白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物，属于植物提取与应用【技术领域】。以虎杖根茎为原料，通过将虎杖根茎粉碎成细粒，使用醇回流提取，合并提取液，减压浓缩至无醇味；再加入酸和稳定剂，在搅拌水解，加碱调节pH至中性，静置结晶，过滤，减压干燥，得到白藜芦醇晶体。本发明与现有技术相比，减少了溶剂的用量，也缩短了生产周期，提高了收率，同时本发明工艺简单，成本低，工艺稳定性好、可行性强，适用于工业化生产。本发明还提供了含有白藜芦醇和汉防己甲素的药物组合物，该药物组合物疗效确切，剂量明确，可以显著延缓老年痴呆症的发病进程，大大改善患者的认知能力和生活质量。
【专利说明】白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物，属于中药提取与应用【技术领域】。
【背景技术】
[0002]白藜芦醇是多酚类化合物，主要来源于葡萄(红葡萄酒)、虎杖、花生、桑椹等植物。白藜芦醇是一种生物性很强的天然多酚类物质，又称为芪三酚，是肿瘤的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病的化学预防剂。美国农业部的研究结果表明，花生红衣与仁中也含有相当多的白藜芦醇。白藜芦醇的实验研究已经证实，其具有对心血管疾病和癌症的有益作用。白藜芦醇对骨质疏松、痤疮及老年痴呆症有预防作用，具有抗病毒及免疫调节等功能。
[0003]目前，从虎杖中提取白藜芦醇主要利用酶解法，如专利CN1251361A、CN101698634A等，提取溶剂大多为有机溶剂，这些方法都需经过酶解将虎杖苷转化为白藜芦醇。但这要求酶解过程温度需恒定，这样才能保证酶解充分，且酶解占用生产空间较大，酶解时间长，且发酵好的药材如果不及时处理，就会导致发酵物中白藜芦醇的含量降低，这就需要耗费较大的人力物力，导致生产效率降低，成本增高。中国专利CN1760166A公开了一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法，该方法采用水提取，再将提取物中白藜芦醇甙通过酸催化水解反应富集出来，而后将富集产物以一定配比上预先处理好的大孔吸附树脂柱进行分离纯化，用水和乙醇洗脱。虎杖苷微溶于水，白藜芦醇难溶于水，用水做为溶剂提取，虎杖苷提取不完全，造成原料的浪费。虽然得到的白藜芦醇的纯度高，但是耗时耗能，生产周期长。中国专利CN10232093A公开了一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，包括粉碎、提取、浓缩、水解、析晶、过滤、干燥等步骤。该方法不需酶解、柱层析，直接用甲醇从虎杖中将虎杖苷及白藜芦醇提取出来，然后加酸把虎杖苷上的糖苷键进行分解，再加碱中和多余的酸，而得到含量大于50%的白藜芦醇的方法。虽然该发明不经柱层析，溶剂消耗小，操作简单，生产周期短、成本低，但是该发明的收率低，纯度低，且甲醇有一定的毒性。
[0004]汉防己甲素又名粉防己碱，来源于防己科植物粉防己的根，为无色针状结晶，熔点217-218?，临床主要用于治疗早期轻度高血压，与小剂量放射合并用于癌症；亦用于单纯硅肺1、I1、111期及各期煤硅肺。汉防己甲素通过降低过氧化物释放和吞噬细胞的活性而起到镇痛作用，还能通过抑制肿瘤耐药细胞表面β_糖蛋白的过度表达功能，增加化疗药物在肿瘤细胞内的积聚，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
[0005]老年痴呆症的发病机制目前仍不明确，化学合成药物毒副作用大，大部分中药组合物的作用机理不明确，疗效不高、见效缓慢，剂型单调落后。
【发明内容】
[0006]为了解决现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物。本发明提供的白藜芦醇的提取方法，包括以下步骤:(1)粉碎:将虎杖根茎粉碎，得细粉；
(2)提取:将步骤(1)得到的原料细粉用体积百分比浓度为85-95%乙醇回流提取3次，两次加入料液比分别为l:6-8g/mL、l:4-6g/mL、l:3-4g/mL的乙醇,第一次提取时间为3_4小时，第二次提取时间为2-3小时，第三次提取时间为1-2小时，提取温度均为80-85°C，每次提取后过滤，合并滤液；
(3)浓缩:将步骤(2)得到的滤液在80-85°C下减压浓缩至无醇味；
(4)水解:往步骤(3)得到的浓缩液中加入酸和稳定剂，在65-70°C下，搅拌，水解3-4小时；
(5)结晶:待步骤(4)的水解液自然冷却至室温，加碱调节水解液的pH至中性，静置结晶，过滤，减压干燥，得到白藜芦醇晶体。
[0007]所述的酸为硫酸、盐酸和醋酸中的至少一种，酸的浓度为3_5wt%，本发明人对酸的用量以及水解时间进行了认真的研究和和大量实验，发现酸的用量为步骤(3)得到的浓缩液重量的5.5-7%，3-4小时的水解时间，水解效果最佳，这可以使虎杖苷得到充分的转化，大大提高了收率。
[0008]考虑到白藜芦醇的稳定性，本发明人通过大量的试验，意外地发现水解时加入稳定剂，水解能更好地进行，这保证了转化出来的白藜芦醇的稳定性，从而保证了本工艺的高收率。当所述的稳定剂为柠檬酸钠，稳定剂的用量为步骤(3)得到的浓缩液重量的
1.1-1.6%时，效果最佳。
[0009]所述的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氧化钙和氢氧化钙中的至少一种。
[0010]本发明还提供了由以上提取方法得到的白藜芦醇。
[0011]本发明还提供了一种治疗老年痴呆症的药物组合物，该药物组合物含有白藜芦醇和汉防己甲素。白藜芦醇对老年痴呆症有预防作用，但是本发明人经实验发现单独使用白藜芦醇治疗老年痴呆的效果并不理想，而发明人经过探索性试验发现，汉防己甲素化合物具有显著地抑制β淀粉样蛋白沉积的作用。Αβ蛋白的聚集与老年斑的形成以及老年痴呆症的发生和进展之间具有十分密切的关系，因此可见汉防己甲素可用于预防或治疗老年痴呆症，发明人再经过探索性试验，发现白藜芦醇和汉防己甲素联合使用时，其治疗老年痴呆症的效果优异。
[0012]发明人还探究了药物组合物中白藜芦醇和汉防己甲素的重量比为1:0.2-1，更优选为1:0.8。所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、缓释胶囊剂、缓释片剂、混悬剂中的一种以上。
[0013]本发明提供白藜芦醇的提取方法及其获得的白藜芦醇和药物组合物的优点在于:
1、本发明的提取方法在现有技术的基础上进一步选择优化，经过认真的研究和大量的实验，寻找到从虎杖根茎中提取白藜芦醇的最佳参数及步骤，大大减少了溶剂的用量，也大大缩短了生产周期，克服了现有技术的不足。经反复的实验验证了本工艺稳定性好，可行性强。
[0014]2、本发明的提取方法直接使用乙醇回流提取，通过加酸水解将虎杖苷上的糖苷键分解，转化出更多游离的白藜芦醇，最后加碱中和多余的酸。本发明各参数、步骤的协同，将把虎杖根茎中的虎杖苷及白藜芦醇充分提取出来，大大提高了收率，同时本发明工艺简单，成本低，适用于工业化生产。
[0015]3、本发明的药物组合物可以显著地抑制β淀粉样蛋白沉积，其用于老年痴呆症的预防或治疗时疗效确切，剂量明确，可以显著延缓老年痴呆症的发病进程，大大改善患者的认知能力和生活质量。白藜芦醇和汉防己甲素均为天然植物中提取的活性成分，用于老年痴呆症的治疗或预防时毒副作用低，两者联用可以起到对老年痴呆症预防或治疗的协同作用。
【具体实施方式】
[0016]下面采用具体实施例进一步说明本发明的内容。
[0017]以下内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
[0018]实施例1、本发明白藜芦醇的提取方法:
将虎杖根茎粉碎，取细粉500g，加入85%的乙醇3000mL，在80_85°C回流提取3小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入85%的乙醇2000mL，在80_85°C回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入85%的乙醇1500mL，在80-85°C回流提取I小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，在80-85°C下减压浓缩至无醇味。加入浓缩液重量的
5.5%的3wt%盐酸，加入浓缩液重量的1.1%的柠檬酸钠固体，在65-70°C搅拌水解3小时，自然冷却至室温，加10 Wt %碳酸钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇9.7g,收率为1.94%ο
[0019]实施例2、本发明白藜芦醇的提取方法:
将虎杖根茎粉碎，取细粉500g，加入95%的乙醇4000mL，在80_85°C回流提取4小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入95%的乙醇3000mL，在80_85°C回流提取3小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入95%的乙醇2000mL，在80-85°C回流提取2小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，在80-85°C下减压浓缩至无醇味。加入浓缩液重量的7%的5 wt%盐酸，加入浓缩液重量的1.6%的柠檬酸钠固体，在65-70°C搅拌水解4小时，自然冷却至室温，加碳酸钠固体调节PH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇10.2g，收率为2.04%。
[0020]实施例3、本发明白藜芦醇的提取方法:
将虎杖根茎粉碎，取细粉5kg，加入90%的乙醇35L，在80-85°C回流提取3.5小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入90%的乙醇25L，在80-85°C回流提取2.5小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入90%的乙醇20L，在80-85°C回流提取1.5小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，在80-85°C下减压浓缩至无醇味。加入浓缩液重量的6%的4 wt%硫酸，加入浓缩液重量的1.4%的柠檬酸钠固体，在65-70°C搅拌水解3.5小时，自然冷却至室温，加15被％碳酸钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇98g，收率为1.96%。
[0021]实施例4、本发明白藜芦醇的提取方法:
将虎杖根茎粉碎，取细粉500kg，加入90%的乙醇4000L，在80-85°C回流提取4小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入90%的乙醇3000L，在80-85°C回流提取3小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入90%的乙醇2000L，在80-85°C回流提取2小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，在80-85°C下减压浓缩至无醇味。加入浓缩液重量的6%的4 wt%盐酸，加入浓缩液重量的1.4%的柠檬酸钠固体，在75-80°C搅拌水解2小时，自然冷却至室温，加10 wt%氢氧化钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇10.5kg,收率为2.10%O
[0022]对比例一、一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法:
选取CN102320934A —种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法的实施例六。
[0023]表1
【权利要求】
1.一种白藜芦醇的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)粉碎:将虎杖根茎粉碎，得细粉； (2)提取:将步骤(1)得到的原料细粉用体积百分比浓度为85-95%乙醇回流提取3次，两次加入料液比分别为l:6-8g/mL、l:4-6g/mL、l:3-4g/mL的乙醇,第一次提取时间为3_4小时，第二次提取时间为2-3小时，第三次提取时间为1-2小时，提取温度均为80-85°C，每次提取后过滤，合并滤液； (3)浓缩:将步骤(2)得到的滤液在80-85°C下减压浓缩至无醇味； (4)水解:往步骤(3)得到的浓缩液中加入酸和稳定剂，在65-70°C下，搅拌，水解3-4小时； (5)结晶:待步骤(4)的水解液自然冷却至室温，加碱调节水解液的pH至中性，静置结晶，过滤，减压干燥，得到白藜芦醇晶体。
2.如权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于，所述的酸为硫酸、盐酸和醋酸中的至少一种,酸的浓度为3-5 wt%，酸的用量为步骤(3)得到的浓缩液重量的5.5-7%。
3.如权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于，所述的稳定剂为柠檬酸钠，所述稳定剂的用量为步骤(3)得到的浓缩液重量的1.1-1.6%。
4.如权利要求1所述的白藜芦醇的提取方法，其特征在于，所述的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氧化 钙和氢氧化钙中的至少一种。
5.如权利要求1-4任一所述的提取方法获得的白藜芦醇。
6.一种治疗老年痴呆症的药物组合物，其特征在于，所述的该药物组合物含有如权利要求5所述的白藜芦醇和汉防己甲素。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中白藜芦醇和汉防己甲素的重量比为1:0.2-1，优选为1:0.8。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、缓释胶囊剂、缓释片剂、混悬剂中的一种以上。
【文档编号】C07C39/21GK104130110SQ201410392546
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年8月12日 优先权日:2014年8月12日
【发明者】李选民, 李威, 张雄修 申请人:四川天予植物药业有限公司