂质体纤毛毒性评价实验
[0086]取大鼠30只，随机分成2组，每组15只。A组给予醋酸替可克肽脂质体，作为供试品；B组给予等体积的浓度为0.9%(w/w)的生理盐水溶液，作为阴性对照。用微量进样器伸入大鼠鼻腔约5_处滴鼻方式连续给药7天，第8天处死大鼠，取鼻中隔黏膜，洗净血块及黏液。2.5%戊二醛和1%饿酸双重固定，梯度浓度乙醇脱水，醋酸正戊醋置换，C02临界点干燥，离子溅射仪喷金，制备电镜标本进行扫描电镜观察。
[0087]从图1和图2的结果可以看出，以A组醋酸替可克肽脂质体与B组阴性对照比较，虽有少量纤毛脱落，但上皮细胞保存完好，证明醋酸替可克肽脂质体鼻腔给药系统纤毛毒性比较低。
[0088]实施例10:鼻腔给药的血药浓度及绝对生物利用度实验
[0089]实验采用雄性比格犬6条，体重10_13kg，分别肌肉注射0.2mg/条SYNACTHENDEPOT (lmg/ml)和鼻腔喷雾0.2mg/条醋酸替可克肽脂质体，随后于不同时间采血5ml，血样处理后，以建立的HPLC法测定血药浓度，数据分别见表1和表2。
[0090]表1醋酸替可克肽肌肉注射给药后在比格犬体内的血药浓度
[0091]
【权利要求】
1.一种替可克肽脂质体，其包含治疗有效量的替可克肽或其药学上可接受的盐、脂相成分和药物辅料。
2.根据权利要求1所述的替可克肽脂质体，其中药学上可接受的盐包括替可克肽与有机酸或无机酸形成的盐，有机酸如双羟萘酸、枸橼酸、草酸、马来酸、富马酸、酒石酸等，无机酸如硫酸、氢溴酸、磷酸、硝酸等，优选醋酸替可克肽。
3.根据权利要求1或2所述的替可克肽脂质体，其中替可克肽或其药学上可接受的盐在该脂质体中的重量百分比为0.05%-0.5%。
4.根据权利要求1或2所述的替可克肽脂质体，其中药物辅料包含吸收促进剂、渗透压调节剂、防腐剂和PH缓冲液。
5.根据权利要求4所述的替可克肽脂质体，按重量百分比计算，其由以下成分组成: 替可克肽或其药学上可接受的盐:0.05%-0.5% ； 氢化大豆卵磷脂:0.025-3% ；
胆固醇:0.001-1.5% ；
pH 缓冲液:0.1-10% ； 吸收促进剂:0.3-3% ； 渗透压调节剂:0.1-5% ；
防腐剂:0.05-0.5% ； 增稠剂:0.05-1%,` 其余为注射用水。
6.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其中吸收促进剂选自(I)饱和或不饱和脂肪酸及其酯，如月桂酸、油酸、肉豆蘧酸、癸酸、月桂酸酯、辛酸酯、癸酸酯、棕榈酸酯、乳酸乙酯等；(2)醇类，如丙二醇、异丙醇、十六醇、月桂醇、油醇等；(3)吡咯酮类，如a-吡咯酮、N-甲基吡咯酮、N-乙基吡咯酮、5-羧基吡咯酮等；(4)亚砜类，如十二烷基甲基亚砜、二甲基亚砜等；(5)氮酮类，十二烷基氮卓酮、拢牛儿基氮卓酮等；(6)离子型、非离子型表面活性剂，如十二烷基硫酸钠、辛酸单甘油酯、吐温80、司盘20等。
7.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其中pH缓冲液选自枸橼酸缓冲盐、醋酸缓冲盐等，用量优选为0.05~0.2mol/L。
8.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其中防腐剂选自尼泊金乙酯、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸及其盐、山梨酸、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、硫柳汞、醋酸洗必泰和季铵化合物类阳离子表面活性剂等。
9.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其中渗透压调节剂选自乳糖、葡萄糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇及它们的无机盐类。
10.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其中增稠剂选自纤维素类衍生物，如羧甲基纤维素、羟丙基纤维素；聚乙二醇类、聚维酮类等；聚丙烯酸、聚乙烯醇、卡波普等。
11.根据权利要求4或5所述的替可克肽脂质体，其通过喷雾剂的形式经鼻腔给药，每次给药剂量为0.5mg~3mg。
12.制备权利要求5所述的替可克肽脂质体的方法，包括如下步骤: (I)称取氢化大豆卵磷脂、胆固醇，加入乙醚和甲醇的混合溶剂、无水乙醇或者乙醚和无水乙醇的混合溶剂，冷冻干燥形成均匀类脂粉末；(2)加入含替可克肽或其药学上可接受的盐、吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂，pH缓冲液，增稠剂和溶剂的溶液5mL，涡旋振荡使类脂粉末分散； (3)2-8°C温控条件下200pa高压均质2min ； (4)经0.2um微 孔滤膜过滤，即得分散均匀的脂质体混悬液。
【文档编号】A61K9/12GK103622913SQ201310661286
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年12月9日 优先权日:2013年12月9日
【发明者】颜携国, 陶安进, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司