EGFR酪氨酸激酶的临床重要突变体的选择性抑制剂的制作方法

1.发明领域本发明涉及式I-III的化合物和它们的可药用盐，涉及包含此类化合物和盐的药物组合物，以及涉及其用途。本发明的化合物和盐抑制在对EGFR抑制疗法治疗的耐药性发展中重要的激酶，尤其是表皮生长因子受体EGFR，特别是其突变体，并可用于治疗或改善异常细胞增殖性病症，如癌症。2.背景信息本发明涉及可用作蛋白激酶PKs的抑制剂的联芳氨基化合物。PKs是在细胞内通信中非常重要的信号传导实体，在此它们通过催化磷酸基团从充当磷酸供体(phosphodonor)的ATP转移至蛋白质上的氨基酸侧链中的羟基而修饰许多蛋白质。PKs通常将磷酸基团转移至蛋白质上的丝氨酸或苏氨酸羟基，在这种情况下它们是丝氨酸/苏氨酸激酶（S/TKs）。下一最常见的激酶类型将磷酸转移到靶蛋白上的酪氨酸侧链的酚式羟基上并且是蛋白酪氨酸激酶（PTKs）。通常，酪氨酸激酶并入极大的跨膜蛋白的胞内结构域中，该跨膜蛋白在胞外结构域中具有同源配体结合结构域，由此配体结合激活酪氨酸激酶。此类分子是受体酪氨酸激酶（RTKs）。更少见的一类靶向与各种脂质如磷脂酰肌醇和鞘氨醇相关联的羟基并被称作脂质激酶。其中一些在结构上与某些PKs密切相关，由于此和由于脂质激酶在与PKs相同的途径中时常需要的活性，它们通常与PKs一起考虑。最少见的类别是可以将丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸羟基都磷酸化的双特异性激酶（DSKs）。一般而言，细胞中正常量的PK类别无一看起来可将其它种类的底物磷酸化，尽管在实验室条件下可诱发特异性的一定损失，在一些肿瘤中同样如此，其中表达PK的突变体形式或其中可能大量过表达PK。在结构上，激酶相当充分地被理解。存在激酶结构域，其可以是全蛋白或仅是大得多的模块化蛋白的一小部分，这种结构域具有大约35kD的基本保守结构，由两个叶(lobe)构成，N末端结构域主要由β-折叠构成，较大的C末端结构域主要由α-螺旋构成。在这两个叶之间存在结合ATP和底物的深裂隙。底物结合域相当大和相当可变，并用于区分不同的蛋白底物和保持磷酸化的特异性。这种特异性可能是非常可变的，一些酶如MEK只有一种已知底物，而另一些酶能将蛋白质中的数百种不同的羟基磷酸化。磷酸化可以改变蛋白质的构象，通常将酶从无活性形式转化成活性形式，或反之亦然，或使蛋白质与结合配偶体密切缔合，以造成细胞定位或功能多蛋白复合物的组装或分解中的变化。信号到细胞中和从细胞表面到核中的许多转导子是PKs或受PKs控制。因此，PKs的激酶活性的抑制剂对细胞信号传导具有非常显著的影响，以衰减对外部信号的正常响应和通常由信号传导分子本身的突变造成的不适当的过度响应。尽管这样的通路在体内分布非常广泛并以这样或那样的方式参与大多数身体功能和可能由它们的功能障碍造成的疾病，PKs的抑制剂特别可用于治疗癌症和免疫病症，在这两种疾病种类中都已广泛证实了PKs的过度活性且它们通常在驱动疾病过程本身中起到关键作用。已经开发出许多不同种类的激酶抑制剂，一些已成功获批和上市。看起来有力抑制许多激酶的分子支架之一是一系列三联环，其中两个、通常所有三个环是芳族的，其在结合到激酶上时可能形成U形结构。两个远端环可通过键或通过各种由1-3个原子链构成的连接基直接连接到中心环上。中心环——其几乎始终是含氮的杂芳族体系——形成1-3个到刚好在所谓的DFG环（激酶中的不变结构，其必须正确定位才能实现该酶的活性构象）之前的N-和C-末端叶之间的激酶铰链区中的残基骨架上的氢键。该抑制剂的这一末端也占据激酶的腺嘌呤结合区（其往往非常疏水）的一部分，而构成该U的“干（stems）”的两个环占据时常填充一般被ATP分子的剩余部分占据的空间的一部分的宽通道。尽管相当多的对特定激酶的亲和性来自于用有利于与靶激酶中的有望独特的结构决定子相互作用和/或不利于与不希望抑制的激酶相互作用的所选取代基装饰这些中心环，但对各种激酶的许多亲和性和选择性来自于这三个环之间的各种扭转和弯曲角，且优化对靶激酶的亲和性的一些取代基可能本身不直接与蛋白质相互作用，但可能控制这三个环相对于彼此的最稳定构象。因此一些取代基的作用是影响该抑制分子的整体内部能量，以稳定有利于结合的构象而非直接与激酶相互作用。激酶已表明是许多疾病过程的非常重要的效应物，尤其是在癌症中。通过激酶以许多不同水平控制细胞增殖并在供细胞增殖的正常环境下，必须从细胞外发送信号，在此它们结合到受体上并激活受体。细胞信号传导中的许多重要的受体是激酶，尤其是RTKs，或直接耦合到激酶上——该激酶本身被活化受体激活。一旦这些激酶已被激活，它们又激活信号传导级联，这在磷酸化的放大波中通常涉及若干其它激酶，这最终导致核中的转录因子的活化。转录因子的活化导致产生执行该细胞内的各种程序（包括使该细胞开始进入增殖周期的那些程序）的蛋白质。通常，一旦这一过程继续数小时，新合成的蛋白质会继续该过程，而不需要进一步的细胞外输入。如果增殖性细胞周期开始，合成的第一组蛋白质包括进一步的转录因子和驱动细胞周期的稍后阶段的它们的激活物和启动细胞复制和分裂过程的效应物。激酶是这一过程中的每一步骤的主要控制者。当这一过程没有适当受控且细胞在没有适当的外部控制的情况下执行细胞周期时，它们被转化并且如果免疫系统没有消灭它们，则可能形成肿瘤。当检查转化细胞时，它们不变的特征之一是过度磷酸化，表明太多激酶已不适当地活化。这可能由细胞中极其多种多样的突变造成。例如通过细胞不适当地产生其自己对受体连接激酶之一的配体。或由于没有适当控制其表达或由于细胞中存在的基因的多个额外拷贝，这些激酶之一可能严重过表达。另一非常常见的基因缺陷是激酶编码区中的突变，这导致在构成上呈活性并且不需要适当信号激活其的激酶。有时该激酶并未不适当地呈活性，但通过突变或删除使磷酸酶（这被认为通过从靶分子中除去磷酸而限制其信号传导）失活。细胞培养肿瘤和来自临床肿瘤的分离物的检查都几乎总是在肿瘤细胞的磷酸化系统中发现这类缺陷。在20世纪80年代后期，发现了几种小分子激酶抑制剂。这些分子几乎总是结合在激酶的催化裂隙中并与ATP竞争其结合位点。因此它们是ATP竞争性的，自此以来发现的大多数抑制剂属于这一类。但是，已经偶尔发现与蛋白质底物竞争的、底物竞争性的激酶抑制剂或更通常与ATP和底物都竞争的激酶抑制剂（双重抑制剂）或既不与受体竞争，也不与底物竞争的激酶抑制剂（非竞争性抑制剂）。在虑及细胞渗透差异后，发现这些化合物在分离的激酶抑制检测中的效力与细胞中的激酶抑制之间存在非常良好的相关性。对许多激酶而言，在下游靶的磷酸化损失与细胞增殖的抑制之间也存在优异的相关性。由于已用几十种不同的激酶数千次表现出这种相关性，清楚证实异常的激酶信号传导会造成转化细胞的不受控增殖，在许多情况下，阻断过度活化的激酶可终止该增殖。在许多情况中，激酶抑制剂独自可实际上诱发转化细胞的凋亡，以致肿瘤缩小。这可能是由于在肿瘤细胞中通常激活几种促凋亡机制并且异常磷酸化可能充分参与抑制凋亡过程而发生。尽管细胞中的这些能力可防止在裸鼠中作为异种移植物生长的肿瘤的良好证明一开始姗姗来迟，但随着试剂改进，已常规证实激酶抑制剂可减慢表达所靶向的激酶致癌基因的肿瘤的生长，更好的试剂导致肿瘤尺寸通常退化至不可测量的程度，并且在停止给药后肿瘤很少再生长，表明可能已治愈动物的肿瘤。此外，在已经与肿瘤暴露相关联后，体内效力与细胞活性和酶活性相关联。临床证明来得更慢，可能部分因为临床肿瘤通常比在小心控制的条件下生长的肿瘤复杂得多，部分因为小鼠在生物化学方面比人强健得多并可耐受更大的药物相对剂量，并主要因为通常很难知道哪些是适合在任何给定肿瘤中抑制的激酶。但是，伊马替尼——具有确实出色的药代动力学性质的融合致癌的TKBCR-ABL的相当强效的抑制剂，在2000年被批准用于慢性粒细胞白血病（CML）。这种激酶抑制剂提供非常令人信服的理论概念临床证明，因为大约2/3的CML患者（其肿瘤几乎按定义含有两种形式的BCR-ABL之一）极好地响应治疗并且白血病细胞通常从循环中几乎完全消失。令人惊讶地，这种阻断周围的突变看起来非常缓慢，甚至在治疗10年后该药物在80%患者中仍有效。这尚未证实是一般情况，可能部分因为大多数肿瘤在它们的生物史中发现得比CMLs晚得多并有长得多的时间变成基因异质性的，并且部分因为极少的肿瘤像CML依赖于BCR-ABL那样依赖于一种致癌基因。表皮生长因子RTK（EGFR,erbB-1）的两种抑制剂吉非替尼和埃罗替尼在大约10年前被批准用于肺癌。EGFR是实体瘤中见到的最常失调的激酶之一，通常在50%或更多的肿瘤类型中发现过表达或突变，包括非小细胞肺癌（NSCLC）。尽管这些抑制剂对多种多样过表达EGFR的异种移植物具有优异的活性，但在NSCLC中观察到非常有限的活性，只有大约10%的患者响应该药物且平均响应仅持续一年左右，尽管偶尔发现持久得多的响应者。当进行响应者的仔细检查时，发现大多数良好响应者具有EGFR中的几种突变之一，含有野生型（wt）EGFR的响应者通常没有良好响应。当分析这些突变体，尤其是EGFRL858R和EGFRdel746-750时，发现它们都具有固有活化的性质，这意味着它们在没有外部信号的情况下驱动增殖，也比wtEGFR更弱地结合ATP（较高Km），同时具有与wtEGFR类似的对该抑制剂的亲和性。这意味着，由于这些抑制剂是ATP竞争性的，比wt中更容易从酶中竞争ATP并切断易感突变体中的激酶活性，以实际增进突变体中的抑制剂效力。同时，这些肿瘤的增殖和存活比大多数肿瘤更依赖于EGFR信号传导，因为自原始突变事件以来信号已可靠地过度活跃。如上所述，实体瘤，如肺癌到发现时通常已相当晚，可能在最初转化的起始细胞（foundercell）出现后平均6-12年。转化细胞的性质之一在于它们丧失了对它们的DNA复制质量控制的控制，因此它们的自发突变率比未转化的细胞高得多。由于突变最容易在DNA复制过程中发生且这些细胞复制得非常快，这进一步增加突变率。结果在于，随着肿瘤老化，其获得不断增长的突变数，这以随机方式发生，以致随时间经过发生肿瘤的亚克隆——具有与原始肿瘤稍有不同并且彼此稍有不同的遗传学。这些亚克隆不仅参与与身体本身的生存竞争，还互相生存竞争，因为它们自己之间竞争它们可获得的有限资源。如果改变优势肿瘤克隆的环境，以使其变得相对不那么适应新环境（例如通过添加其有效的抑制剂），之前不成功得多的次要克隆如果不受所述抑制剂影响，则能够接管空出的生态位。或者，如果没有彻底杀死该克隆或完全切断增殖，其会继续产生突变，并且如果突变避开该抑制，这种亚克隆现在会自由增殖，而不受抑制剂或抑制的亲本克隆（parentalclone）的阻碍。因此自然选择预测，癌症就像传染病那样，应当能够产生耐药性，并且由于单一宿主内的肿瘤亚克隆之间的竞争极大驱动该选择过程，整体效果是促进更具攻击性的亚克隆，且肿瘤通常随其演化变得更致命。当追踪对吉非替尼和埃罗替尼的响应者时，发现耐药性的发生与几种不同的基因变化相关联。在极罕见的情况下肿瘤看起来采用完全不同的信号传导系统驱动肿瘤，但耐药性通常涉及原始系统的调整（tweaking）。EGFR与erbB-2、erbB-3和erbB-4一起构成RTKs的erbB亚家族的成员。这些受体被引发它们二聚的配体激活，尽管EGFR-EGFR同型二聚体相当常用于信号传导，但这一家族中的更常见的过程是使配体引发异源二聚化，以致信号传导实体是例如EGFR:erbB-2或erb-B2:erbB-3和适当的配体。重新激活该系统的最简单的方式是提高其它erbBs之一的表达，这甚至在治疗前也时常可见，并有助于解释为何许多过表达wtEGFR的肿瘤不响应EGFR抑制。颇为相关的机制涉及RTKHGFR，其尽管不是erbB家族成员，但已显示在过表达时与erbB-3形成高度致癌的异源二聚体，且HGFR的过表达是对EGFR抑制剂的耐药性的常见机制。至少在实验室设置中，将HGFR抑制剂添加到这些细胞中恢复了对EGFR抑制剂的敏感性。第三种并且最常见的耐药模式是EGFR的进一步突变，这降低其对EGFR抑制剂的敏感性。这些中最常见的是所谓的“gatekeeper”突变T790M，并在随后对EGFR抑制剂产生耐药性的最初响应者中常发现具有双重突变体（如L858RT790M）的NSCLCs。此类亚克隆是始终存在还是仅在治疗后出现是未知的，但看起来该突变最可能在短期响应者中已存在并在稍后产生耐药性的长期响应者中作为新生突变出现。最初相信，这些突变在空间上阻碍抑制剂结合到突变酶上，因此降低它们的亲和性和效力。但是，更近的研究表明，最常见的突变对抑制剂亲和性具有极低影响，但导致ATP对wtEGFR的结合亲和性恢复或可能高至10倍，结果可实现的抑制剂浓度不再高到足以在治疗有效程度上切断信号传导。原则上，只需要充分改进抑制剂的亲和性以克服提高的ATP亲和性，但在实践中很难这样做，因为吉非替尼和埃罗替尼是已经非常强效的、次纳摩尔的具有良好PK性质的EGFR抑制剂，但对wtEGFR驱动的肿瘤只有普通活性。此外，尽管T790M突变体没有降低EGFR对埃罗替尼和吉非替尼的亲和性，但其确实限制能够在这两种抑制剂的苯胺基喹唑啉化学型中提高亲和性的途径。因此，为了发现对T790M型突变体的更大亲和性，已经检查了新的化学模板，并且一些，尤其是上文论述的类型的U形抑制剂看起来在这一领域中相当有前途。EGFR受体在全身发挥重要作用，尤其是在整个胃肠道上皮和皮肤（都是在增殖上非常活跃的组织）中。由于EGFR抑制剂的两种主要剂量限制性毒性是皮疹和严重的GI紊乱，这些几乎肯定在很大程度上基于机制的（mechanisticallybased）。只要肿瘤由wtEGFR驱动，这就很难通过合理设计避免，尤其是对口服剂而言，其中胃肠道暴露是必然的，但如果肿瘤由突变EGFR驱动，则能够减轻对公开的临床候选物观察到的毒性，所述候选物都在苯胺基喹唑啉模板中并无疑对在790的wt（T）EGFR比对该家族的突变受体（它们是在位置790的M）明显更强效。当治疗已变得主要依赖于T790M突变体驱动的肿瘤时，这无疑未达到最佳模式。可以假设几种抑制剂模式更适合治疗预期发生这种耐药进程的肿瘤，由此EGFR抑制剂具有提高的对T790M突变体的亲和性，所有这些的实例都在文献中，一些如今在临床试验中。本专利申请描述了符合这些标准之一的化合物。对突变EGFR的亲和性显著高于wtEGFR的EGFR抑制剂在最佳剂量下应能抑制由该突变体驱动的肿瘤中的增殖，同时对未转化组织（其中wtEGFR负责EGFR信号传导）中的EGFR信号传导具有相对极低的（如果有的话）影响。这应当允许给予明显更大剂量的突变体选择性EGFR抑制剂，以提高对突变体驱动的肿瘤的效力和治疗指数。应该指出，由于突变体对ATP结合的影响，这基本是在埃罗替尼和吉非替尼响应者中已发生的情况，其中主要由于响应的突变体对竞争性配体ATP的亲和性降低，它们实际上比wtEGFR对抑制剂更敏感。现在已经揭示了几种第三代EGFR抑制剂，其中一些在临床中。这些化合物通常是不可逆抑制剂，其最初立足于U形二苯胺基嘧啶支架，但这已扩展至几种相关支架，但都以类似模式结合到二苯胺基嘧啶上。一般而言，这些化合物是含有T790M突变的突变EGFRs的非常强效的抑制剂，并且对wtEGFR和一些其它突变不那么强效。由于这种模式，相信可以显著降低wtEGFR抑制的基于机制的（mechanism-based）毒性，同时保持对由适当EGFR突变驱动的肿瘤的极强抑制效力。因此这种类型的化合物尤其可以在之前对一线埃罗替尼或吉非替尼疗法敏感的患者变得耐药后用作二线疗法。这些抑制剂不仅能像之前那样强地抑制适当的突变受体，还应在本身不会通过EGFR抑制引发显著的机制诱导的（mechanism-induced）毒性的同时实现这一点。本发明的大环胺抑制剂是不可逆的EFGR抑制剂，具有与这些试剂类似的对突变体EGFR抑制优于wtEGFR抑制的选择性模式和优异的药代动力学性质，因此证实是用于NSCLC和由突变EGFR激酶的这种亚家族驱动的任何其它肿瘤的二线治疗的优异试剂。在20世纪90年代中期开发出提高抑制剂效力的另一种方法。认识到一部分TKs利用ATP结合槽边缘上的半胱氨酸残基以形成与ATP的核糖的氢键，而大部分为此使用苏氨酸。EGFR家族都含有这种半胱氨酸（EGFR中的C797）。推测这种半胱氨酸可能被连接在抑制剂上的烷基化部分烷基化，所述抑制剂结合在ATP结合位点中并在半胱氨酸硫附近提供亲电体。为使这一概念有效，烷基化部分必须具有低固有反应性，因为从潜在PK和毒性原因看都不希望其不加区别地与体内大量的亲核体反应。为使烷基化剂以高选择性与这种必然相当弱的亲电体反应，据显示，该化合物本身必须对结合位点具有高（非共价）亲和性并且必须优先以使该弱亲电体靠近亲电体的构象结合。最后，还发现，该反应需要相对于抑制剂的血浆半衰期是快速进行的，否则其未曾与关键的半胱氨酸反应就会从体内洗出。发现了这样的不可逆抑制化合物，并发现它们不仅是比理论上等效的可逆抑制剂强效得多的体内EGFR抑制剂，作为额外好处，它们还使（至少在苯胺基喹唑啉和相关3-氰基喹啉的情况中）差的erbB-2和erbB-4抑制模板成为所有erbBs的非常强效的抑制剂，证明如果结合模式确实好，对靶的极高非共价亲和性可能不那么至关重要。进入临床的大多数第二代EGFR抑制剂是EGFR的不可逆抑制剂，使用丙烯酰胺衍生物作为亲电体，并看起来一般在临床中比可逆抑制剂更有效。临床试验倾向于关注什么被视为最简单的注册策略（registrationstrategy），其接收吉非替尼/埃罗替尼响应者并在形成耐药性后二线治疗他们。由于在这种设置中常常观察到响应，这些化合物明显可以克服许多患者的T790M耐药性，其未必如此，因为大多数在发现该突变情况之前设计出。但是，这种临床策略还意味着，尚未解答关于不可逆抑制剂是否在由wtEGFR（和可能wterbB-2/4）过表达驱动的肿瘤中具有有用的临床活性的同样引人关注的问题，但考虑到wtEGFR与双重突变体之间ATP亲和性的类似性，似乎确实有可能如此。WO2013/014448揭示了作为强效和突变体选择性的不可逆EGFR抑制剂的一系列4-(双环芳基)-2-(3-丙烯酰胺基苯胺基)嘧啶，它们通常对wt受体具有低亲和性。该化合物往往对EGFRdel746-750和L858RT790M双重突变体具有相当类似的低至次纳摩尔范围的效力，尽管事实上前者是易感性突变体，后者是耐苯胺基喹唑啉抑制剂的突变体。对wtEGFT的活性倾向于低效40至>100倍。早期临床数据显示在其NSCLSs中具有T790M突变的过半数患者中的响应率（肿瘤收缩），在许多患者中观察到非常轻微的皮疹，表明DLTs不再受wtEGFR抑制的控制。如上文论述，不可逆抑制剂中的烷基化部分（例如迈克尔受体）的活性经证实非常重要。如果其对亲核体的反应性太强，则极少到达预期靶，并可能产生大量亲电子改性的大分子以造成额外的毒性风险。此外，血浆半衰期极短，这在许多肿瘤中造成问题。由慢周转的致癌基因驱动的肿瘤可通过暴露在短脉冲的不可逆抑制剂下而长期抑制增殖信号传导，因为该致癌基因随后永久失活。但是，如果肿瘤不断产生新的致癌蛋白，血浆药物浓度快速下降到有效浓度以下，并且不再抑制新合成的受体，直到下次给药抑制剂该信号传导通路才恢复活性。即使肿瘤没有快速周转致癌基因，这种脉冲式给药也提供强选择压力以作为明显的耐药途径解除对致癌基因生成的管制。如果检查不可逆抑制剂的丙烯酰胺核，几种因素可用于影响其作为迈克尔受体的反应性；更甚于使用大多数烷基化部分，因为迈克尔反应固有可逆。它们通常控制烯烃的电子密度，缺电子的双键在动力学和热力学方面更有利于迈克尔反应。但是，烯烃双键的极性程度也是重要的，β-碳上的较低电子密度比α碳上的低电子密度更重要。最后，通过空间拥挤（stericcrowding）相对于迈克尔加合物稳定该双键，因为迈克尔加成使两个平面三角形（或在炔的情况中为线型）原子的配位数提高1，并变成四面体（平面三角形）。迈克尔体系的电子密度部分取决于羰基的性质。尽管在丙烯酰胺中羰基始终是酰胺，但与该酰胺氮键合的基团会影响其向整个体系贡献电子的能力，并因此相当显著地影响该迈克尔受体π体系的整体电子密度。在WO2013/014448中，所述的大多数丙烯酰胺被具有两个强给电子的取代基（醚和叔胺）和一个更接近中性的取代基（2-氨基嘧啶）的苯基环取代，但和通过控制丙烯酰胺氮原子可实现的差不多，这种取代模式总体上可能使该π体系对迈克尔加成失活。在另一个极端，6-丙烯酰胺基吡啶并嘧啶已被描述为不可逆的EGFR抑制剂，但就简单丙烯酰胺而言，化学反应性确实太强以致无法治疗有效。通过提供分子内氢键给体，也可以间接控制羰基本身。这种氢键具有将羰基氧的孤电子对之一与正常相比略微拉离氧原子的总体效应，以致整个π体系稍微更缺电子和极化。但是，尽管这种策略有效，但其涉及构建足以允许氢键形成的化学支架（chemicalscaffold）和构象灵活性的损失，因为环状氢键的形成始终涉及严重的空间约束。如果这在分子上实施更有利于目标反应的构象，这远比电子效应更重要，但如果其实施不利的构象，则可能完全阻碍目标反应的发生。影响迈克尔受体的反应性的最常见的方式是在烯烃碳原子上设置官能团。通常，在α位置，唯一显著的效应是电子性的——吸电子基团使该π体系更缺电子并提高反应性，而给电子取代基增加π-电子密度并使该体系对迈克尔加成的反应性较低。尽管吸电子基团的性质在理论上可通过诱导效应从α-碳上或通过中介效应从β碳上除去更大的电子密度并因此改变该体系的整体极性以及其整体电子密度，但在实践中看起来没什么区别且所有缺α-电子的基团都倾向于强活化迈克尔受体，给α-电子的取代基使迈克尔受体失活。在β-碳处，出于电子和空间原因，取代效应往往更复杂。对于丙烯酰胺，β原子必须容纳迈克尔受体的体积，如果其已经具有大于氢的取代基，这会造成加合物中的最初不存在的空间约束。许多取代基，例如烷基，会提高整个π-体系的电子密度以及提高其热力学稳定性，且这些效应会减慢迈克尔反应并降低该反应的总体热力学有利性，以致其更容易发生逆迈克尔反应。β位置的吸电子基团通常通过它们对π-体系的整体电子密度的影响加速迈克尔反应，但现在它们的吸电子作用的性质也变得重要。简单的诱导性吸电子基团（如卤素或CF3）会进一步降低β原子的电子密度，以使π-体系更极性，但中介性吸电子基团（如羰基）会从α位置吸取更多电子密度，以致烯烃双键更缺电子和更低极化，并与完全没有取代基相比，可充分提高该反应的热力学驱动力，同时减慢整体动力学。当用不可逆抑制剂进行简单酶测定时，不太可能得到真实抑制常数。如果该化合物具有良好的非共价亲和性，不可逆warhead仅与其在酶上的靶反应且该酶是纯的和100%活性的，并且成键的整体热力学具有大于大约3kcals的ΔG，则IC50在理论上应该为活性酶浓度的一半，但实践中测得的IC50通常高得多。这可能归因于烷基化反应的动力学非常慢，但情况通常不是如此，且无论烷基化反应的速度如何，IC50比酶浓度大得多。如同大多数药剂的情况那样，不可逆EGFR抑制剂的细胞效力往往小于它们的分离酶测定效力。药物必须渗透细胞膜并且不被抗性蛋白泵出。细胞中有许多其它潜在的靶可能无价值地扣留（sequester）药物，并且其可能经受细胞中的代谢。对于不可逆抑制剂，可能的竞争性的良好亲核体的数量在细胞测定中极大提高，意味着不加选择的迈克尔受体现在有许多潜在靶可供反应，并且随着迈克尔受体反应性提高，仅由于这一原因，细胞效力就始终降低。在整个动物检测中，情况变得明显更复杂。不是将抑制剂添加到静态系统中，而是添加到动态系统中，其中许多过程同时进行。甚至对肠胃外给药的药物（其中主要忽略药物的吸收特征）而言，该药物必须充分分布到靶组织中并在周围停留足够久以具有有效作用。与排泄和代谢过程结合的循环系统意味着，甚至递送到靶的药物也倾向于仅短暂存在。对于快速反应的抑制剂，短时间接触靶可能足以使其不可逆地抑制靶，但对于缓慢反应的抑制剂，与靶的接触可能太短以致无法使反应在大多数靶分子上进行至完全，慢烷基化抑制剂可能表现得非常类似于（通常非优化的）可逆抑制剂。因此，开始发觉，仅制备极低反应性的迈克尔受体不足以制备可接受的药剂。但是，如上文论述，大多数真正的肿瘤往往相当快地周转它们的致癌基因，如突变和/或过表达的EGFR蛋白质，因此快速烷基化靶蛋白的反应性更强的迈克尔受体需要具有相当大的半衰期，以使在给药之间的大部分或整个时期，周围存在充足的抑制剂以将新合成的受体烷基化。在实践中，做到这一点所需的长时间血浆暴露只能通过提供迈克尔受体的固有反应性低的化合物实现，以致其大部分保持循环许多小时，而不与其在体内接触到的许多亲核体（包括大量的循环和细胞内谷胱甘肽，其主要用途之一是捕获亲电子的外源性化学物质（xenochemicals））不可逆地反应。在JMedChem56,7025(2013)中描述了一系列不可逆EGFR抑制剂的固有谷胱甘肽反应性。在标准的一组条件下，描述了23->10,000分钟的谷胱甘肽加成的半衰期，并描述了25-400分钟的有效范围。由于阿法替尼在人体中的终末半衰期为37小时（ClinPharmacokinet52,1101(2013)），卡奈替尼为大约3.5小时（ClinCancerRes,12,4645(2006)），但在谷胱甘肽测定中它们分别具有25和23分钟的半衰期，无疑有其它代谢因素在此发挥作用。由于dacomitinib——其像阿法替尼和卡奈替尼一样是4-苯胺基-7-烷氧基喹唑啉-6-丙烯酰胺衍生物，但像阿法替尼一样具有氨基巴豆酰胺侧链而非卡奈替尼的未取代丙烯酰胺——在人体中具有大约50小时的血浆半衰期并在这种测定中为49小时，这有力地表明清除末端丙烯酰胺可提供人体中的PK优点，这与迈克尔反应的速率没什么关系。但是，应该指出，不同于WO2013/014448化合物的非常富电子的苯胺，这些抑制剂各自的丙烯酰胺氮键合到适度缺电子的7-烷氧基-4-苯胺基喹唑啉上。此申请没有提出比丙烯酰基长的任何烷基化侧链，极有可能是因为此类化合物的固有迈克尔受体性质太弱以致无效，这是在JMedChem56,7025(2013)中强调的一点。但是，如上文刚刚论述，此类化合物预计具有优于相应的丙烯酰胺的药代动力学优点，并且当适当调节它们的电子密度时会在WO2013/014448中论述的苯胺基嘧啶模板上产生不可逆抑制剂。本公开的目的是揭示在与WO2013/014448中揭示的那些类似的苯胺基嘧啶上具有延长的巴豆酰胺（或更大的）侧链的化合物，其中已经系统地降低迈克尔受体的电子密度以保持足以提供T790M突变EGFR抑制剂的选择性不可逆抑制的治疗和药效学优点的反应性，同时保持与在迈克尔受体上没有末端双键相关联的优异的药代动力学性质。发明概述本发明部分提供可选择性调节造成对现有EGFR-基抑制疗法的耐药性的蛋白激酶，尤其是I型受体酪氨酸激酶（RTK）家族或erbB家族的蛋白激酶，最特别是EGFR受体的某些突变形式的活性的新型化合物及其可药用盐。这种抑制活性影响生物功能，包括但不限于细胞增殖和细胞侵袭，抑制转移，诱发凋亡或抑制血管生成。还提供了药物组合物和药物，所述药物组合物和药物只包含本发明的化合物或盐或包含与其它治疗剂或缓和剂组合的本发明的化合物或盐。本发明涉及式A的化合物或其可药用盐，其中X1是CH或N；Y是或R1选自氢、氟、氯、甲基、CF3、CHF2和氰基；R2选自甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、甲基、乙基、异丙基和环丙基；R3选自H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6卤代炔基、任选被R7和C1-6烷基取代的C2-6炔基、R4N-C2-6烷基-NR4R4、R7；R4独立地为H、C1-6烷基、C2-6羟烷基、C1-6烷氧基烷基或C2-6烷基NR8R9，或两个R4基团与它们所连接的碳原子形成3-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；R5是H、F、Cl、CF3、CHF2、CF2C1-6烷基、CF2CH2NR8R9、CH2NR8R9或C1-6烷基；R6e和R6z独立地为H、F、Cl、CF3、CHF2、C1-6烷基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、(CH2)mCHR4R7、CF2C1-6烷基、CF2(CH2)mCHR4R7或C(R4)2R7；R6t是C1-6烷基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、(CH2)mCHR4R7、C(R4)2R7；R7是OH、NR8R9、OCH2(CH2)mNR8R9、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基、氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基氧基、氧杂环丁烷基氨基、氧杂环戊烷基、氧杂环戊烷基氧基、氧杂环戊烷基氨基、环氧乙烷基、环氧乙烷基氧基、环氧乙烷基氨基、氧杂环庚烷基、氧杂环庚烷基氧基、氧杂环庚烷基氨基、氮杂环丁烷基、氮杂环丁烷基氧基、氮杂环丁烷基氨基、吡咯烷基、吡咯烷基氧基、吡咯烷基氨基、哌啶基、哌啶基氧基、哌啶基氨基、氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基氧基、氮杂环庚烷基氨基、二氧杂环戊烷基、二氧杂环己烷基、吗啉代、硫代吗啉代、硫代吗啉代-S,S-二氧化物、哌嗪子基（piperazino）、二氧杂环庚烷基、二氧杂环庚烷基氧基、二氧杂环庚烷基氨基、氧氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基氧基、氧氮杂环庚烷基氨基、二氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基氧基、二氮杂环庚烷基氨基；且作为R7的一部分的所有NH可任选被R4取代；R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C3-6烯基、C3-6炔基、C3-7环烷基、C3-7环烯基、C1-C6酰基、4-12元杂环基、C6-C12芳基或5-12元杂芳基；或R8和R9与它们所连接的原子形成4-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；且R8和R9可以单独或一起被最多三个独立地选自羟基、C1-6烷氧基、C1-6羟烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基的取代基取代；R10是H、C1-6烷基；X2是C、CH或N；X3是CH或N，X4是CR4或N或NR10；X5和X6都是C或一个可以是N；a-e中的两个键是双键且另外三个是单键，以使原子X2-X6都没有两个双键与其相连；键f通常是双键，只是当X4和X5，或X4和X6是氮且X2-X6中的另外三个是C、CH或CR4时，两个键f也可以都是单键；m是0-4；条件如下：X2-X6中的至少一个和不多于三个是N或NR4；R5、R6e和R6z中仅一个可以是卤素或含有与本身直接键合到所述烯酰胺体系上的碳原子直接键合的卤素。优选实施方案详述本文所用的术语“卤素(halogen)”或“卤代(halo)”是指氟、氯、溴或碘（F、Cl、Br、I）。卤代优选是指氟或氯。术语“烷基”是指饱和一价脂族烃基，包括具有指定碳原子数的直链和支链基团。术语“C1-6烷基”或“C1-C6烷基”是指含有1至6个碳原子的直链或支链烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。类似地，术语“C1-4烷基”或“C1-C4烷基”是指含有1至4个碳原子的直链或支链烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。本文所用的术语“卤素(halogen)”或“卤代(halo)”是指氟、氯、溴或在一些情况下，取代烷基可以具体参照取代基命名。例如，“卤代烷基”是指被一个或多个卤素取代基取代的具有指定碳原子数的烷基，并通常含有1-6个碳原子和1、2或3个卤素原子（即“C1-C6卤代烷基”）。因此，C1-C6卤代烷基包括三氟甲基（-CF3）和二氟甲基（-CF2H）。类似地，“羟烷基”是指被一个或多个羟基取代基取代的具有指定碳原子数的烷基，并通常含有1-6个碳原子和1、2或3个羟基（即“C1-C6羟烷基”）。因此，C1-C6羟烷基包括羟甲基（-CH2OH）和2-羟乙基（-CH2CH2OH）。术语“C1-6烷氧基”、“C1-C6烷氧基”或“OC1-6烷基”是指含有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。术语“C1-4烷氧基”、“C1-C4烷氧基”、“OC1-4烷基”是指含有1至4个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。术语“C3-6环烷氧基”、“C3-C6环烷氧基”或“OC3-6环烷基”是指含有3至6个碳原子的环状烷氧基，如环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基等。“烷氧基烷基”是指被一个或多个烷氧基取代基取代的具有指定碳原子数的烷基。烷氧基烷基通常在烷基部分中含有1-6个碳原子并被1、2或3个C1-C4烷氧基取代基取代。这样的基团在本文中有时被描述为C1-C4烷氧基-C1-C6烷基。“氨基烷基”是指被一个或多个取代或未取代的氨基取代的具有指定碳原子数的烷基，在本文中进一步定义了此类基团。氨基烷基通常在烷基部分中含有1-6个碳原子并被1、2或3个氨基取代基取代。因此，C1-C6氨基烷基包括例如氨基甲基（-CH2NH2）、N,N-二甲基氨基-乙基（-CH2CH2N(CH3)2、3-(N-环丙基氨基)丙基（-CH2CH2CH2NH-CPr）和N-吡咯烷基乙基（-CH2CH2N-吡咯烷基）。“烯基”是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键构成的如本文定义的烷基。烯基通常具有2至20个碳原子（"C2-C20烯基"），优选2至12个碳原子（"C2-C12烯基"），更优选2至8个碳原子（"C2-C8烯基"）或2至6个碳原子（"C2-C6烯基"）或2至4个碳原子（"C2-C4烯基"）。代表性实例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。“C2-C6烯基”是指含有2至6个碳原子和至少一个在两个sp2杂化碳原子之间的双键的直链或支链基团。如果它们带有取代基或作为其它基团的取代基出现，例如在O-(C2-C6)烯基中，上述定义也适用。合适的C2-C6烯基的实例是正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、正戊烯基、仲戊烯基、正己烯基、仲己烯基等。烯基可以未被取代或被本文描述为适用于烷基的相同基团取代。“炔基”是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键构成的如本文定义的烷基。炔基具有2至20个碳原子（"C2-C20炔基"），优选2至12个碳原子（"C2-C12炔基"），更优选2至8个碳原子（"C2-C8炔基"）或2至6个碳原子（"C2-C6炔基"）或2至4个碳原子（"C2-C4炔基"）。代表性实例包括，但不限于，乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以未被取代或被本文描述为适用于烷基的相同基团取代。“C2-C6炔基”是指含有2至6个碳原子和至少一个在两个sp杂化碳原子之间的三键的直链或支链基团。如果它们带有取代基或作为其它基团的取代基出现，例如在O-(C2-C6)炔基中，上述定义也适用。合适的C2-C6炔基的实例是丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。本文所用的“亚烷基”是指可以将两个其它基团连接在一起的具有指定碳原子数的二价烃基。其有时是指-(CH2)n-，其中n是1-8，n优选是1-4。当指定时，亚烷基也可以被其它基团取代并可包括一个或多个不饱和度（即亚烯基或亚炔基部分）或环。亚烷基的开放价不需要在链的相反端。因此，-CH(Me)-和-C(Me)2-也包括在术语“亚烷基”的范围内，环状基团如环丙烷-1,1-二基和不饱和基团如亚乙烯基（-CH=CH-）或亚丙烯基（-CH2CH=CH-）同样包括在术语“亚烷基”的范围内。当亚烷基被描述为任选被取代时，取代基包括如本文所述的通常存在于烷基上的那些。“亚杂烷基”是指其中亚烷基链的一个或多个不相邻碳原子被-N-、-O-、-P-或-S-替代的如上所述的亚烷基，体现为例如-N(R)-、-P(=O)(R)-、-S(O)x-或–S(=O)(=NR)-，其中R是H或C1-C4烷基且x是0-2。例如，基团-O-(CH2)1-4-是'C2-C5'-亚杂烷基，其中相应亚烷基的碳原子之一被O替代。“芳基”或“芳族”是指具有完全共轭的π电子体系并具有芳香性的全碳单环或稠环多环。术语“C6-C12芳基”和“C6-12芳基”包括在这一术语内并包括具有6至12个碳原子和在环系内不含杂原子的芳族环体系。芳基的实例是苯基和萘基。芳基可以被取代或未被取代。C6-C12芳基的相邻环碳原子上的取代基可以结合形成任选被一个或多个取代基，如氧代、C1-C6烷基、羟基、氨基和卤素取代的5-或6-元碳环环，或任选被一个或多个取代基，如氧代、C1-C6烷基、羟基、氨基和卤素取代的含有1、2或3个选自N、O和S(O)x（其中x是0、1或2）的环杂原子的5-或6-元杂环环。芳基的实例包括苯基、联苯基（biphenyl）、萘基、蒽基、菲基、二氢化茚基、茚基和四氢萘基。芳基可以未被取代或如本文中进一步描述的那样被取代。“杂芳基”或“杂芳族”是指含有指定环原子数并在芳环中包括至少一个选自N、O和S的杂原子作为环成员的具有公知芳香性的单环或稠合双环或多环环系。杂原子的加入实现5-元环以及6-元环中的芳香性。通常，杂芳基含有5至20个环原子（“5-20元杂芳基”），优选5至14个环原子（“5-14元杂芳基”），更优选5至12个环原子（“5-12元杂芳基”）或5至6个环原子（“5-6元杂芳基”）。杂芳基环经由杂芳环的环原子连接到基础分子上，以保持芳香性。因此，6-元杂芳基环可经由环C原子连接到基础分子上，而5-元杂芳基环可经由环C或N原子连接到基础分子上。杂芳基可以未被取代或如本文中进一步描述的那样被取代。如本文所用，“5-6元杂芳基”是指含有1、2或3个选自N、O和S的环杂原子的具有5或6个环原子的单环基团，但包括具有4个氮、其余环原子是C并且还具有完全共轭的π-电子体系的四唑基。5-或6-元杂芳基的相邻环原子上的取代基可以结合形成任选被一个或多个取代基，如氧代、C1-C6烷基、羟基、氨基和卤素取代的稠合5-或6-元碳环环，或任选被一个或多个取代基，如氧代、C1-C6烷基、羟基、氨基和卤素取代的含有1、2或3个选自N、O和S(O)x（其中x是0、1或2）的环杂原子的稠合5-或6-元杂环环。如果所述稠合环本身是芳族的，其被称作稠合（双环）杂芳族类，无论第二个环是否含有杂原子。可药用杂芳基是足够稳定以连接到本发明的化合物上，配制到药物组合物中并随后给药于需要其的患者的杂芳基。含有1、2或3个独立地选自O、N和S的杂原子的5-元杂芳基环的实例包括吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、噁二唑基和噻二唑基。优选的6-元杂芳基环含有1或2个氮原子。6-元杂芳基的实例是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。稠合杂芳基环的实例包括苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、苯并咪唑、吲唑、喹诺酮、异喹啉、嘌呤、吡咯并嘧啶、萘啶和咔唑。本文所用的“亚芳基”是指由芳烃通过从核的两个碳原子上各自除去氢原子而得到的二价基团。在常见的实施方案中，亚芳基环是1,2-二取代或1,3-二取代的亚芳基。亚芳基部分的芳基环可任选在开放价位置上被适合芳基环的基团取代至这种取代所标示的程度。亚芳基环优选是C6-C12亚芳基环，例如1,2-亚苯基或1,3-亚苯基部分。类似地，本文所用的“亚杂芳基”是指由杂芳环通过从核的两个碳原子或一个碳原子与一个氮原子上各自除去氢原子而得到的二价基团。在常见的实施方案中，亚杂芳基环是1,2-二取代或1,3-二取代的亚杂芳基。亚杂芳基部分的杂芳基环任选被适合杂芳基环的基团取代至这种取代所标示的程度。亚杂芳基环优选是5-12元、可能稠合的亚杂芳基环，更优选5-6元亚杂芳基环，它们各自可任选被取代。术语“杂脂环族”、“杂环基”或“杂环”在本文中可互换使用以表示含有指定环原子数、包括至少一个选自N、O和S的杂原子作为环成员的非芳族、饱和或部分不饱和的环体系，其中该杂环环经由环原子（其可以是C或N）连接到基础分子上。杂脂环族环可稠合到一个或多个其它杂脂环族或碳环环上，该稠环可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的。杂脂环族环优选含有1至4个选自N、O和S的杂原子作为环成员，更优选1至2个环杂原子，条件是此类杂脂环族环不含有两个相邻的氧原子。杂脂环基可以未被取代或被本文描述为适用于烷基、芳基或杂芳基的相同基团取代。优选的杂脂环基包括根据本文中的定义的3-12元杂脂环基、5-8元杂环基（或杂脂环基）、4-12元杂脂环族单环和6-12元杂脂环族双环。本文所用的“3-12元杂脂环族”是指具有3至12个环原子的单环或双环基团，其中1、2、3或4个环原子是选自N、O、P(O)、S(O)x（其中x是0、1、2）和S(=O)(=NR)的杂原子，其余环原子是C。该环还可具有一个或多个双键。但是，该环没有完全共轭的π电子体系。两个环碳原子上的取代基可以结合形成含有1、2或3个选自N、O和S(O)x（其中x是0、1或2）的环杂原子的碳环或杂脂环族的5-或6-元桥环。该杂脂环基任选被氧代、羟基、氨基、C1-C6-烷基等取代。在常见的实施方案中，杂脂环基含有3-12个环成员，包括碳和非碳杂原子，优选4-6个环成员。在某些优选实施方案中，包含3-12元杂脂环基的取代基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基环，它们各自可任选在这样的取代有化学意义的程度上被取代。要理解的是，除了氧代或氮杂基团连接到N、P或S上以形成例如但不限于硝基、氧膦基(phosphinyl)、膦酰胺基(phosphinamido)、磺基肟基(sulfoximino)和磺酰基之类的基团或在某些杂芳环，如三嗪、三唑、四唑、噁二唑、噻二唑等的情况中外，通常不多于两个N、O或S原子连续连接。“环烷基”是指含有指定碳原子数的非芳族的、饱和或部分不饱和的碳环环体系，其可以是经由环烷基环的碳原子连接到基础分子上的单环、桥连或稠合双环或多环环体系。本发明的环烷基通常含有3至12个碳原子（“C3-C12环烷基”），优选3至8个碳原子（“C3-C8环烷基”）。另一些环烷基包括具有4至7个碳的部分不饱和部分（“C4-C7环烯基”）。代表性实例包括例如环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己烯、环己二烯、环庚烷、环庚三烯、金刚烷等。环烷基可以未被取代或被本文描述为适用于烷基的相同基团取代。本文所用的“C3-C6环烷基”是指具有3至6个碳原子的全碳单环或稠环多环基团。“环烷基烷基”可用于描述经由亚烷基连接基（linker）（通常为C1-C4亚烷基）连接到基础分子上的环烷基环（通常为C3-C8环烷基）。环烷基烷基由碳环环和连接基中的碳原子总数描述并通常含有4-12个碳原子（“C4-C12环烷基烷基”）。因此，环丙基甲基是C4-环烷基烷基，且环己基乙基是C8-环烷基烷基。环烷基烷基可以未被取代或在环烷基和/或亚烷基部分上被本文描述为适用于烷基的相同基团取代。“芳基烷基”是指经由亚烷基或类似连接基连接到基础分子上的如本文所述的芳基。芳基烷基由该环和连接基中的碳原子总数描述。因此苄基是C7-芳基烷基，苯基乙基是C8-芳基烷基。芳基烷基通常含有7-16个碳原子（“C7-C16芳基烷基”），其中芳基部分含有6-12个碳原子，且亚烷基部分含有1-4个碳原子。此类基团也可以表示为–C1-C4亚烷基-C6-C12芳基。“杂芳基烷基”是指经由亚烷基连接基连接到基础分子上的如上所述的杂芳基，与“芳基烷基”的区别在于芳族部分的至少一个环原子是选自N、O和S的杂原子。在本文中有时根据该环和结合的连接基中（不包括取代基）的非氢原子（即C、N、S和O原子）的总数描述杂芳基烷基。因此，例如，吡啶基甲基可以被称作“C7”-杂芳基烷基。通常，未被取代的杂芳基烷基含有6-20个非氢原子（包括C、N、S和O原子），其中杂芳基部分通常含有5-12个原子，亚烷基部分通常含有1-4个碳原子。这样的基团也可以表示为-C1-C4亚烷基-5-12元杂芳基。类似地，“芳基烷氧基”和“杂芳基烷氧基”是指经由亚杂烷基连接基（即-O-亚烷基-）连接到基础分子上的芳基和杂芳基，其中根据该环和结合的连接基中的非氢原子（即C、N、S和O原子）的总数描述这些基团。因此，-O-CH2-苯基和-O-CH2-吡啶基分别被称作C8-芳基烷氧基和C8-杂芳基烷氧基。当芳基烷基、芳基烷氧基、杂芳基烷基或杂芳基烷氧基被描述为任选被取代时，取代基可以在二价连接基部分上或在该基团的芳基或杂芳基部分上。任选存在于亚烷基或亚杂烷基部分上的取代基与上文对烷基或烷氧基通常描述的那些相同，而任选存在于芳基或杂芳基部分上的取代基与上文对芳基或杂芳基通常描述的那些相同。“羟基”是指-OH基团。“酰基”是指一价基团-C(O)烷基，其中烷基部分具有指定碳原子数（通常C1-C8，优选C1-C6或C1-C4）并可以被适用于烷基的基团取代。因此，C1-C4酰基包括-C(O)C1-C4烷基取代基，例如-C(O)CH3。类似地，“酰氧基”是指一价基团-OC(O)烷基，其中烷基部分具有指定碳原子数（通常C1-C8，优选C1-C6或C1-C4）并可以被适用于烷基的基团取代。因此，C1-C4酰氧基包括-OC(O)C1-C4烷基取代基，例如-OC(O)CH3。术语“单环或双环环体系”是指含有指定环原子数的芳族、饱和或部分不饱和的环体系并可任选包括一个或多个选自N、O和S的杂原子作为环成员，其中杂环环经由可以是C或N的环原子连接到基础分子上。在这一术语中包括术语“环烷基”、“芳基”、“杂环基”和“杂芳基”。本发明的单环或双环环体系通常含有4至12个成员原子（“4-12元单环或双环环体系”)。双环体系可经由1,1-稠合（螺）、1,2-稠合（稠合）或1,>2-稠合（桥头）连接。代表性实例包括环戊烷、环戊烯、环己烷、降冰片基(norbornyl)、螺[2.3]己烷、苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、苯并噻吩基、吲哚基等。所有烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、单环和双环杂环、芳基（单环和双环）、杂芳基（单环和双环）、环烷基烷基、芳基烷基、芳基烷氧基、杂芳基烷基或杂芳基烷氧基（包括任何C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、C6-12双环烷基、4-12个原子的饱和单环杂环或6-12个原子的饱和双环杂环、所有C6-12芳基单环或双环和6-12个原子的杂芳基单环或双环）可任选被多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、羟基、氧代、羟基氨基、肟基、肼基、亚肼基、氰基、硝基、叠氮基、NR8R9、OC1-6烷基、OC3-6烯基、OC3-6炔基、C1-6烷基、OC3-6环烷基、OC3-7环烯基、C1-6酰基、C1-6酰氧基、N(R8)COR4、CO2R4、CONR8R9、NR8CONR8R9、NR8CO2R4、OCO2R4、OCONR8R9、S(O)xR4、S(R4)(=O)=NR8、S(=O)(=NR8)NR8R9、SO2NR8R9、NR8SO2R4、NR8SO2NR8R9、-NR8S(=O)(=NR8)R4、-N=S(=O)(R4)R4、-N=S(=O)(NR8R9)R4、ONR8R9、ON(R8)COR4、ONR8CONR8R9、ONR8CO2R4、ONR8SO2R4、ONR8SO2NR8R9。如制备和实施例中所用，下列术语具有所示含义："ng"是指纳克；"μg"是指微克；"mg"是指毫克；"g"是指克；"kg"是指千克；"nmole"或"nmol"是指纳摩尔；"mmol"是指毫摩尔；"mol"是指摩尔；“M”是指摩尔浓度，“mM”是指毫摩尔浓度，“μM”是指微摩尔浓度，“nM”是指纳摩尔浓度，“L”是指升，“mL”是指毫升，“μL”是指微升。本发明的化合物的可药用盐包括其酸加成盐和碱盐（包括二盐）。合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星(benzathine)盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、缓血酸胺盐和锌盐。关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的“HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties,Selection,andUse”（Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002）。通过将该化合物的溶液视情况与所需酸或碱混合在一起，可容易地制备本发明的化合物的可药用盐。盐可以从溶液中沉淀并通过过滤收集或可以通过蒸发溶剂回收。该盐中的离子化程度可以从完全离子化到几乎未离子化而变化。含有一个或多个不对称碳原子的本发明的化合物可以以两种或更多种立体异构体的形式存在。如果本发明的化合物含有烯基或亚烯基，可能存在几何顺式/反式（或Z/E）异构体。如果该化合物含有例如酮基或肟基或芳族部分，会发生互变异构现象（“互变现象”）。结果是单一化合物可能表现出多于一种的异构现象。本发明的要求保护的化合物的范围内包括本发明的化合物的所有立体异构体、几何异构体和互变异构形式，包括表现出多于一种异构现象的化合物，及其一种或多种的混合物。还包括酸加成盐或碱盐，其中反离子是旋光性的，例如D-乳酸盐或L-赖氨酸盐，或反离子是外消旋的，例如DL-酒石酸盐或DL-精氨酸盐。顺式/反式异构体可通过本领域技术人员公知的传统技术，例如色谱法和分步结晶法分离。本发明的化合物还可能表现出阻转异构现象，其中受限旋转（尤其是围绕连接联芳中的两个芳基环的键）造成不同的旋转异构体在正常环境温度下不可互相转化并且在整个分子保持热稳定的温度下也极有可能不可互相转化。在这种情况下，也要求保护由阻转异构现象产生的不同立体异构体。用于制备/分离单个对映异构体的传统技术包括由合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱法（HPLC），尤其是在模拟移动床（SMB）构造中拆分外消旋物（或盐或衍生物的外消旋物）。或者，外消旋物（或外消旋前体）可以与合适的旋光化合物，例如醇反应，或在式（I）的化合物含有酸性或碱性部分的情况下，与酸或碱，例如酒石酸或1-苯基乙胺反应。所得非对映异构混合物可通过色谱法和/或分步结晶法分离并通过技术人员公知的方法将一种或两种非对映异构体转化成相应的纯对映异构体。本发明的手性化合物（及其手性前体）可以利用色谱法（通常HPLC）在不对称树脂上使用由烃构成的流动相以对映异构体富集形式获得，所述烃通常为庚烷或己烷，含有0至50%的异丙醇（通常2至20%）和0至5%的烷基胺（通常0.1%二乙胺）。洗脱物的浓缩提供富集混合物。立体异构体的混合物可以通过本领域技术人员已知的传统技术分离。[参见例如ELEliel的“StereochemistryofOrganicCompounds”（Wiley,NewYork,1994）]。本发明包括所有可药用的同位素标记的本发明的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子替代。适合包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，如2H和3H，碳的同位素，如11C、13C和14C，氯的同位素，如36Cl，氟的同位素，如18F，碘的同位素，如123I和125I，氮的同位素，如13N和15N，氧的同位素，如15O、17O和18O，磷的同位素，如32P，和硫的同位素，如35S。某些同位素标记的本发明的化合物，例如包含放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。考虑到它们的易并入性和现成的检测手段，放射性同位素氚（即3H）和碳-14（即14C）特别可用于此用途。用较重同位素，例如氘，即2H替代可提供由更高的代谢稳定性带来的某些治疗益处，例如增加的体内半衰期或降低的剂量要求，因此在某些情况下是优选的。用正电子发射同位素，例如11C、18F、15O和13N替代可用于正电子发射断层扫描（PET）研究以检测底物受体占有率。通常通过本领域技术人员已知的传统技术或通过与所附实施例和制备中描述的那些类似的方法、使用适当的同位素标记的试剂代替之前使用的未标记的试剂来制备同位素标记的本发明的化合物。本发明的化合物可以以前药的形式给药。因此，本身可能几乎或完全没有药理活性的本发明的化合物的某些衍生物在给药于身体内或身体上时可以例如通过水解裂解转化成具有所需活性的式1（或本文中公开的其它式）的化合物。这样的衍生物被称作“前药”。关于前药应用的进一步信息可见于`Pro-drugsasNovelDeliverySystems,Vol.14,ACSSymposiumSeries(THiguchi和WStella)和`BioreversibleCarriersinDrugDesign`,PergamonPress,1987(ed.EBRoche,AmericanPharmaceuticalAssociation)。可例如通过用如例如H.Bundgaard的“DesignofProdrugs”(Elsevier,1985)中描述的本领域技术人员已知为“前体部分(pro-moieties)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当的官能团来制备前药。此类前药的一些实例包括：当该化合物含有羧酸官能团（--COOH）时，前药包括其酯，例如用C1-C6烷基替代氢；当该化合物含有醇官能团（--OH）时，前药包括其醚，例如用C1-C6烷酰氧基甲基（-C1-C6酰氧基甲基）替代氢；和当该化合物含有伯氨基或仲氨基官能团（-NH2或-NHR，其中R不是H）时，前药包括其酰胺，例如用(C1-C10)烷酰基(-C1-C10酰基)替代一个或两个氢。根据前述实例和其它前药类型的实例的替代基团的进一步实例可见于上述参考文献。最后，式A的某些化合物本身可充当式A的其它化合物的前药。在式(I)至(III)或其可药用盐中阐明本发明的另一些实施方案：其中R1选自氢、氟、氯、甲基、CF3、CHF2和氰基；R2选自甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、甲基、乙基、异丙基和环丙基；R3选自H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6卤代炔基、任选被R7和C1-6烷基取代的C2-6炔基、R4N-C2-6烷基-NR4R4、R7；R4独立地为H、C1-6烷基、C2-6羟烷基、C1-6烷氧基烷基或C2-6烷基NR8R9，或两个R4基团与它们所连接的碳原子形成3-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；R5是H、F、Cl、CF3、CHF2、CF2C1-6烷基、CF2CH2NR8R9、CH2NR8R9或C1-6烷基；R6e是C1-6烷基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、(CH2)mCHR4R7、CF2(CH2)mCHR4R7或C(R4)2R7；R6z是H、F、Cl、CF3、CHF2、CF2C1-6烷基或C1-6烷基；R7是OH、NR8R9、OCH2(CH2)mNR8R9、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基、氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基氧基、氧杂环丁烷基氨基、氧杂环戊烷基、氧杂环戊烷基氧基、氧杂环戊烷基氨基、环氧乙烷基、环氧乙烷基氧基、环氧乙烷基氨基、氧杂环庚烷基、氧杂环庚烷基氧基、氧杂环庚烷基氨基、氮杂环丁烷基、氮杂环丁烷基氧基、氮杂环丁烷基氨基、吡咯烷基、吡咯烷基氧基、吡咯烷基氨基、哌啶基、哌啶基氧基、哌啶基氨基、氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基氧基、氮杂环庚烷基氨基、二氧杂环戊烷基、二氧杂环己烷基、吗啉代、硫代吗啉代、硫代吗啉代-S,S-二氧化物、哌嗪子基、二氧杂环庚烷基、二氧杂环庚烷基氧基、二氧杂环庚烷基氨基、氧氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基氧基、氧氮杂环庚烷基氨基、二氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基氧基、二氮杂环庚烷基氨基；且作为R7的一部分的所有NH可任选被R4取代；R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C3-6烯基、C3-6炔基、C3-7环烷基、C3-7环烯基、C1-C6酰基、4-12元杂环基、C6-C12芳基或5-12元杂芳基；或R8和R9与它们所连接的原子形成4-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；且R8和R9可以单独或一起被最多三个独立地选自羟基、C1-6烷氧基、C1-6羟烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基的取代基取代；R10是H、C1-6烷基；X2是C、CH或N；X3是CH或N，X4是CR4或N或NR10；X5和X6都是C或一个可以是N；a-e中的两个键是双键且另外三个是单键，以使原子X2-X6都没有两个双键与其相连；键f通常是双键，只是当X4和X5，或X4和X6是氮且X2-X6中的另外三个是C、CH或CR4时，两个键f也可以都是单键；m是0-4；条件如下：X2-X6中的至少一个和不多于三个是N或NR4；如果R6e是CF2(CH2)mCHR4R7，则R5和R6z都不是F、Cl、CF3、CHF2或CF2C1-6烷基，但如果R6e不是CF2(CH2)mCHR4R7，则R5和R6z之一是F、Cl、CF3、CHF2或CF2C1-6烷基；或结构(II)的化合物或其可药用盐，其中R1选自氢、氟、氯、甲基、CF3、CHF2和氰基；R2选自甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、甲基、乙基、异丙基和环丙基；R3选自H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6卤代炔基、任选被R7和C1-6烷基取代的C2-6炔基、R4N-C2-6烷基-NR4R4、R7；R4独立地为H、C1-6烷基、C2-6羟烷基、C1-6烷氧基烷基或C2-6烷基NR8R9，或两个R4基团与它们所连接的碳原子形成3-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；R5是H、CH2NR8R9或C1-6烷基；R6e是C1-6烷基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、(CH2)mCHR4R7、CF2(CH2)mCHR4R7或C(R4)2R7；R6z是H或C1-6烷基；R7是OH、NR8R9、OCH2(CH2)mNR8R9、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基、氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基氧基、氧杂环丁烷基氨基、氧杂环戊烷基、氧杂环戊烷基氧基、氧杂环戊烷基氨基、环氧乙烷基、环氧乙烷基氧基、环氧乙烷基氨基、氧杂环庚烷基、氧杂环庚烷基氧基、氧杂环庚烷基氨基、氮杂环丁烷基、氮杂环丁烷基氧基、氮杂环丁烷基氨基、吡咯烷基、吡咯烷基氧基、吡咯烷基氨基、哌啶基、哌啶基氧基、哌啶基氨基、氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基氧基、氮杂环庚烷基氨基、二氧杂环戊烷基、二氧杂环己烷基、吗啉代、硫代吗啉代、硫代吗啉代-S,S-二氧化物、哌嗪子基、二氧杂环庚烷基、二氧杂环庚烷基氧基、二氧杂环庚烷基氨基、氧氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基氧基、氧氮杂环庚烷基氨基、二氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基氧基、二氮杂环庚烷基氨基；且作为R7的一部分的所有NH可任选被R4取代；R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C3-6烯基、C3-6炔基、C3-7环烷基、C3-7环烯基、C1-C6酰基、4-12元杂环基、C6-C12芳基或5-12元杂芳基；或R8和R9与它们所连接的原子形成4-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；且R8和R9可以单独或一起被最多三个独立地选自羟基、C1-6烷氧基、C1-6羟烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基的取代基取代；R10是H、C1-6烷基；X2是C、CH或N；X3是CH或N，X4是CR4或N或NR10；X5和X6都是C或一个可以是N；a-e中的两个键是双键且另外三个是单键，以使原子X2-X6都没有两个双键与其相连；键f通常是双键，只是当X4和X5，或X4和X6是氮且X2-X6中的另外三个是C、CH或CR4时，两个键f也可以都是单键；m是0-4；条件如下：X2-X6中的至少一个和不多于三个是N或NR4；如果R6e是CF2(CH2)mCHR4R7，则R5不能是CF2C1-6烷基；或结构(III)的化合物或其可药用盐，其中R1选自氢、氟、氯、甲基、CF3、CHF2和氰基；R2选自甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、甲基、乙基、异丙基和环丙基；R3选自H、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6卤代炔基、任选被R7和C1-6烷基取代的C2-6炔基、R4N-C2-6烷基-NR4R4、R7；R4独立地为H、C1-6烷基、C2-6羟烷基、C1-6烷氧基烷基或C2-6烷基NR8R9，或两个R4基团与它们所连接的碳原子形成3-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；R6t是C1-6烷基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、(CH2)mCHR4R7、C(R4)2R7；R7是OH、NR8R9、OCH2(CH2)mNR8R9、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基、氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基氧基、氧杂环丁烷基氨基、氧杂环戊烷基、氧杂环戊烷基氧基、氧杂环戊烷基氨基、环氧乙烷基、环氧乙烷基氧基、环氧乙烷基氨基、氧杂环庚烷基、氧杂环庚烷基氧基、氧杂环庚烷基氨基、氮杂环丁烷基、氮杂环丁烷基氧基、氮杂环丁烷基氨基、吡咯烷基、吡咯烷基氧基、吡咯烷基氨基、哌啶基、哌啶基氧基、哌啶基氨基、氮杂环庚烷基、氮杂环庚烷基氧基、氮杂环庚烷基氨基、二氧杂环戊烷基、二氧杂环己烷基、吗啉代、硫代吗啉代、硫代吗啉代-S,S-二氧化物、哌嗪子基、二氧杂环庚烷基、二氧杂环庚烷基氧基、二氧杂环庚烷基氨基、氧氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基氧基、氧氮杂环庚烷基氨基、二氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基氧基、二氮杂环庚烷基氨基；且作为R7的一部分的所有NH可任选被R4取代；R8和R9独立地为H、C1-6烷基、C3-6烯基、C3-6炔基、C3-7环烷基、C3-7环烯基、C1-C6酰基、4-12元杂环基、C6-C12芳基或5-12元杂芳基；或R8和R9与它们所连接的原子形成4-12元单环或双环环体系，其中最多两个碳原子被N、NR4、O、S(O)x和S(O)(NR14)替代；且R8和R9可以单独或一起被最多三个独立地选自羟基、C1-6烷氧基、C1-6羟烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C2-6羟烷氧基的取代基取代；R10是H、C1-6烷基；X2是C、CH或N；X3是CH或N，X4是CR4或N或NR10；X5和X6都是C或一个可以是N；a-e中的两个键是双键且另外三个是单键，以使原子X2-X6都没有两个双键与其相连；键f通常是双键，只是当X4和X5，或X4和X6是氮且X2-X6中的另外三个是C、CH或CR4时，两个键f也可以都是单键；m是0-4；条件如下：X2-X6中的至少一个和不多于三个是N或NR4。本发明的化合物包括：。合成方法本发明的化合物及其中间体可以以有机合成领域的普通技术人员已知的许多方式制备。试剂和原材料是本领域普通技术人员容易获得的。可适用于制备本发明的化合物的合成方法的特别有用的参考资料可见于Larock,R.C.ComprehensiveOrganicTransformations,VCH:NewYork,1989，其经此引用并入本文。关于选择用于保护本发明所述的化合物中存在的反应性官能团的适当保护基的另一有用的参考资料是Greene和Wuts,ProtectiveGroupsInOrganicSynthesis,Wiley&Sons,1991，其也像充分阐述的那样经此引用并入本文。本发明的化合物可通过各种技术制备，下面阐述其中一些。本领域技术人员会理解，这些方法是代表性而非限制性的。在WO2013/014448、WO2013/169401和JMedChem56,7025(2013)（都全文经此引用并入本文）中描述了可用于构建本发明的化合物的许多反应。方法A.本发明的化合物的总体组装。方案1.片段I、II和III总体组装成最终产物这些化合物的总体合成包括构建适当的片段I、II和III的步骤，其后接着通常遵循方案1的最终组装程序。所需的4-(双环芳基)-2-氯嘧啶(I)上的2-氯在本领域技术人员公知的条件下与适当的3-硝基苯胺（或3-氨基-5-硝基嘧啶)(II)偶联。这可以是酸催化的过程或如上流程中所示是Buchwald型偶联，但其也可以是碱引发的偶联，从而有几种不同的途径形成这种关键的键。将3-硝基还原成相应的胺，这是可以以多种多样的方式进行的反应。某些可还原基团，如炔基的存在可能使这种反应复杂化，但可用于这种转化的试剂的多样性使得确信其可以完成。如果R4不是H，R4可在此步骤引入。在此例举还原性烷基化，但可以使用其它技术，例如如果在该分子中没有干扰基团，用烷基卤直接烷基化。但是，在大多数情况中，R4是H。通过用酰基氯或其它合适的(III)的酸衍生物将芳族氨基酰化，完成分子的组装，这可能要求使用肽偶联剂，其中许多是已知的。在某些情况中，该合成可能在此步骤中没有完成，并可能需要进一步的化学过程。例如，可能要从(III)中除去保护基，或(III)可能在此阶段没有安装的胺，这可随后安装，例如通过烯丙基卤的置换——在此领域中大有先例可循的技术。尽管在此没有例示，但要理解的是，在此途径上有许多可能的变体，它们经证实在某些情况下有利，不会实质影响整体策略并且是本领域普通技术人员显而易见的。下面论述几种可能的变体，但这些意在例示可能的变体，并且无意涵盖本领域普通技术人员显而易见的所有可能性。已经论述的一个实例是如果5-取代基使4-位失活，在安装联芳基键之前将苯胺偶联到2,4-二氯嘧啶的2-位上，或使用邻位定位的5-取代基，然后将其转化成所需取代基。第二个实例在于在偶联时不必使用硝基作为苯胺上的最终3-胺的保护形式。在与2-氯嘧啶基联芳偶联的过程中可以例如使用3-卤代苯胺，并使用已知方法将其转化成胺。或可以在偶联之前引入3-氨基官能团，只要其可适当地和选择性地被保护。这甚至涉及在与片段(I)偶联之前与片段(III)偶联，尽管这种方法的适用性很可能有限。在某些情况中，可以有利地将片段(II)苯胺与片段(I)联芳偶联，由此R2和/或R3基团不是最后的基团，但却是其有用的合成子，然后可以在这种偶联后或甚至在接下来描述的步骤后（如果本领域技术人员认为最适当）进行化学操控以制备最终R2和/或R3取代基。方案2.二芳胺核的备选组装由于Buchwald偶联的广泛适用性，可以用芳基卤（优选芳基氯或芳基溴）将2-氨基-4-双环杂芳基嘧啶芳基化。2-氨基-4-氯嘧啶都易得，且2-氨基-4-氯嘧啶本身已显示与多种多样的杂芳族硼酸发生Suzuki反应以形成相应的4-嘧啶基连接的联芳，而不需要保护2-氨基，例如(OrgBiomolChem9,3139(2011)、BioorgMedChem19,5756(2011)、EurJOrgChem4532(2011))。或者，可以通过在高压下用氨处理将中间体氯化物(II)简单地转化成相应的2-氨基化合物。在芳基的潜在化学中会发生较大的差异，因为现在制备芳基卤而非苯胺，下面作为(II)片段的备选合成法论述由这种改变带来的一些不同的化学。上述变化都没有改变该合成的基本策略，而是简单地改变某些基本步骤的时间安排并可能规定原材料中的某些明确的改变。最终途径的选择取决于哪种通过避免最不相容的转化而提供最容易的化学。方法B.联芳基氯片段(II)的合成。方案3.联芳片段(I)a-e的合成.本专利申请中描述的大多数4-双环芳基-2-氯嘧啶的合成大有先例可循。在方案2中，所有这些途径都利用2,4-二卤代嘧啶在4-位先于2-位发生反应的公知优先性，以便以高产率发生4-单取代。可以使用各种技术，利用吲哚和咪唑A、B、C，在经典的碱（base）条件下实现氯的直接亲核置换。但是，如果需要，此类反应也可以如对G所示作为Buchwald或Suzuki偶联运行，杂芳族硼酸和酯的广泛商业可得性允许Suzuki反应视需要用于C，并且尽管D如所示利用Sonagashira反应，接着亲核加成到缺电子的乙炔上，但这种反应也可以视需要作为Suzuki反应进行。E和F利用Suzuki反应组装，且所需的硼酸酯可购得。在所有这些情况中，如果需要进一步的取代，相应的杂芳基溴转化成所需硼酸是直接的和大有先例可循的。上述方案2不包括f（R1=CHF2）或g（R1=CF3）亚系。f系列中相应的二氯嘧啶是不为人知的，且三氟甲基已知使邻卤素失活，以致2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶首先在2-位与大多数亲核体反应——二氟甲基也可能表现出这种效应。2,4-二氯嘧啶-5-甲醛已知优先在4-位置换。因此Suzuki或Buchwald偶联会在这些系列中产生相应的醛，且这些醛容易被DAST、SF4等转化成相应的(I)的二氟甲基衍生物，这些分子相对较低的官能度导致不太可能发生严重的副反应。类似程序可用于(I)g，由此将(I)e氰基化合物或另一适当的酸衍生物转化成5-羧酸，其随后可通过HF/SF4或其它技术转化成三氟甲基衍生物(I)g。该酸也可以来自相应的醇的氧化。但是，在许多情况中，更简单的解决方案可能是简单地逆转最终组装中的前两个步骤——使2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶首先与苯胺/氨基吡啶(II)反应以实现所需2-置换，然后在4-位进行所需联芳偶联。如果将芳基卤偶联到氨基嘧啶上，可以实现类似的逆转。2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶不会非常选择性地与氨反应且产物是2和4-置换的1:1混合物，表明CF3邻位失活具有大的空间组件（stericcomponent）。如果需要提高这种方法的2-选择性，即可能更低的2-选择和更难获得5-二氟甲基类似物，则使用大体积（bulky）胺如二苄胺、接着在4-位Suzuki偶联和胺脱保护能使这一途径的产率更高并避免可能困难的分离。在一些情况中，可以有利地在嘧啶环处将苯胺基联芳嘧啶的支架组装在一起，尤其是当6,5-双环杂芳基经由碳连接到嘧啶上时。如下列方案3b中所示，如果杂芳基在其3-位被乙酰基取代，与DMF缩醛反应、接着与N-芳基胍缩合会使本发明的化合物的整个支架组装在一起。由于许多方式可以将本发明中所用的苯胺脒化（amidinate），这种途径为本发明中描述的几种化合物种类提供可行的备选方案。由于3-乙酰基化合物在吲哚、N-甲基吲哚、吡唑并[1,5-a]吡啶和咪唑并[1,2-a]吡啶系列中已知，这种备选合成法对所有4-碳连接的嘧啶系列可行。方案3B.组装多联三芳族骨架的备选途径。方法C.1,3-二氨基苯片段的合成1.检查本发明的苯胺基化合物，它们要求制备几种不同系列的2,4,5-取代苯胺。在2-位，R2可以是几种低级烷基或低级烷氧基之一。该基团可能已存在，如在3-卤代甲苯或3-卤代苯甲醚中，或其可以稍后在或不在过渡金属催化下通过适当活化的卤化物基团的置换加入。4-位取代基R3更多样。其可以是H、F、烷氧基、烷基、炔基或叔胺，这些基团中的几种在结构上相当复杂，其上具有附加的极性官能团，以助于改进该抑制剂的物理化学和药代动力学性质。如上述总体方案1中所述，1-位固定为氨基，3-位固定为硝基。但是，如果利用氨基嘧啶的Buchwald偶联，则1-位必须是卤素，且大多数时候Cl或Br是优选的。3-位便利地为硝基，但其可以是氨基，最可能具有保护基，如Boc，但如果电子或空间效应（sterics）使其相对于1-位胺失活，可能未受保护。其也可以是卤素，其随后在过渡金属催化的反应中胺化，或其可以是羰基取代基，其随后在Curtius或Beckman反应中重排。因此，当R3不是氢时，有大量1,2,4,5-四取代的苯可用作氨基苯胺环的合成子。当R3是氢时，有市售1,2,4-取代的苯合成子可用于本申请中要求保护的所有相应的化合物，并且将它们转化成片段(II)的任何实例所需的化学完全在本领域普通技术人员的能力范围内。下面给出适用于本专利中的合成子的1,2,4,5-四取代的苯衍生物的一些文献制备。只要在硝基的邻位或对位存在卤素，可经由卤素的亲核置换引入氨基或烷氧基。即使在该环中已存在给电子基团，也可发生这些置换，尤其是氟（fluoride）的置换。在Buchwald类型的反应中可以使用氯化物或溴化物以便甚至在已除去所有硝基后引入氨基或烷氧基侧链，也可用于如上文论述将芳环偶联到氨基嘧啶上。几种合成子具有1,3-二硝基取代基并且有一些文献指出一个硝基优于另一个的选择性还原。尽管不利于产率，但非选择性硝基还原不是大问题，只要可以分离异构体。由于这两个硝基最终都需要还原，不会有“错的”异构体被还原，只要可以进行用于构建片段(II)的另一所需的化学，因为“不合意的”“3-硝基”的先还原可以通过用Boc保护它、接着还原“1-硝基”并将其偶联到氯嘧啶上而简单地解决。当R3是碳基取代基时，可以在4-卤素（优选是溴或碘）上利用Suzuki或Sonagashira反应。如果存在邻位或对位氮，可以利用Finkelstein反应将氯化物转化成相应的碘化物。方案4.用于本发明的化合物的1,2,4,5-四取代的苯合成子的一些文献制备将正确的R2基团插入上述合成子——如果需要这样做——在每种情况下可以用市售试剂实现并且不需要合成任何这样的R2部分。大多数提出的R3基团也可以以能将它们并入苯胺环中的形式购得。可商购获得非常多种多样的胺，包括二胺和三胺，这同样适用于醇、烷氧基醇和氨基醇，其中许多具有构建到其中的环状结构，SAR不太可能要求任何这些部分的新型合成。但是，这不适用于更复杂的碳连接的R3部分，尤其是丙炔胺。此类化合物的两种通用制备显示在方案5中。方案5.3-氨基丁炔衍生物的制备氯丙炔（或在铜催化剂存在下为乙酸酯）相当容易与胺置换，即使离去基是叔胺（tertiary）。或者，在形成亚铵离子的条件下用仲胺处理酮可以直接与各种金属乙炔化物反应以如第二反应式中所示产生所需的化合物。在这种情况中，乙炔随后成功地用于高选择性Sonagashira反应，以形成本发明的化合物所需种类的2-炔基芳基胺。方法D.烯酰基和炔酰基片段(III)的制备本发明中的一些烷基化侧链是简单巴豆酸衍生物，相当可能在4-位或可能在更远具有增溶胺。这样的侧链在文献中大有先例可循并且不需要进一步论述。它们中的许多具有太低的作为迈克尔受体的反应性以致在极富电子的苯胺上无法发挥作用，对这些侧链而言，必须使N-芳基取代基稍微不那么富电子并因此较低失活。另一些迈克尔受体侧链含有炔，这使它们固有地是比相应的烯烃更活性的迈克尔受体。可以使用的许多炔在文献中大有先例可循，但在这一节中描述了一些特定的炔的合成。在不改变N-芳基部分的电子性质（electronics）的情况下进一步活化迈克尔受体的主要策略是添加吸电子的卤素原子。由于基于这种支架的化合物的相对较高的分子量和亲脂性，吸电子策略局限于将氟原子并入迈克尔受体中，并在下文中论述了各种单-、二-和三氟化α,β-不饱和酸作为片段(III)迈克尔受体的合成。这样做的一个问题在于氟往往相当擅长于活化迈克尔系统，并在许多情况中，该迈克尔受体必须进一步被取代以通过电子或空间手段改善反应性并且N-芳基必须相当富电子。另一问题在于这些化合物大多可以是E或Z立体异构体，一些制备会产生比较不想要的异构体，且大多数会产生E/Z混合物。但是，通常可以操控反应条件以提高所需异构体的百分比，并可以使用各种分离技术分离所需异构体，这些操控都是本领域技术人员熟悉的。方案6.2-和3-氟代链烯酸的文献合成针对迈克尔加成活化该烯酸酯系统的最直接的方法是将氟原子直接置于烯烃碳上。在2-或3-碳原子上的一个氟原子就提供充足的活化，因此加入烷基以及双键以略微降低整体活化是明智的。方案6显示可用于本发明的化合物的氟化烯的一些文献制备。所示的前四种制备都相当笼统，并可容许许多不同的烷基，因为它们都依赖于α-氟代酯前体与羰基的反应。因此可以将一个或两个烷基引入最终的烯酰胺系统的3-位，以显著调节其反应性。在顶部反应中，也例示这些化合物的烯丙基溴化倾向。在酸/酯阶段或在偶联到苯胺上后用胺置换烯丙基溴在这一领域中有据可查。在现存文献合成中，没有出现2-烷基-3-氟代肉桂酸酯或巴豆酸酯的专门制备，但如靠下的三个反应所示，3,3-二取代丙烯酸衍生物有几种通用合成，且大量先例显示这些酯产物可以完全地（cleanly）水解成所需羧酸。三苯膦基氟甲烷（triphenylphosphanylfluoromethylidene）（JOrgChem40,2796(1975)，其似乎是其家族中唯一已知的成员）可能可以用三氟甲磺酸甲酯C-甲基化，然后用于Wittig反应，尽管甚至根源（parent）看起来也相当成问题。但是据报道，在用SF4处理2-烷基β-酮酯时在复杂混合物中以适度产率获得2,3-二烷基-3-氟代丙烯酸酯的E/Z-混合物（ZhurnalOrganicheskoiKhimii,18,782(1982)），考虑到原材料便宜，即使完全没有尝试改进该反应，也可获得充足量的所需四取代的烯烃，这可能非常通用。2-烷基-3-氟代肉桂酸酯和巴豆酸酯可以如方案7中所示制备。分离1-苯基碘鎓-2-氟代烯中间体并在用LDA和烷基硼酸酯如儿茶酚硼烷衍生物处理时将甲基转移到α-碳，以形成乙烯基硼烷。这些又可以在Pd催化下用一氧化碳羧甲基化以产生所需化合物的一种异构体。方案7.2-烷基-3-氟代肉桂酸酯和不饱和酯的合成。方案8.2-三氟甲基链烯酸酯的一些制备。方案9.单烷基化的3-三氟甲基丙烯酸酯的一些制备有几种方法用于合成2-三氟甲基巴豆酸酯和更高级的类似物。其中一些例示在方案8中。第一个反应非常有意义，并且因为在该合成结束时引入2,3-双键，在进行亚砜氧化-消除前可通过加成或氢化改性4,5-双键，以获得多种多样的3,3-二烷基-2-三氟甲基丙烯酰胺。在三氟甲基酮上的Horner-Wadsworth-Emmons反应证实是这类化合物的相当通用的制备，该反应是主要或完全E-立体选择性的。跨炔酸酯（ynoate）加成HI可以是完全Z-选择性的并且不依赖于三氟甲基（TetLetters36,2469(1995))，因此通过如第三个反应中所示将HI添加到3-烷基丙炔酸中、接着与三氟甲基铜酸盐（trifluoromethylcuprate）试剂偶联，可以简单地逆转第二个反应的立体选择性。通过使用Pd催化的Stille偶联而非作者描述的铜偶联，可以使第四个反应通用得多。尽管文献看起来没有很好的制备2-二氟甲基巴豆酰胺和更高级同系物的方法，但由于可能互变异构化成非常反应性的3,3-二氟丙烯酰胺异构体，此类化合物可能没有用。但是，3,3-二氟丙酮酸酯的近期合成（JFluorineChem130,682(2009)）允许用基于膦酸酯的途径获得这些化合物（JFluorineChem113,177(2002)）。乙烯基卤的二氟甲基化（JAmerChemSoc134,5524(2012),AngewChemIntEdn51,12090(2012)，与此类试剂将1,1-二溴烯烃单二氟甲基化的能力(JFluorineChem111,85(2001)）相结合允许它们如下所示制备。方案10.2-二氟甲基链-2-烯酸酯衍生物的制备如果互变异构化是一个问题，晶体结构表明在这一位置有空间留给1,1-二氟乙基，尽管这一官能团看起来在链-2-烯酸酯的α-位置上不是已知的，但3,3-二氟-2-氧代丁酸酯是已知的（JOrgChem60,5174(1999)）并且会以与相应的三氟丙酮酸酯类似的方式（JFluorineChem113,177(2002)）与Wittig试剂反应形成这些化合物。方案114,4-二氟巴豆酸酯和千里光酸酯（senecoate）的合成方案11显示4,4-二氟巴豆酸酯和4,4-二氟千里光酸酯（任何一种都具有用作侧链的充足活性）的文献合成。但是，至少就巴豆酸酯而言，这太活性以致无法使用，可以通过延长烷基链来改善这种活性，这可以如方案12中所示使用易得的2,2-二氟链烷酸酯和Claisen缩合、接着多步还原，或通过形成2,2-二氟代醛、接着Horner-Wadsworth-Emmons反应实现。由于溴二氟乙酸乙酯和草酸二乙酯都容易转化成更长链的2,2-二氟代酯和醛，容易用烷基卤C-烷基化，利用方案11中程序的轻微修改可获得多种多样的4,4-二氟链烯酸酯侧链。方案12.4,4-二氟链烯酸的一些制备方案13显示用于形成E-3-甲基-4,4-二氟链-2-烯酸的大有先例可循的途径，其非常类似于方案9中的一些化学。这样的化合物也是有价值的，因为是本申请中揭示的所有氟化迈克尔受体中最低活化的。方案13.E-3-甲基-4,4-二氟链-2-烯酸的制备方案14(a)显示一种引人关注的反应，由此二-或三-氟巴豆酸酯可以在低温下与2-甲基丙二酸酯交换1-和2-碳原子以形成2-甲基类似物，这具有在巴豆酸酯与二氟巴豆酸酯之间的中间亲电性，但空间位阻低于二氟千里光酸酯。尽管在文献中并非直接有先例可循，但通过在分子，如方案12中制备的那些分子上进行这种转化，延长的烷基侧链预计会立体选择性地产生E-2-甲基-4,4-二氟链-2-烯酸酯，这会产生该系列中的其余三取代的异构体，这种方法例示在方案14(b)中。方案14.4,4-二氟惕各酸酯和更高级同系物的制备在JMedChem49,1475(2006)中论述了许多氨基取代的炔酸侧链的合成，这些经此引用并入本文。之前在本申请中已经描述了许多3-氨基-3,3-二烷基丙炔衍生物的制备。这些化合物可以如JMedChem49,1475(2006)中所述在乙炔1-碳上羧化以制备用于本发明的化合物的更空间受阻但增溶性的氨基炔基侧链。在方案15中，在两个步骤中描述了5-溴-2,6-二氟-3-硝基吡啶的合成。这种新型化合物是式(II)的二氨基吡啶的非常通用的合成子，并在该方案中例示了用于制备式(II)的化合物的吡啶环的几种不同的转化。由于硝基和溴可分别通过还原或铜催化的胺化转化成与联芳部分的胺连接基（JOrgChem77,6908,7471(2012),EurJOrgChem1854(2010)）、接着视需要进行保护步骤，可以利用任一氟的置换植入所需取代基。第一亲核体可以选择性地置换2-氟，但随后在略微更强力的条件（forcingconditions）下置换6-氟，因此通过选择置换次序，可以构建该分子以使溴或硝基成为与联芳核的连接基。通过利用镍膦和氧化膦络合物化学选择性活化C-F键以与各种烷基/芳基金属衍生物交叉偶联，进一步增强5-溴-2,6-二氟-3-硝基吡啶的通用性（JOrgChem67,8991(2002),OrgLetters,14,3316(2012)）。方案15.3,5-二氨基吡啶连接基的合成.除上文已经描述的已知化合物外，本领域中已知的许多其它化合物可用作合成中的原材料，并在下表1中给出无意构成排他性列举的一系列这样的化合物以及关于它们的参考文献。在许多情况中，摘录该化合物的参考文献显示了除明确涵盖的那些外还清楚适用于本发明的其它化合物的化学转化，并且本领域技术人员会理解，它们宽泛地适用于本发明的其它方面。表1.用于合成的另一些已知化合物。治疗方法本发明还涉及治疗方法和用途，包括给予单独的或与其它治疗剂或缓和剂组合的本发明的化合物或其可药用盐。在一个实施方案中，本发明涉及治疗或抑制哺乳动物的细胞增殖、细胞侵袭、转移、凋亡或血管生成的方法，包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐。在另一实施方案中，本发明涉及治疗或抑制哺乳动物的细胞增殖、细胞侵袭、转移、凋亡或血管生成的方法，包括向所述哺乳动物给予与第二治疗剂组合的治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐，其中本发明的化合物和所述第二治疗剂的总量有效治疗或抑制所述细胞增殖、细胞侵袭、转移、凋亡或血管生成。在一个实施方案中，所述第二治疗剂是选自有丝分裂抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、辐射、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物响应改性剂、抗体、细胞毒素、抗激素药和抗雄激素药的抗肿瘤剂。在另一些实施方案中，所述细胞增殖、细胞侵袭、转移、凋亡或血管生成由RTKs的erbB家族的成员，主要是EGFR，最可能是EGFR的T790M突变形式介导。在另一实施方案中，所述细胞增殖、细胞侵袭、转移、凋亡或血管生成与选自以下的癌症相关联：成胶质细胞瘤、肺癌（例如鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、腺癌、细支气管肺泡癌（BAC）、具有局灶浸润的BAC、具有BAC特征的腺癌、和大细胞癌）、胰腺癌、头颈癌（例如鳞状细胞癌）、乳腺癌、结肠直肠癌、上皮癌（例如鳞状细胞癌）、卵巢癌和前列腺癌和过表达erbB家族成员或含有erbB家族的致癌活化突变体（无论在肿瘤中是否过表达这些蛋白质）的任何其它癌。本发明的另一实施方案涉及本发明的化合物，其用作药物，特别用于治疗其中EGFR和/或突变EGFR蛋白（例如L858R/T790MEGFR）活性的抑制可引发益处的疾病，如癌症。本发明的再一实施方案涉及本发明的化合物或其可药用盐用于制备用于治疗EGFR介导的疾病和/或病况，特别是上列疾病和/或病况的具有EGFR抑制活性的药物的用途。术语“治疗有效量”是指在一定程度上缓解受治疗的病症的一种或多种症状的化合物的给药量。关于癌症治疗，治疗有效量是指具有减小肿瘤尺寸、抑制（即减慢或停止）肿瘤转移、抑制（即减慢或停止）肿瘤生长或肿瘤侵袭和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种病征或症状的作用的量。主治诊断医师（作为本领域技术人员）利用常规技术和通过观察在类似情况下获得的结果，可以容易地确定治疗有效量。在确定治疗有效量（剂量）时，主治诊断医师考虑许多因素，包括但不限于：哺乳动物的物种；其体型、年龄和一般健康状况；涉及的具体疾病；疾病的侵犯程度或严重性；个体患者的响应；给药的特定化合物；给药模式；给药制剂特有的生物利用度；所选给药方案；伴随用药；和其它相关情况。除非另行指明，本文所用的术语“治疗”是指该术语适用的病症或病况或此类病症或病况的一个或多个症状的逆转、减轻、进程抑制或预防。术语“治疗”也指如上文刚刚定义的“治疗”的治疗行为。术语“治疗”还包括哺乳动物的辅助治疗。本文所用的“癌症”是指由异常细胞生长引起的任何恶性和/或侵袭性生长或肿瘤，包括以形成它们的细胞类型命名的实体瘤、血癌、骨髓癌或淋巴系统癌。实体瘤的实例包括但不限于肉瘤和癌。血癌的实例包括但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。术语“癌症”包括但不限于源于体内特定部位的原发癌、已从其起始位置扩散到身体其它部位的转移癌、原始原发癌在缓解后的复发、和第二原发癌——之前有不同类型的癌症史的人的新发原发癌。在另一实施方案中，本发明提供抑制细胞增殖的方法，包括使细胞与有效抑制细胞增殖的量的本发明的化合物或其可药用盐接触。在另一实施方案中，本发明提供诱发细胞凋亡的方法，包括使细胞与有效诱发细胞凋亡的量的本文所述的化合物接触。“接触”是指使本发明的化合物或可药用盐和表达突变EGFR或在特定细胞类型中起到转化作用的其它靶激酶之一的细胞放在一起以使该化合物可以直接或间接地影响EGFR或其它激酶的活性。接触可以体外（即在人工环境中，例如但不限于在试管或培养基中）或体内（即在活体，例如但不限于小鼠、大鼠或兔子内）实现。在一些实施方案中，所述细胞在细胞系，如癌细胞系中。在另一些实施方案中，所述细胞在组织或肿瘤中，并且该组织或肿瘤可以在哺乳动物（包括人）体内。可以通过能将所述化合物递送至作用位点的任何方法实现本发明的化合物的给药。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、非肠道注射（包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注）、局部和直肠给药。可以调节给药方案以提供最佳的所需响应。例如，可以给予单次推注（bolus），可以随时间经过给予几个分剂量或可以如治疗情况的紧急状况所指示成比例降低或提高剂量。为了易于给药和剂量一致，以单位剂型配制非肠道组合物尤其有利。本文所用的单位剂型是指适合作为待治疗的哺乳动物用的单一剂量的物理分立单位；各单位含有与所需药物载体结合的、经计算产生所需治疗作用的预定量的活性化合物。本发明的单位剂型的规格取决并直接依赖于(a)该化疗剂的独特特性和要实现的特定治疗或预防作用，和(b)用于治疗个体敏感性的此类活性化合物的配混领域中的固有限制。适当的剂量随治疗的病况的类型和严重程度而变，并可以包括单剂或多剂。主治诊断医师理解对任何特定哺乳动物而言，应根据个体需要和执行或监督组合物给药的人员的专业判断而随时间调整具体的给药方案，本文所列的剂量范围仅是示例性的并且无意限制所要求保护的组合物的范围或实践。例如，可以根据药代动力学或药效学参数（可能包括临床效应，如毒效和/或实验室值）来调整剂量。因此，本发明包括如技术人员确定的患者内剂量递增。化疗剂的适当剂量和给药方案的确定是相关领域中公知的并被理解为在获悉本文公开的教导内容的技术人员的能力范围内。可以通过比较它们的体外活性和在动物模型中的体内活性来确定本发明的化合物的有效剂量。需要用于治疗的化合物或其活性盐或衍生物的量不仅随所选的特定盐而变，还随给药途径、治疗的病况的性质以及患者的年龄和身体状况而变，最终由主治医师或临床医师裁量。本发明的化合物可以以每天大约0.1至大约2,000毫克的剂量水平给药于患者。对体重大约70公斤的正常成年人而言，每天每公斤体重大约0.01至大约10毫克的剂量是优选的。但是，所用的具体剂量可以变化。例如，剂量可取决于许多因素，包括患者的要求、治疗的病况的严重程度和所用化合物的药理活性。对特定患者的最佳剂量的确定是本领域技术人员公知的。在一些情况中，低于上述范围下限的剂量水平可能绰绰有余，而在另一些情况中，可以使用更大剂量而不会造成有害副作用，前提条件是将这样的更大剂量先分成几个较小剂量以供全天给药。本发明的药物组合物可以以散装、单个单位剂量或多个单位剂量的形式制备、包装或出售。本文所用的“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的分立量。活性成分的量通常等于给予个体的活性成分的剂量或这种剂量的方便的分数，例如这种剂量的一半或1/3。活性成分、可药用载体和任何附加成分在本发明的药物组合物中的相对量可以变化，取决于治疗的个体的身份、体型和身体状况并进一步取决于该组合物的给药途径。例如，该组合物可包含0.1%至100%(w/w)的活性成分。适用于递送本发明的化合物的药物组合物及其制备方法是本领域技术人员显而易见的。这样的组合物及其制备方法可见于例如'Remington'sPharmaceuticalSciences',第19版（MackPublishingCompany,1995），其公开内容全文经此引用并入本文。本发明的化合物可以口服给药。口服给药可能涉及吞服，以使该化合物进入胃肠道，或可以采用口腔或舌下给药，由此该化合物直接从口腔进入血流。适合口服给药的制剂包括固体制剂，如片剂、含颗粒、液体或粉末的胶囊、锭剂（包括液体填充的）、咀嚼剂、多-和纳米-微粒剂、凝胶剂、固溶体、脂质体、膜剂（包括粘膜贴片）、卵丸剂（ovules）、喷雾剂和液体制剂。液体制剂包括混悬液、溶液、糖浆和酏剂。此类制剂可用作软胶囊或硬胶囊剂的填料，并通常包括载体，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。也可以通过固体的重构制备液体制剂。本发明的化合物也可用在速溶、速崩的剂型中，例如Liang和Chen的ExpertOpinioninTherapeuticPatents,11(6),981986(2001)中描述的那些，其公开内容全文经此引用并入本文。对于片剂剂型，根据剂量，药物可构成剂型的1重量%至80重量%，更通常构成剂型的5重量%至60重量%。除药物外，片剂通常还含有崩解剂。崩解剂的实例包括淀粉羟乙酸钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素纳、交聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶凝淀粉和海藻酸钠。通常，崩解剂占剂型的1重量%至25重量%，优选5重量%至20重量%。通常使用粘合剂以赋予片剂制剂内聚性。合适的粘合剂包括微晶纤维素、明胶、糖、聚乙二醇、天然和合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶凝淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂还可含有稀释剂，如乳糖（一水合物、喷雾干燥的一水合物、无水的等）、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、微晶纤维素、淀粉和二水合磷酸氢钙。片剂还可任选包含表面活性剂，如十二烷基硫酸钠和吐温80，以及助流剂，例如二氧化硅和滑石。当存在时，表面活性剂可占片剂的0.2重量%至5重量%，助流剂可占片剂的0.2重量%至1重量%。片剂通常还含有润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、十八烷基富马酸钠以及硬脂酸镁与十二烷基硫酸钠的混合物。润滑剂通常占片剂的0.25重量%至10重量%，优选占片剂的0.5重量%至3重量%。其它可能的成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂、防腐剂和掩味剂。片剂混合物可以直接压制或用辊压制以形成片剂。或者，片剂混合物或混合物的一部分可在压片前湿法造粒、干法造粒或熔融造粒、熔体凝固或挤出。最终制剂可能包含一个或多个层，并可以是包衣或未包衣的；其甚至可以装入胶囊。在H.Lieberman和L.Lachman的"PharmaceuticalDosageForms:Tablets,Vol.1'',MarcelDekker,N.Y.,N.Y.,1980(ISBN0-8247-6918-X)中论述了片剂的配制。上文论述的各种给药类型的上述制剂可以配制成速释和/或调释（modifiedrelease）的。调释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序化释放。在美国专利No.6,106,864中描述了用于本发明目的的合适的调释制剂。在Verma等人，PharmaceuticalTechnologyOn-line,25(2),1-14(2001)中可见其它合适的释放技术的细节，例如高能分散体和渗透和包衣粒子。在WO00/35298中描述了使用咀嚼胶（chewinggum）实现受控释放。本发明的化合物也可以直接给药到血流中，肌肉中或内脏器官中。合适的肠道外给药方式包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。合适的肠道外给药装置包括针（包括微针）注射器、无针注射器和输注技术。肠道外制剂通常是水溶液，其可以含有赋形剂，如盐、碳水化合物和缓冲剂（优选到3至9的pH值），但是，对于一些用途，它们更适合配制成无菌非水溶液或要与合适的媒介物，如无菌无热原水结合使用的干燥形式。使用本领域技术人员公知的标准制药技术，可容易地实现肠道外制剂在无菌条件下的制备（例如通过冻干）。可以使用适当的配制技术，例如加入增溶剂来提高肠道外溶液制备中所用的式(I)的化合物的溶解度。肠道外给药制剂可以配制成速释和/或调释的。因此，本发明的化合物可以配制成固体、半固体或触变液以作为提供活性化合物的调释的植入式储库剂（depot）给药。此类制剂的实例包括涂有药物的支架和聚(乙交酯-dl-丙交酯)或PGLA微球。本发明的化合物可以与可溶大分子体，如环糊精及其合适的衍生物或含聚乙二醇的聚合物结合以改进它们以任何上述给药模式使用时的溶解度、溶出速率、掩味效果、生物利用度和/或稳定性。例如，药物-环糊精复合物据发现通常可用于大多数剂型和给药途径。可以使用包合和非包合复合物。作为与药物直接复合的替代方案，环糊精可以用作辅助添加剂，即作为载体、稀释剂或增溶剂。最常用于这些用途的是α-、β-和γ-环糊精，其实例可见于国际专利申请Nos.WO91/11172、WO94/02518和WO98/55148。术语“联合治疗”是指本发明的化合物与至少一种附加药物或药剂一起相继或同时给药。联合治疗包括在分开的剂型中或在相同药物制剂中使用本发明的化合物和其它治疗剂。本发明的化合物可以与一种或多种治疗剂联合使用（同时、相继或分别给药）。在本发明的一个实施方案中，与本发明的化合物和本文所述的药物组合物联合使用的抗癌剂是抗血管生成剂（例如阻止肿瘤形成新的血管的试剂）。抗血管生成剂的实例包括例如VEGF抑制剂、VEGFR抑制剂、TIE-2抑制剂、PDGFR抑制剂、血管生成素抑制剂、PKCI3抑制剂、CQX-2（环加氧酶II）抑制剂、整合素（α-v/β-3）、MMP-2（基质金属蛋白酶2）抑制剂和MMP-9（基质金属蛋白酶9）抑制剂。优选的抗血管生成剂包括舒尼替尼（SutenFM）、贝伐单抗（AvastinTM）和阿西替尼（AG13736）。附加的抗血管生成剂包括瓦他拉尼（CGP79787）、索拉非尼（NexavarTM）、哌加他尼钠（MacugenTM）、凡德他尼（ZactimaTM）、PF-0337210（Pfizer）、SU14843（Pfizer）、AZD2171（AstraZeneca）、雷珠单抗（LucentisTM）、NeovastatTM（AE941）、四硫钼酸盐（tetrathiomolybdata）（CoprexaTM）、AMG706（Amgen）、VEGFTrap（AVE0005）、CEP7055（Sanofi-Aventis）、XL880（Exelixis）、替拉替尼（BAY57-9352）和CP-868,596（Pfizer）。可以与本发明的化合物和本文所述的药物组合物联合使用的抗血管生成剂的其它实例包括塞来昔布（CelebrexTM）、帕瑞昔布（DynastatTM）、地拉考昔（deracoxib）（SC59046）、罗美昔布（PreigeTM）、伐地昔布（BextraTM）、罗非昔布（VioxxTM）、艾拉莫德（CareramTM）、IP751（lnvedus）、SC-58125（Pharmacia）和依托考昔（ArcoxiaTM）。其它抗血管生成剂包括依昔舒林（AptosynTM）、双水杨酸酯（AmigesicTM）、二氟尼柳（DolobidTM）、布洛芬（MotrinTM）、酮洛芬（OrudisTM）、萘丁美酮（RelafenTM）、吡罗昔康（FeldeneTM）、萘普生（AIeveTM,NaprosynTM）、双氯芬酸（VoltarenTM）、消炎痛（IndocinTM）、舒林酸（ClinoriITM）、托美丁（tolmetin）（TolectinTM）、依托度酸（LodineTM）、酮咯酸（ToradoITM）和奥沙普秦（DayproTM）。其它抗血管生成剂包括ABT510（Abbott）、阿雷司他（apratastat）（TMI005）、AZD8955（AstraZeneca）、incyclinide（MetastatTM）和PCK3145（Procyon）。其它抗血管生成剂包括阿曲汀（NeotigasonTM）、plitidepsin（aplidineTM）、cilengtide（EMD121974）、康普瑞汀A4（CA4P）、芬维A胺（fenretinide）（4HPR）、常山酮（TempostatinTM）、PanzemTM（2-甲氧雌二醇）、PF-03446962（Pfizer）、瑞马司他（BMS275291）、卡妥索单抗（RemovabTM）、来那度胺（RevlimidTM）、角鲨胺（EVIZONTM）、沙利度胺（ThalomidTM）、UkrainTM（NSC631570）、VitaxinTM（MEDI522）和唑来膦酸（ZometaTM）。在另一实施方案中，该抗癌剂是所谓的信号转导抑制剂（例如抑制控制细胞生长、分化和存活的基本过程的调节分子在细胞内交流的方式）。信号转导抑制剂包括小分子、抗体和反义分子。信号转导抑制剂包括例如激酶抑制剂（例如酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂）和细胞周期抑制剂。信号转导抑制剂更具体包括例如法呢基蛋白转移酶抑制剂、EGF抑制剂、ErbB-1（EGFR）、ErbB-2、panerb、IGF1R抑制剂、MEK、c-Kit抑制剂、FLT-3抑制剂、K-Ras抑制剂、Pl3激酶抑制剂、JAK抑制剂、STAT抑制剂、Raf激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、P70S6激酶抑制剂、WNT通路抑制剂和所谓的多靶向激酶抑制剂。优选的信号转导抑制剂包括吉非替尼（IressaTM）、西妥昔单抗（ErbituxTM）、埃罗替尼（TarcevaTM）、曲妥珠单抗（HerceptinTM）、舒尼替尼（SutentTM）和伊马替尼（GleevecTM）。可以与本发明的化合物和本文所述的药物组合物联合使用的信号转导抑制剂的另一些实例包括BMS214662（Bristol-MyersSquibb）、洛那法尼（SarasarTM）、pelitrexol（AG2037）、马妥珠单抗（EMO7200）、尼妥珠单抗（TheraCIMh-R3TM）、帕尼单抗（VectibixTM）、凡德他尼（ZactimaTM）、帕唑帕尼（SB786034）、ALT110（AlterisTherapeutics）、BIBW2992（BoehringerIngelheim）和CerveneTM（TP38）。信号转导抑制剂的其它实例包括PF-2341066（Pfizer）、PF-299804（Pfizer）、卡奈替尼、帕妥珠单抗（OmnitargTM）、拉帕替尼（TycerbTM）、培利替尼（EKB569）、米替福新（MiltefosinTM）、BMS599626（Bristol-MyersSquibb）、Lapuleucel-T（NeuvengeTM）、NeuVaxTM（E75癌症疫苗）、OsidemTM、木利替尼（TAK-165）、帕尼单抗（VectibixTM）、拉帕替尼（TycerbTM）、培利替尼（EKB569）和帕妥珠单抗（OmnitargTM）。信号转导抑制剂的其它实例包括ARRY142886（ArrayBiopharm）、依维莫司（CerticanTM）、佐他莫司（EndeavorTM）、坦罗莫司（temsirolimus）（ToriseITM）和AP23573（ARIAO）。另外，其它信号转导抑制剂包括XL647（Exelixis）、索拉非尼（NexavarTM）、LE-AON（GeorgetownUniversity）和GI-4000（Globelmmune）。其它信号转导抑制剂包括ABT751（Abbott）、alvocidib（夫拉平度）、BMS387032（BristolMyers）、EM1421（Erimos）、N-(3-氯-1H-吲哚-7-基)-1,4-苯二磺酰胺（indisulam）（E7070）、seliciclib（CYC200）、BIO112（OncBio）、BMS387032（Bristol-MyersSquibb）、PO0332991（Pfizer）和AG024322（Pfizer）。在可以与本发明的试剂联合使用的信号转导抑制剂中，以埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、埃克替尼、阿法替尼、来那替尼、peletinib和dacomitinib为例的其它erbB族抑制剂被认为尤其有意义。所有这些化合物都具有足够的野生型erbB激酶抑制活性以具有基于机制的（mechanism-based）剂量限制性毒性，但都可以以容许量给药并表现出良好的临床活性。它们的主要弱点之一在于很好响应这些药剂的肿瘤倾向于具有erbB突变，所述突变使该肿瘤对该抑制剂异常敏感，但在与第二种突变结合时，倾向于使该肿瘤非常耐受这些试剂。上文已经论述了加速这一过程的选择压力。本发明的化合物靶向主要耐药性突变体，并且由于它们对野生型酶具有极低活性，不会显著增加基于机制的（mechanismbased）毒性。但是，它们会使演化中的双重突变体处于与原始敏感突变体相同的选择劣势下，因此极大减慢或可能完全防止耐药株的出现。因此，这种组合经证实在临床上非常有用。本发明考虑本发明的化合物与经典抗肿瘤剂一起使用。经典抗肿瘤剂包括激素调节剂如激素、抗激素、雄激素激动剂、雄激素拮抗剂和抗雌激素治疗剂、组蛋白去乙酰化酶（HOAC）抑制剂、基因沉默剂或基因活化剂、核糖核酸酶、proteosomics、拓扑异构酶I抑制剂、喜树碱衍生物、拓扑异构酶II抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、聚(AOP-核糖)聚合酶-1（PARP-1）抑制剂、微管蛋白抑制剂、抗生素、植物来源的纺锤体抑制剂、铂配位化合物、基因治疗剂、反义寡核苷酸、血管靶向剂（VTAs）和他汀类。与本发明的化合物联合使用的抗肿瘤剂的实例包括Velcade（硼替佐米）、9-氨基喜树碱、贝洛替康、喜树碱、二氟替康、edotecarin、依喜替康（Daiichi）、吉马替康、10-羟基喜树碱、伊立替康HCI（Camptosar）、勒托替康、Orathecin（鲁比替康，Supergen）、拓扑替康、喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、伊立替康、edotecarin、拓扑替康、阿柔比星、阿霉素、氨萘非特、氨柔比星、蒽环霉素（annamycin）、柔红霉素、多柔比星、依沙芦星、表柔比星、依托泊苷、伊达比星、加柔比星、羟基脲、奈莫柔比星、米托蒽醌（mitoxantrone）、吡柔比星、匹杉琼（pixantrone）、丙卡巴肼、蝴蝶霉素、索布佐生、他氟泊苷（tafluposide）、戊柔比星、Zinecard（右丙亚胺）、氮芥N-氧化物、环磷酰胺、六甲蜜胺、AP-5280、apaziquone、brostallicin、苯达莫司汀、白消安、卡波醌、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、达卡巴嗪、雌莫司汀、福莫司汀、葡磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、马磷酰胺、氮芥（mechlorethamine）、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、丝裂霉素C、米托蒽醌、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替哌和铂配位的烷基化化合物，如顺铂、Paraplatin（卡铂）、依铂、洛铂、奈达铂、Eloxatin（奥沙利铂，Sanofi）、链脲霉素、赛特铂（satrplatin）及其组合。本发明还考虑本发明的化合物与二氢叶酸还原酶抑制剂（如甲氨蝶呤和三甲曲沙葡糖醛酸盐）、嘌呤拮抗剂（如6-巯基嘌呤核糖苷、巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨、氯法拉滨（Clolar）、氟达拉滨、奈拉滨和雷替曲塞）、嘧啶拮抗剂（如5-氟尿嘧啶）、Alimta（培美曲塞二钠（premetrexeddisodium））、卡培他滨（XelodaTM）、阿糖胞苷、GemzarTM（吉西他滨）、替加氟、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷（包括十八烷基磷酸盐（ocfosfate）、磷酸盐硬脂酸盐，缓释和脂质体形式）、依诺他滨、5-阿扎胞苷（Vidaza）、地西他滨和乙炔基胞苷）和其它抗代谢物如依氟鸟氨酸、羟基脲、甲酰四氢叶酸、诺拉曲塞（Thymitaq）、3-氨基吡啶-2-甲醛-硫代半卡巴腙（triapine）、三甲曲沙和N-(5-[N-(3,4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基甲基)-N-甲基氨基]-2-噻吩甲酰)-L-谷氨酸及其组合一起使用。在与本发明的化合物，任选与一种或多种其它药剂的联合疗法中使用的经典抗肿瘤细胞毒素剂的其它实例包括紫杉醇白蛋白结合颗粒注射悬液（Abraxane）（AbraxisBioScience,Inc.）、巴他布林（Batabulin）（Amgen）、长春氟宁（Bristol-MyersSquibbCompany）、放线菌素D、博来霉素、丝裂霉素C、新制癌菌素（Zinostatin）、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨（Navelbine）、多西他赛（Taxotere）、奥他赛、紫杉醇（包括Taxoprexin，一种DHA/紫杉醇缀合物）、顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂（Eloxatin）、赛特铂、伊立替康（Camptosar）、卡培他滨（Xeloda）、奥沙利铂（Eloxatin）、多西他赛阿利维A酸（Taxoterealitretinoin）、Canfosfamide（TelcytaTM）、DMXAA（Antisoma）、伊班膦酸、L-天冬酰胺酶、培门冬酶（OncasparTM）、乙丙昔罗（EfaproxynTM-放射疗法））、贝沙罗汀（TargretinTM）、替米利芬、TheratopeTM（Biomira）、维甲酸（VesanoidTM）、替拉扎明（TrizaoneTM）、莫特沙芬钆（XcytrinTM）CotaraTM（mAb）和NBI-3001（ProtoxbTherapeutics）、聚谷氨酸-紫杉醇（XyotaxTM）及其组合。实施例缩写DMSO　二甲亚砜DTT　二硫苏糖醇ATP　三磷酸腺苷EDTA　乙二胺四乙酸Ki　酶抑制常数DMEM　Dulbecco's改良Eagle培养基NCS　新生牛血清PBS　磷酸盐缓冲盐水PMSF　苯基甲磺酰氟ELISA　酶联免疫吸附测定IgG　免疫球蛋白GFBS　胎牛血清BDNF　脑源性神经营养因子。本发明的化合物的合成。方案16.2-(3-丁-2-烯酰胺基/戊-2-烯酰胺基-4-氟苯胺基)-4-杂芳基嘧啶A-E的合成。实施例1.　化合物A的合成如WO2008/137027中所述，在含有无水K2CO3的DMF中用1当量甲醇处理2,-二氟-1,5-二硝基苯，接着用连二亚硫酸钠将2-茴香基硝基选择性还原成胺，并色谱分离提供4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺。如WO2013/014448中所述，在含有对甲苯磺酸的热戊醇中与3-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶缩合产生三芳基支架。用雷尼镍或Fe/AcOH还原硝基，新制成的胺如US6297258中所述在0℃下在THF中用4-溴巴豆酰氯酰化。如US6297258中所述用N-甲基哌嗪原位置换4-溴完成化合物A的合成。实施例2.　化合物B的合成使用聚合物负载的KRuIO4或本领域技术人员已知的其它氧化将已知的3-(1-氮杂环丁烷基)丙醇氧化成相应的醛。与羧甲基Wittig试剂反应、接着用LiOH皂化产生5-(1-氮杂环丁烷基)戊-2-烯酸，其用草酰氯转化成相应的酰基氯，并用实施例1中所述的三芳胺胺化，以产生化合物B。实施例3.　化合物C的合成使实施例1中所述的4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺与2-氯-4-(N-甲基吲哚-3-基)嘧啶缩合并将硝基还原成相应的胺，并在实施例1中所述的条件下与4-溴巴豆酰氯偶联产生所需的4-溴巴豆酰胺化三芳胺支架。在US6297258中所述的条件下用双(2-羟乙基)胺置换溴完成化合物C的合成。实施例4.　化合物D的合成该合成与化合物C的合成相同，只是在最后一个步骤中，用4-(哌啶-1-基)哌啶进行溴置换以产生化合物D。实施例5.　化合物E的合成该合成与化合物C的合成相同，只是在最后一个步骤中，用哌啶进行溴置换以产生化合物E。方案17.2-(3-丁-2-烯酰胺基苯胺基)-4-杂芳基嘧啶F-I的合成。实施例6.　化合物F的合成使市售4-硝基-邻甲苯胺（R=H）和2-乙基-5-硝基苯胺（R=Me）与2-氯-4-(N-甲基吲哚-3-基)嘧啶缩合，在这种情况中将硝基还原成相应的胺，并在实施例1中所述的条件下与4-溴巴豆酰氯偶联产生所需的4-溴巴豆酰胺化三芳胺支架。当R=H时，在US6297258中所述的条件下用哌啶置换溴完成化合物F的合成。实施例7.　化合物G的合成如实施例6中所述的溴巴豆酰胺（其中R=CH3）与3-羟基氮杂环丁烷在US6297258中所述的条件下的反应完成化合物G的合成。实施例8.　化合物H的合成如WO2013/014448中所述，2-甲氧基-5-硝基苯胺与3-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶在含有对甲苯磺酸的热戊醇中的缩合产生适当的三芳基支架。将硝基还原成相应的胺，并在实施例1中所述的条件下与4-溴巴豆酰氯偶联产生所需的4-溴巴豆酰胺化三芳胺支架。在US6297258中所述的条件下用1-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯置换溴完成化合物H的合成。实施例9.　化合物I的合成该合成与化合物H的合成相同，只是在最后一个步骤中，用2-甲基-2,7-二氮杂螺环[4.4]壬烷进行溴置换以产生化合物I。方案18.2-(3-丁-2-烯酰胺基-4-氨基炔基苯胺基)-4-杂芳基嘧啶J-M的合成。实施例10.　化合物J的合成通过3-氟溴苯的二硝化制备4-溴-2-氟-1,5-二硝基苯，氟被氢氧根离子选择性置换，然后如(JOrgChem56,5958(1991)和ChemMedChem6,1411(2011)所述用连二亚硫酸钠选择性还原邻位硝基。邻甲基化完成用于方案18化合物的关键苯胺的合成，其如WO2013/014448中所述在含有对甲苯磺酸的热戊醇中与2-氯-4-(N-甲基吲哚-3-基)嘧啶偶联，然后用Boc酐保护以产生适当的三芳基支架。利用Sonagashira反应将4-甲基-1-(3-甲基丁-3-炔基)哌嗪偶联到溴苯胺部分上，在乙酸中用铁将硝基还原成胺，视需要加入另外的酸以除去Boc保护基。通过用巴豆酰氯酰化苯胺氨基而完成化合物J的合成。实施例11.　化合物K的合成如实施例10中所述合成关键的联芳基化溴苯胺，然后利用Sonagashira反应将N-炔丙基吡咯偶联到其上。如实施例10中所述的硝基还原也除去Boc基团，用4-溴巴豆酰氯将该胺酰化，并如US6297258中所述用二甲胺置换溴以完成化合物K的制备。实施例12.　化合物L的合成如实施例10中所述制备4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺，然后如WO2013/014448中所述在含有对甲苯磺酸的热戊醇中与3-(2-氯嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶偶联，产生适当的三芳基支架。然后利用Sonagashira反应将N-炔丙基吗啉偶联到其上。用铁和乙酸还原硝基以产生相应的胺，其用4-溴巴豆酰氯酰化，并如US6297258中所述用哌嗪置换溴以完成化合物L的制备。实施例13.　化合物M的合成如实施例12中所述合成关键的联芳基化溴苯胺，然后利用Sonagashira反应将4-甲基-1-(3-甲基丁-3-炔基)哌嗪偶联到其上。用铁和乙酸还原硝基以产生相应的胺，其使用经典的肽偶联条件用4-(甲氧基乙氧基)巴豆酸（由4-溴巴豆酸和甲氧基乙醇酸钠（sodiummethoxyetholate）制成）酰化以完成化合物M的合成。方案18.2-(3-丁-2-烯酰胺基-4-氟烷基/炔基苯胺基)-4-杂芳基嘧啶N-P的合成。实施例14.　化合物N的合成如实施例10中所述制备2-(4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(1-(叔丁氧基羰基)吲哚-3-基)嘧啶。市售3,3,3-三氟丙炔然后利用Sonagashira反应经溴化物偶联形成三氟丙炔化（trifluoroptpopynated）苯胺。然后使用铁和乙酸或本领域技术人员熟悉的其它还原剂将硝基还原成相应的胺，其用4-溴巴豆酰氯酰化并如US6297258中所述用哌嗪置换溴以完成化合物N的制备。实施例15.　化合物O的合成实施例14的倒数第二种化合物如US6297258中所述用N,N,N'-三甲基乙二胺处理以完成化合物O的制备。实施例16.　化合物P的合成如实施例10中所述制备2-(4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(吲哚-3-基)嘧啶并用NaH/甲基碘将吲哚氮甲基化。该溴化物然后使用经典Heck羰基化条件羰基化，并使用DAST将该醛转化成二氟甲基。用铁和乙酸或雷尼镍将硝基还原成相应的胺，并通过如US6297258中所述用4-溴巴豆酰氯酰化和用双(2-羟乙基)胺置换溴化物而完成化合物P的合成。方案19.2-(3-(2-(氟/三氟甲基)丁-2-烯酰胺基)苯胺基)-4-杂芳基嘧啶Q-T的合成。实施例17.　化合物Q的合成用二甲胺处理2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后将硝基还原成相应的胺，并用E,4-溴-2-氟-3-甲基丁烯酰氯（酸制备,EurJChem2603(1998)，并通过草酰氯或本领域技术人员已知的其它方法转化成酰基氯）使用US6297258中所述的条件酰化。然后用吡咯烷置换该烯丙基溴以产生化合物Q。实施例18.　化合物R的合成用二甲胺处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后将硝基还原成相应的胺，并使用US6297258中所述的条件用实施例17中所述的E,4-溴-2-氟-3-甲基丁烯酰氯酰化。然后用3-甲氧基吡咯烷置换该烯丙基溴以产生化合物R。实施例19.　化合物S的合成在US6297258中所述的条件下用2-氟-3-甲基丁-2-烯酰氯（相应酸的处理（synthesis122(1975)），使用草酰氯）将3-(2-(5-氨基-4-(N-甲基-N-(2,N,N-二甲基氨基乙基)-2-甲氧基-苯胺基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448）酰化产生化合物S。实施例20.　化合物T的合成用3-二甲基氨基吡咯烷处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶嘧啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后将硝基还原成相应的胺，并用2-氟-3-甲基丁-2-烯酰氯酰化（参见实施例19）以产生化合物T。方案20.2-(3-(2-(氟/三氟甲基)丁-2-烯酰胺基)苯胺基)-4-杂芳基嘧啶U-X的合成。实施例21.　化合物U的合成如实施例17中所述将2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶（WO2013/014448）转化成相应的二甲基氨基苯胺。这随后在偶联剂，如EDAC/HOBT、或HATU、或pyBOP存在下与Z-2-(二乙基氨基-2-氟-4-甲基戊-2-烯酸缩合以产生化合物U。Z-2-(二乙基氨基-2-氟-4-甲基戊-2-烯酸由2-溴异丁醛在三个步骤中制备——在醚中用二乙胺置换（DaltonTrans5945(2008)），接着与2-氟磷酰基乙酸酯（2-fluorophosphoinoacetate）发生Horner-Wadsworth-Emmons反应（Synthesis427(2002)）和皂化。实施例22.　化合物V的合成使2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶（WO2013/014448）与N-甲基哌嗪反应，然后还原硝基以产生游离3-氨基。这随后与已知的Z-α-氟肉桂酸和肽偶联剂缩合产生化合物V。实施例23.　化合物W的合成用N-甲基哌嗪处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后将硝基还原成相应的胺，并用Z-2-氟-3-(1-甲基哌啶-3-基)丙烯酸（如TetLetters32,339(1991)中所述由已知的1-甲基哌啶-3-甲醛和2,2-二氯-3,3,3-三氟丙酸甲酯在两个步骤中制备，接着皂化）酰化以产生化合物W。实施例24.　化合物X的合成用N-甲基哌嗪处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后将硝基还原成相应的胺，并如实施例23中所述用Z-2-氟-3-(1-甲基哌啶-3-基)丙烯酸酰化以产生化合物X。方案21.2-(3-(3(-氟/(二/三)氟甲基)丁-2-烯酰胺基)苯胺基)-4-杂芳基嘧啶Y-AC的合成。实施例25.　化合物Y的合成2-氯-4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)嘧啶（WO2010/097335）如WO2013/014448中所述与4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺反应。然后用M-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)胺置换氟，用铁和乙酸将硝基还原成相应的胺。这随后与3-氟-2-甲基巴豆酰氯缩合产生化合物Y。实施例26.　化合物Z的合成2-氯-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶如WO2013/014448中所述与4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺反应。然后用M-甲基-N-(2-二甲基氨基乙基)胺置换氟，用铁和乙酸将硝基还原成相应的胺。这随后与3-二氟甲基巴豆酰氯反应产生化合物Z。实施例27.　化合物AA的合成用N-甲基哌嗪处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后在乙酸中用铁将硝基还原成相应的胺，并用3-三氟甲基巴豆酰氯酰化以产生化合物AA。实施例28.　化合物AB的合成3-(2-(5-氨基-4-(4-甲基哌嗪子基)-2-甲氧基-5-苯胺基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶（其是实施例4中的中间体）用2,3-二甲基-4,4-二氟巴豆酸和肽偶联剂，如PyBOP酰化以产生化合物AB。实施例29.　化合物AC的合成用4-溴-2-甲基-3-三氟甲基巴豆酸和偶联剂，如PyBOP处理2-(5-氨基-4-二甲基氨基-2-甲氧基-苯胺基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶（实施例21中的中间体），然后如US6297258中所述用二甲胺置换溴以产生化合物AC。方案22.2-(3-(4,4-二氟链-2-烯酰胺基)苯胺基)-4-杂芳基嘧啶AD-AG的合成。实施例30.　化合物AD的合成乙醛如JOrgChem45,28(1980)和JFluorineChem36,293(1987)中所述在4个步骤中转化成4,4-二氟戊-2-炔酸。在HI的立体定向加成后进行如NewJChem27,432(2003)和Synthesis543(2002)中所述的Pd催化的甲基化，其用甲基溴化锌替代碘化物。该酸现在可以利用肽偶联试剂如PyBOP与前述三芳胺缩合以产生化合物AD。实施例31.　化合物AE的合成在DMF中平稳地用N-甲基-3-羟基氮杂环丁烷钠盐置换溴乙醛缩醛的溴。在该缩醛水解后，使该醛在低温下与甲基丙炔酸锂反应，用催化性过钌酸盐将所得仲醇氧化成相应的酮。DAST将该酮转化成偕二甲基化合物，在皂化后跨三键加成HI并如实施例30中所述用甲基溴化锌替代。该酸随后与三芳胺缩合，其与实施例30中的区别仅在于氟化物置换步骤用吗啉进行，以产生化合物AE。实施例32.　化合物AF的合成使衍生自氯甲基甲基醚的格氏试剂与草酸二乙酯在低温下反应产生相应的α-酮酯。这随后用DAST转化成相应的2,2-二氟酯，并在低温下用DIBAL还原成相应的醛。用Horner-Wadsworth-Emmons反应将该醛转化成相应的不饱和酯，这种酯通过与2-甲基丙二酸钠的交换反应在2-位上“甲基化”（JOrgChem63,7525(1998)）。用BCl3除去甲基醚并通过皂化除去该酯。所得羧酸利用PyBOP或类似试剂与如上所述的适当的三芳胺偶联以产生化合物AF。实施例33.　化合物AG的合成使用与实施例30中所述相同的化学过程将2-甲基丙醛转化成相应的4,4-二氟-3-甲基链烯酸。其随后利用PyBOp与适当的三芳胺中间体缩合，或其同样可以用草酰氯转化成相应的酰基氯以实施偶联，这产生化合物AG。方案23.2-(3-(炔-2-酰胺基)苯胺基)-4-杂芳基嘧啶AH-AK的合成。实施例34.　化合物AH的合成在各种条件（通常铜催化）下用胺处理3-氯-3-甲基丁炔导致氯被胺置换，在这种情况中，双(甲氧基乙基)胺的使用产生所需的氨基乙炔。如文献（US6297258、JMedChem49，1475(2006)）中所述经由格氏（或锂）乙炔化物形成和CO2将这种化合物羧化以产生4-(N,N-双(甲氧基乙基)氨基)-4-甲基戊-2-炔酸。这随后在缩合剂如PyBOP存在下与三芳胺（由3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448）通过在碱性条件下用甲氧基乙醇置换氟和随后将硝基还原成胺而制成）偶联以产生最终产物化合物AH。实施例35.　化合物AI的合成由3-乙酰氧基-3-甲基丁炔和N-甲基哌嗪在两个步骤中制备4-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)戊-2-烯酸，这涉及铜催化的胺置换，然后炔属格氏试剂的羧化。其然后在脱水剂如PyBOP存在下与三芳胺（由2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)嘧啶（其是实施例25中的中间体）通过用2-甲基氨基乙醇处理、接着用Fe/AcOH或其它方法如催化氢化将硝基还原成胺而制成）偶联以产生化合物AI。实施例36.　化合物AJ的合成用吡咯烷处理3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)嘧啶-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448），以置换氟原子。然后在乙酸中用铁将硝基还原成相应的胺，并在缩合剂，如EDAC/OBT、PyBOP或HATU存在下用4-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)戊-2-烯酸（实施例35）酰化以产生化合物AJ。实施例37.　化合物AK的合成用三甲基乙炔锂处理N-Boc哌啶-4-酮产生叔炔丙基醇，其用KF水溶液后处理，然后在DMAP存在下用乙酸酐乙酰化。该乙酸盐然后在铜(I)催化剂存在下用甲胺置换，新引入的炔丙胺在DMAP存在下用Boc酐保护。用MeMgBr实现炔属格氏试剂的形成，如文献（US6297258、JMedChem49,1475(2006)）中所述用CO2羧化产生3-(1-叔丁氧基羰基-4-(N-甲基-N-叔丁氧基羰基氨基)哌啶-4-基)丙炔酸。2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺基)-4-吲哚-3-基)嘧啶（WO2013/014448）用Boc酐N-保护，然后用氮杂环丁烷置换氟，用Fe/AcOH将硝基还原成胺。然后用上述N,N’-二Boc丙炔酸衍生物和肽偶联剂如PyBOP将三芳胺酰化以产生化合物AK。方案24.2-(5-(链-2-烯酰胺基)吡啶-3-基氨基)-4-杂芳基嘧啶AL-AN的合成。实施例38.　化合物AL的合成如方案15中所述制备5-溴-2,6-二氟-3-硝基吡啶。用N,N,N’-三甲基乙二胺和环丙醇钠相继置换2-氟和6-氟，并在使用如EurJOrgChem1854(2010)中所述的水溶性CuII-salen络合物的氨水体系中用氨置换溴以产生5-氨基-6-环丙氧基-2-(N-甲基(2-二甲基氨基乙基氨基)-3-硝基吡啶。这在普通酸催化条件下与2-氯-4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶（WO2013/014448）偶联，尽管可以更便利地在偶极非质子溶剂如DMF中在碱性条件下实施这种置换。然后用Fe/AcOH还原硝基，所得氨基用戊-2-烯酰氯酰化以产生化合物AL。实施例39.　化合物AM的合成如方案15中所述制备5-溴-2,6-二氟-3-硝基吡啶。用甲醇在温和碱性条件下和用2-甲氧基乙醇钠在更强碱性条件下相继置换2-氟和6-氟。用Fe/AcOH还原硝基以产生3-氨基-5-溴-2-甲氧基-6-(甲氧基乙氧基)吡啶，其在碱性条件下与2-氯-4-(吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)嘧啶（WO2013/014448）偶联。然后使用实施例38中所述的系统用氨置换溴，所得胺随后用4-(甲氧基乙氧基)巴豆酸（其制备描述在实施例13中）和合适的偶联剂如PyBOP酰化以产生化合物AM。实施例40.　化合物AN的合成如方案15中所述制备5-溴-2,6-二氟-3-硝基吡啶。4-Boc氨基氧杂环丁烷的钠盐在低温下和用氮杂环丁烷在室温或更高的温度下相继置换2-氟和6-氟。然后用连二亚硫酸钠或硼化镍还原硝基（TetLetters34,3083(1993)）以产生3-氨基-6-氮杂环丁烷-1-基-5-溴-2-(N-Boc-氧杂环丁烷-3-基氨基)吡啶。这在碱性条件下与3-(2-氯嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶（WO2013/014448）偶联，然后用如实施例38中所述的氨水将溴胺化，所得胺用4-溴巴豆酰氯酰化，并通过如US6297258中所述用吡咯烷置换完成该合成以产生化合物AN。实施例41.　N-[5-[[5-氯-4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备路线和步骤。实验步骤：化合物2的制备：在一500mL三口瓶中加入18.47g(150.00mmol)2-甲氧基苯胺和120mL乙腈，搅拌溶解。在0℃下，慢慢向其分批加入26.70gNBS(150.00mmol)并在此温度下搅拌。1小时后，反应结束。向此反应体系中加入100mL饱和Na2S2O3水溶液，并用乙酸乙酯萃取(300mL*3)。合并有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(PE/EA=10/1)分离纯化得4-溴-2-甲氧基苯胺21.20g（104.92mmol），收率69.95%。化合物3的制备：在0-5℃下，向80mL质量分数为85%的硫酸溶液中加入10.10g(50.00mmol）4-溴-2-甲氧基苯胺并搅拌溶解。在此温度下，向其分批加入6.10g(50.00mmol)硝酸胍。加毕，控制温度0-5℃并搅拌１小时。然后，将反应体系慢慢倒入200mL50%NaOH溶液中，有固体析出。将沉淀物过滤，洗涤，干燥，经柱层析（PE/EA=10/1,6/1）分离纯化得7.10g（28.70mmol）4-溴-5-硝基2-甲氧基苯胺，收率57.48%。化合物5的制备:在120mL仲丁醇中，加入3.31g(12.55mmol)化合物4，3.24g(18.82mmol)对甲苯磺酸和3.10g(12.55mmol)4-溴-5-硝基2-甲氧基苯胺。此混合物在100℃下搅拌反应20小时，TLC检测，反应完毕。冷却至室温，浓缩得黑色固体，其先后经乙腈和甲基叔丁基醚洗涤得固体2.85g(6.00mmol)化合物5粗品，收率47.84%。化合物6的制备:在80mL乙醇和20mL水的混合溶剂中，加入2.80g(5.90mmol)化合物5，2.00g(35.80mmol)Fe粉和2.00gNH4Cl(37.40mmol)。在N2保护下，该混合物在60℃搅拌反应6小时，TLC检测，反应完毕。趁热将反应液过滤，滤液浓缩得黄色固体，该固体粗品经柱层析(PE/EA=5/1)分离纯化得1.10g(2.48mmol)化合物6，收率42.03%。化合物8的制备:在30mL无水THF中，加入1.10g(2.48mmol)化合物6和383.61mg(2.97mmol)DIEA，搅拌溶解。在0℃下，慢慢向其滴加268.65mg(2.97mmol)丙烯酰氯，滴毕，在此温度下搅拌0.5小时后TLC检测，反应结束。向该体系中加入5mL冰水，搅拌20分钟。水相用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶。粗产品经反相制备色谱制备分离得0.48g(0.96mmol)黄色固体化合物8，收率38.87%。化合物N-[5-[[5-氯-4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备:在装有8mL三乙胺和6mLDMF的混合溶液中，加入400.00mg(861.49μmol)化合物8，120.94mg(172.30μmol)Pd(PPh3)2Cl2，199.10mg(172.30μmol)Pd(PPh3)4和16.41mg(86.15μmol)CuI，搅拌溶解。在N2保护下，向其加入1.62g(14.57mmol)化合物9。该体系在无水无氧条件下加热到110°C微波反应2小时。TLC检测反应结束。冷却至25℃，向体系中加入15mLH2O，水相用乙酸乙酯(15mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶得黑色油状物。粗产品经反相制备色谱制备分离得45.00mg(85.07μmol)白色固体化合物N-[5-[[5-氯-4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基l]丙烯酰胺，收率9.87%。色谱分析目标化合物含量98.05%，ESI-MS（m/z）：528(M+H)+。实施例42.　N-[5-[[4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备路线和步骤。化合物3的制备:在100mL仲丁醇中，加入2.30g(10.00mmol)化合物2，2.58g(15.00mmol)对甲苯磺酸和2.47g(10.00mmol)4-溴-5-硝基2-甲氧基苯胺。将混合物在100℃下反应20小时，TLC检测，反应毕。冷却至室温，浓缩得黑色固体，其先后经乙腈和甲基叔丁基醚洗涤得2.55g(5.79mmol)化合物3粗品，收率57.95%。化合物4的制备:在80mL乙醇中，加入2.00g(4.54mmol)化合物3，2.03gFe(36.34mmol)和2.00gNH4Cl(37.40mmol)。N2保护下，混合物于60℃时反应6小时，TLC检测，反应毕。反应液过滤，浓缩得黄色固体，该固体粗品柱层析(PE/EA=5/1)分离纯化得1.25g(3.05mmol)化合物4，收率67.18%。化合物5的制备:在40mL无水THF中，加入1.22g(2.97mmol)化合物4和422.23mg(3.27mmol)DIEA，搅拌溶解。在0℃下，慢慢向其滴加295.70mg(3.27mmol)丙烯酰氯，滴毕，在此温度下搅拌。0.5小时后TLC检测，反应结束。向体系中加入5mL冰水，搅拌20分钟。水相用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶。粗产品经反向色谱制备分离得0.65g(1.4mmol)黄色固体化合物5，收率47.14%。化合物N-[5-[[4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备:在盛有15mL三乙基胺和10mLDMF的混合不溶液中，加入600.00mg(1.29mmol)化合物5，72.56mg(103.38μmol)Pd(PPh3)2Cl2，119.46mg(103.38μmol)Pd(PPh3)4和12.30mg(84.62μmol)CuI，搅拌溶解。在N2保护下，向其加入2.43g(21.85mmol)化合物6。体系在无水无氧条件下，90℃时微波反应3小时，TLC检测反应结束。冷却至25℃，向体系中加入30mLH2O，水相用乙酸乙酯(30mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶得黑色油状物。粗产品经反向色谱制备分离得50.00mg(101.10μmol)白色固体化合物N-[5-[[4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺,收率7.84%。色谱分析目标化合物含量93.58%，ESI-MS（m/z）：495(M+H)+。实施例43.　N-[5-[[4-(1-甲基-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备路线和步骤。化合物3的制备:在80mL仲丁醇中，加入2.44g(10.04mmol)化合物2，2.60g(15.06mmol)对甲苯磺酸和2.48g(10.04mmol)4-溴-5-硝基2-甲氧基苯胺。将混合物在90℃下反应20小时，TLC检测，反应毕。冷却至室温，浓缩得黑色固体，其先后经乙腈和甲基叔丁基醚洗涤得2.58g(5.68mmol)化合物3粗品，收率56.56%。化合物4的制备:在80mL乙醇中，加入2.20g(4.84mmol)化合物3，2.17gFe(38.72mmol)和2.07gNH4Cl(38.74mmol)。N2保护下，混合物于60℃时反应6小时，TLC检测，反应毕。反应液过滤，浓缩得黄色固体，该固体粗品柱层析(PE/EA=3/1)分离纯化得1.40g(3.30mmol)化合物4，收率68.17%。化合物5的制备:在40mL无水THF中，加入1.40g(3.30mmol)化合物4和469.09mg(3.36mmol)DIEA，搅拌溶解。在0℃下，慢慢向其滴加328.52mg(3.36mmol)丙烯酰氯，滴毕，在此温度下搅拌。0.5小时后TLC检测，反应结束。向体系中加入5mL冰水，搅拌20分钟。水相用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶。粗产品经反向色谱制备分离得640.50mg(1.34mmol)黄色固体化合物5，收率40.60%。化合物N-[5-[[4-(1-甲基-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺的制备:在盛有15mL三乙胺和10mLDMF的混合不溶液中，加入600.00mg(1.25mmol)化合物5，70.44mg(100.34μmol)Pd(PPh3)2Cl2，115.96mg(100.34μmol)Pd(PPh3)4和11.94mg(62.72μmol)CuI，搅拌溶解。在N2保护下，向其加入2.43g(21.85mmol)化合物6。体系在无水无氧条件下，90℃时微波反应3小时，TLC检测反应结束。冷却至25℃，向体系中加入30mLH2O，水相用乙酸乙酯(30mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶得黑色油状物。粗产品经反向色谱制备分离得30.00mg(58.99μmol)白色固体化合物N-[5-[[4-(1-甲基-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺,收率4.72%。色谱分析目标化合物含量96.12%，ESI-MS（m/z）：509(M+H)+。实施例44.　N-[2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔基]-4-甲氧基-5-[(4-吡唑[1,5-a]-3-吡啶-2-嘧啶)氨基]苯基]丙烯酰胺的制备路线和步骤。化合物3的制备:在100mL仲丁醇中，加入2.31g(10.00mmol)化合物2，2.58g(15.00mmol)对甲苯磺酸和2.47g(10.00mmol)4-溴-5-硝基2-甲氧基苯胺。将混合物在100℃下反应20小时，TLC检测，反应毕。冷却至室温，浓缩得黑色固体，其先后经乙腈和甲基叔丁基醚洗涤得2.20g(4.99mmol)化合物3粗品，收率49.86%。化合物4的制备:在50mL丙酮和2mLH2O的混合溶液中，加入2.08g(4.71mmol)化合物3，4.31gZn(65.99mmol)和2.02gNH4Cl(37.71mmol)。25℃下，搅拌1小时，TLC检测，反应毕。反应液过滤，浓缩得固体粗品，该固体粗品柱层析(PE/EA=３/1)分离纯化得1.41g(3.43mmol)化合物4，收率72.78%。化合物5的制备:在40mL无水THF中，加入1.00g(2.43mmol)化合物4和314.06mg(2.43mmol)DIEA，搅拌溶解。在0℃下，慢慢向其滴加241.93mg(2.67mmol)丙烯酰氯，滴毕，在此温度下搅拌。0.5小时后TLC检测，反应结束。向体系中加入5mL冰水，搅拌20分钟。水相用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶。粗产品经反向色谱制备分离得0.68g(1.37mmol)黄色固体化合物5，收率56.46%。化合物N-[2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔基]-4-甲氧基-5-[(4-吡唑[1,5-a]-3-吡啶-2-嘧啶)氨基]苯基]丙烯酰胺的制备:在盛有15mL三乙胺和10mLDMF的混合不溶液中，加入620.00mg(1.33mmol)化合物5，4.83mg(6.88μmol)Pd(PPh3)2Cl2，7.95mg(6.88μmol)Pd(PPh3)4和0.82mg(4.30μmol)CuI，搅拌溶解。在N2保护下，向其加入2.51g(22.61mmol)化合物6。体系在无水无氧条件下，90℃时微波反应3小时，TLC检测反应结束。冷却至25℃，向体系中加入30mLH2O，水相用乙酸乙酯(30mL*3)萃取。合并有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压脱溶得黑色油状物。粗产品经反向色谱制备分离得45.00mg(90.80μmol)化合物N-[2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔基]-4-甲氧基-5-[(4-吡唑[1,5-a]-3-吡啶-2-嘧啶基)氨基]苯基]丙烯酰胺,收率6.83%。色谱分析目标化合物含量91.17%，ESI-MS（m/z）：496(M+H)+。激酶抑制测定利用本领域普通技术人员公知的市售检测试剂盒和服务测定式(I)的化合物的激酶抑制。这些试剂盒和服务用于测定各种激酶，包括但不限于ALK、ABL、AXL、AurB&C、BLK、erbB-2、erbB-4.EGFR、突变EGFR、HPK、IRAK1、RON、ROS1、SLK、STK10、TIE2、TRK、c-Met、Lck、Lyn、Src、Fyn、Syk、Zap-70、Itk、Tec、Btk、EGFR、ErbB2、Kdr、Flt-1、Flt-3、Tek、c-Met、InsR和Atk的抑制。这些检测试剂盒和服务的商业供应商包括PromegaCorporation和ReactionBiologyCorporation,EMDMillipore和CEREP。除市售检测试剂盒和服务外，通过下述测定法测定式(I-III)的化合物的激酶抑制活性。表皮生长因子受体酪氨酸激酶的提纯通过下列方法从过表达EGF受体的A431人表皮样癌细胞中分离人EGF受体酪氨酸激酶。细胞在滚瓶中在含有10%胎牛血清的50%Delbuco’sModifiedEagle和50%HAMF-12营养培养基(Gibco)中生长。大约109个细胞在含有20mM2-(4N-[2-羟乙基]哌嗪-1-基)乙磺酸(hepes),pH7.4、5mM乙二醇双(2-氨基乙基醚)N,N,N',N'-四乙酸、1%TritonX-lOO、10%甘油、0.1mM原钒酸钠、5mM氟化钠、4mM焦磷酸盐、4mM苯甲酰胺、1mM二硫苏糖醇、80μg/mL抑肽酶、40μg/mL亮抑酶肽和1mM苯基甲基磺酰氟的2体积缓冲液中裂解。在25,000xg下离心10分钟后，上清液在40℃下用10毫升之前用50mMHepes、10%甘油、0.1%TritonX-100和150mMNaCI,pH7.5（平衡缓冲液）平衡的麦胚凝集素琼脂糖平衡2小时。用平衡缓冲液中的1MNaCl从树脂中洗掉污染的蛋白质，并用平衡缓冲液中的0.5MN-乙酰基-1-D-葡糖胺，接着1mM脲洗脱酶。该酶用0.1mg/mlEGF洗脱。如通过考马斯蓝染色的聚丙烯酰胺电泳凝胶评估，受体看起来均匀。CaliperMobilityShiftKinaseAssay方法的检测步骤：测定1.确定测试化合物抗单突变EGFR(EGFR_d746-750)的IC50值将测试化合物用100%二甲亚砜（DMSO）配制成500μM，然后用100%DMSO逐孔进行4倍的浓度梯度稀释，稀释10个梯度。“阴性”和“阳性”对照孔用100μL的100%DMSO代替。其中，“阴性”对照孔为无化合物组，“阳性”对照孔为无激酶组。随后，96孔板中加入10μL化合物和90μL1×激酶缓冲液。将5μL上述含10%DMSO的化合物加入384孔板，然后将10μL2.5×激酶溶液（含12.5nMEGFR_d746-750，5mMDTT，1×激酶缓冲液）加入384孔板中。室温孵育10分钟后，加入10μL2.5×的底物溶液（含7.5μM多肽底物，35μMATP，25mMMgCl2，12.5mMMnCl2,1×激酶缓冲液）起始反应。28C孵育1小时后加入25μL终止液终止反应。振荡，离心后至EZReaderII进行读板，最后根据转化率值及“阴性”和“阳性”对照孔的读数计算出化合物各浓度下的抑制率，结合化合物浓度作图计算IC50值。测定2.确定测试化合物抗双重突变EGFR(EGFR_T790M/L858R)的IC50值将测试化合物用100%二甲亚砜（DMSO）配制成500μM，然后用100%DMSO逐孔进行4倍的浓度梯度稀释，稀释10个梯度。“阴性”和“阳性”对照孔用100μL的100%DMSO代替。其中，“阴性”对照孔为无化合物组，“阳性”对照孔为无激酶组。随后，96孔板中加入10μL化合物和90μL1×激酶缓冲液。将5μL上述含10%DMSO的化合物加入384孔板，然后将10μL2.5×激酶溶液（含25nMEGFR_T790M/L858R，5mMDTT，1×激酶缓冲液）加入384孔板中。室温孵育10分钟后，加入10μL2.5×的底物溶液（含7.5μM多肽底物，47.5μMATP，25mMMgCl2，1×激酶缓冲液）起始反应。28C孵育1小时后加入25μL终止液终止反应。振荡，离心后至EZReaderII进行读板，最后根据转化率值及“阴性”和“阳性”对照孔的读数计算出化合物各浓度下的抑制率，结合化合物浓度作图计算IC50值。测定3.确定测试化合物抗野生型EGFR的IC50值将测试化合物用100%二甲亚砜（DMSO）配制成500μM，然后用100%DMSO逐孔进行4倍的浓度梯度稀释，稀释10个梯度。“阴性”和“阳性”对照孔用100μL的100%DMSO代替。其中，“阴性”对照孔为无化合物组，“阳性”对照孔为无激酶组。随后，96孔板中加入10μL化合物和90μL1×激酶缓冲液。将5μL上述含10%DMSO的化合物加入384孔板，然后将10μL2.5×激酶溶液（含20nMEGFR，5mMDTT，1×激酶缓冲液）加入384孔板中。室温孵育10分钟后，加入10μL2.5×的底物溶液（含7.5μM多肽底物，5.75μMATP，25mMMgCl2，25mMMnCl2，1×激酶缓冲液）起始反应。28C孵育1小时后加入25μL终止液终止反应。振荡，离心后至EZReaderII进行读板，最后根据转化率值及“阴性”和“阳性”对照孔的读数计算出化合物各浓度下的抑制率，结合化合物浓度作图计算IC50值。部分化合物在测定1-3中的测试结果列在下表1中。表1No结构测定1(单突变体)(nM)测定2(双重突变体)(nM)测定3(野生型)(nM)实施例41N-[5-[[5-氯-4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺2.62.75.4实施例42N-[5-[[4-(1H-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺9.99.022.5实施例43N-[5-[[4-(1-甲基-3-吲哚)-2-嘧啶基]氨基]-2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔]-4-甲氧基苯基]丙烯酰胺5112.6750.5实施例44N-[2-[3-(二乙胺基)丙-1-炔基]-4-甲氧基-5-[(4-吡唑[1,5-a]-3-吡啶-2-嘧啶)氨基]苯基]丙烯酰胺29.27.1237其它激酶抑制测定根据本领域普通技术人员已知的程序进行测定式(I-III)的化合物对其它激酶的抑制的测定法。这些测定法包括，但不限于，涉及下列激酶的抑制的测定法：●野生型c-Met激酶.如国际公开No.WO2011/069761中所述测定野生型c-Met激酶的抑制，其整个内容经此引用并入本文。●LCK和BLK激酶.如美国专利No.7,125,875中所述测定LCK和BLK激酶的抑制，其整个内容经此引用并入本文。本文所述的化合物以下列方式筛选。适用于测定本文所述的化合物的激酶活性的下列程序的激酶包括，但不限于：Lck、Lyn、Src、Fyn、Syk、Zap-70、Itk、Tec、Btk、EGFR、突变EGFR、ErbB2、ErbB-4、Kdr、Flt-1、Flt-3、Tek、c-Met、InsR和Atk。激酶在大肠杆菌或杆状病毒-HighFive表达系统中表达为融合到谷胱甘肽S-转移酶（GST）上的激酶结构域或全长构建物或多组氨酸标记的融合蛋白。通过基本如前所述的亲和色谱法（Lehr等人,1996；Gish等人,1995）将它们提纯至接近均质。在一些情况中，激酶在测定活性之前与提纯或部分提纯的调节性多肽共表达或混合。基本通过既定程序（Braunwalder等人,1996）测定激酶活性和抑制。简言之，32PO4从ATP转移到附着在微滴定板的生物活性表面上的合成底物聚(Glu-Tyr)4:1或聚(Arg-Ser)3:1上充当评估酶活性的基础。在孵育期后，通过首先用0.5%磷酸洗涤该板、加入液体闪烁体、然后在液体闪烁探测器中计数，测定转移的磷酸的量。通过使合并到结合于板上的底物上的32P量降低50%的化合物浓度测定IC50。其它类似的方法也可用——由此将磷酸转移到在溶液中或固定的（即固相的）含有酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸或组氨酸（它们单独或结合，或与其它氨基酸结合）的肽或多肽底物中。例如，也可以使用闪烁迫近法（Wu等人,2000）、ELISA（Cleaveland等人,1990）、荧光偏振（Seethala和Menzel,1998）和均质时间分辨荧光法（HTRF,Kolb等人,1998）检测磷酸向肽或多肽的转移。或者，可利用抗体基方法测定激酶活性，由此使用抗体或多肽作为试剂检测磷酸化靶多肽。参考资料Braunwalder等人(1996).Anal.Biochem.234(1):23-26。Cleaveland等人(1990).AnalBiochem.190(2):249-53。Gish等人(1995).ProteinEng.8(6):609-614。Kolb等人(1998).DrugDiscov.Today.3:333-342。Lehr等人(1996).Gene169(2):27527-9。Seethala等人(1998).AnalBiochem.255(2):257-62。Wu等人(2000).CombChemHighThroughputScreen.3(1):27-36。ErbB细胞检测程序概要1.EGFRat-1DNA合成将大鼠成纤维细胞系（Rat-I）在完全培养基中铺在（platedout）平孔板中并使其附着整夜。然后使细胞在含有0.1%牛血清白蛋白（BSA）的培养基中饥饿整夜，用或不用化合物稀释液预培养1小时，然后用1ng/ml表皮生长因子（EGF）、50ng/ml血小板衍生生长因子（PDGF）、3ng/ml成纤维细胞生长因子（FGF）或10ng/ml胰岛素样生长因子-1（IGF-1）活化整夜。通过3H-胸苷并入DNA中的水平测定增殖。通过比较与对照物相比在化合物存在下发现的胸苷并入水平来测定IC50's。2.A431中的EGF-R自磷酸化将人表皮样癌细胞（A431；ATCC,Manassas,Va.）在完全培养基中铺在（platedout）平孔板中并使其附着整夜。然后使细胞在含有0.5%胎牛血清（FCS）的培养基中饥饿，用或不用化合物稀释液预培养，然后用50ng/mlEGF活化3分钟。将细胞裂解并通过SDS-PAGE分离蛋白质。通过使用抗-phospho-EGF-R-特异性抗体的免疫印迹法测定EGF-R上的磷酸酪氨酸水平。通过比较与对照物相比在化合物存在下发现的磷酸酪氨酸水平来测定IC50's。3.HRGβlT47DDNA合成将人乳腺肿瘤细胞系（T47D；ATCC,Manassas,Va.）在完全培养基中铺在（platedout）平孔板中并使其附着整夜。然后使细胞在含有0.1%牛血清白蛋白（BSA）的培养基中饥饿整夜，用或不用化合物稀释液预培养1小时，然后用150ng/mlHeregulin（HRGβl）活化整夜。通过3H-胸苷并入DNA中的水平测定增殖。通过比较与对照物相比在化合物存在下发现的胸苷并入水平来测定IC50's。4.T47D中的ErbB2自磷酸化将人乳腺肿瘤细胞（T47D；ATCC,Manassas,Va.）在完全培养基中铺在（platedout）平孔板中并使其附着整夜。然后使细胞在含有0.1%牛血清白蛋白（BSA）的培养基中饥饿，用或不用化合物稀释液预培养，然后用900ng/mlHRGβ1活化10分钟。将细胞裂解并通过SDS-PAGE分离蛋白质。通过使用抗-phospho-ErbB2-特异性抗体的免疫印迹法测定ErbB2上的磷酸酪氨酸水平。通过比较与对照物相比在化合物存在下发现的磷酸酪氨酸水平来测定IC50's。5.HRGβl3T3-Her2/3DNA合成小鼠成纤维细胞系（3T3）已用全长人ErbB-2和ErbB-3稳定转染（Carraway等人，JBiolChem(1995)270,7111-6））。将这种细胞系在完全培养基中铺在（platedout）平孔板中并使其附着整夜。然后使细胞在含有0.1%牛血清白蛋白（BSA）的培养基中饥饿整夜，用或不用化合物稀释液预培养1小时，然后用25ng/mlHeregulin（HRGβl）活化整夜。通过3H-胸苷并入DNA中的水平测定增殖。通过比较与对照物相比在化合物存在下发现的胸苷并入水平来测定IC50's。外显子l9删除EGFR（活化单突变体）细胞磷酸化测定人肺细胞系PC9（外显子19删除EGFR）获自AmericantypeCultureCollection。将PC9细胞保存在含有10%胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中。细胞在含5%CO2的加湿培养器中在37℃下培养。根据R&DSystemsDuoSetICHumanPhospho-EGFRELISA（R&DSystems目录号#DYCI095）中所述的程序进行用于测定内源性p-EGFR在细胞裂解液中的细胞磷酸化的测定法。在Corning黑色透明底384孔板中在培养基中接种40μL细胞（10000个细胞/孔）并在37℃，5%CO2下培养整夜。利用Echo555，借助声波向细胞给予在100%DMSO中连续稀释的化合物。板再培养2小时，然后在吸出培养基后，向各孔中加入40μLx裂解缓冲液。Greiner黑色高度结合384孔板被捕获抗体包被，然后用3%BSA封闭。在除去封闭液（block）后，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高度结合384孔板中并培养2小时。在抽吸和用PBS洗板后，加入20μL检测抗体并培养2小时。在抽吸和用PBS洗板后，加入20μLQuantaBlu荧光过氧化物酶底物（ThermoFisherScientific目录号15169）并培养1小时。将20μLQuantaBlu终止液添加到板中并在Envision读板仪上利用352纳米激发波长和460纳米发射波长读取荧光。用各化合物获得的数据输出到合适的软件包（如Origin）中以实施曲线拟合分析。由这种数据通过计算提供50%效果所需的化合物浓度而测定IC50值。L858R/T790MEGFR（双重突变体）细胞磷酸化测定人肺细胞系NCI-HI975获自AmericantypeCultureCollection。将NCI-HI975细胞保存在含有10%胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中。细胞在含5%CO2的加湿培养器中在37℃下培养。根据R&DSystemsDuoSetICHumanPhospho-EGFRELISA（R&DSystems目录号#DYCI095）中所述的程序进行用于测定内源性p-EGFR在细胞裂解液中的细胞磷酸化的测定法。在Corning黑色透明底384孔板中在培养基中接种40μL细胞（10000个细胞/孔）并在37℃，5%CO2下培养整夜。利用Echo555，借助声波向细胞给予在100%DMSO中连续稀释的化合物。板再培养2小时，在吸出培养基后，向各孔中加入40μL1x裂解缓冲液。Greiner黑色高度结合384孔板被捕获抗体包被，然后用3%BSA封闭。在除去封闭液（block）后，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高度结合384孔板中并培养2小时。在抽吸和用PBS洗板后，加入20μL检测抗体并培养2小时。在抽吸和用PBS洗板后，加入20μLQuantaBlu荧光过氧化物酶底物（ThermoFisherScientific目录号15169）并培养1小时。将20μLQuantaBlu终止液添加到板中并在Envision读板仪上利用352纳米激发波长和460纳米发射波长读取荧光。用各化合物获得的数据输出到合适的软件包（如Origin）中以实施曲线拟合分析。由这种数据通过计算提供50%效果所需的化合物浓度而测定IC50值。BaF3转染系BaF3是永生化鼠pro-B细胞系，其依赖IL-3生长和存活并且不表达ErbB家族成员。本领域普通技术人员用erbB蛋白（包括但不限于wtEGFR、wterbB-2、wterbB-4、L858R-EGFR、del746-750-EGFR和T790M-EGFR）的适当构造的cDNAs转染BaF3细胞（Blood97,1050(2001)），接着通过在不存在IL-3的情况下的独立生长或在适当erbB配体存在下（仍然不存在IL-3）的生长来选择转染的克隆，以便选择和分离用所需erbB家族成员转染的BaF3细胞系。这些细胞系可随后用于如文献中所述测定erbB家族的各成员的细胞IC50s。（CancerRes71,7587(2011)、CancerRes67,11924(2006)ProcNatnlAcadSciUSA103,7817(2006)）。各种其它激酶。如美国专利No.6,881,737中所述测定各种其它激酶的抑制，包括但不限于Lck、Lyn、Src、Fyn、Syk、Zap-70、Itk、Tec、Btk、EGFR、ErbB2、Kdr、Flt-1、Flt-3、Tek、c-Met、InsR和Atk，其整个内容经此引用并入本文。动物异种移植肿瘤模型一般程序。将来自已知带有相关致癌基因的ATCC细胞系或来自有意转染的适当转化的细胞悬浮在适当的培养基中，并将5x106或1x107个细胞注射到nu/nu小鼠的侧腹中。或者，可以用套管针放置体内传代肿瘤的片段（通常大约1立方厘米）以引发肿瘤。当肿瘤达到适合实验的尺寸（通常在100-300毫克范围内）时，将动物随机分成由6-10只小鼠构成的匹配组，并每天一次或两次通过口周强喂给予媒介物或试验制品。使用卡尺测定肿瘤体积。以(第n天的肿瘤体积-第0天的肿瘤体积/第0天的肿瘤体积)×100计算第n天的异种移植肿瘤的体积相对于第0天（开始给药受试化合物的那天）的增加百分比。以(1-药物治疗组中肿瘤体积的平均增加%/媒介物治疗组中肿瘤体积的平均增加%)×100计算各药物治疗组相对于媒介物治疗组的平均肿瘤生长抑制百分比。使用单尾t检验评定统计显著性。野生型EGFR异种移植测定.为了测定对过表达wtEGFR的肿瘤的效力，可以使用由A431表皮样瘤或LoVo结肠癌细胞培养的异种移植物。EGFRdel746-750异种移植模型.为了测定对过表达EGFR-del746-750的肿瘤的效力，可以使用由PC9NSCLC细胞培养的异种移植物。EGFRL858R异种移植模型.为了测定对过表达EGFR-L858R的肿瘤的效力，可以使用由H3255NSCLC细胞培养的异种移植物。EGFRL858R/T790M双重突变异种移植模型.为了测定对过表达EGFR-L858R/T790M双重突变体的肿瘤的效力，可以使用由H1975NSCLC细胞培养的异种移植物。erBB-2异种移植测定.为了测定对过表达wterbB-2的肿瘤的效力，可以使用由N87胃癌或BT474乳腺癌细胞培养的异种移植物。药效学测定.在口服给药后以适当时间间隔使带有任何上述肿瘤（优选200-300毫克大小）的小鼠安乐死。切除肿瘤，速冻并利用QiagenTissue-Lyser分散在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的非变性裂解缓冲液中。将该匀浆在4℃下裂解1小时，通过离心澄清，然后通过定量免疫印迹法分析phosphorEGFR/erbB-2/3/4和总受体。各RTK条带的phospho-RTK信号用其总RTK信号标准化。或者，可以利用适当的eERK和phosphor-ERK抗体通过类似技术测定肿瘤中的总ERK与phosphor-ERK的比率。当前第1页1 2 3