本发明主要涉及生物检测技术及医学检测领域。具体而言，本发明涉及用于检测肠道病毒71型IgM抗体的试剂盒及检测方法。
背景技术：
肠道病毒EV71型感染是由人肠道病毒71型(EV71)引起的疾病的总称，临床上主要表现为手足口病，手足口病多在婴幼儿中爆发流行，部分EV71感染患儿表现为疱疹性咽峡炎，重症患者出现病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、肺水肿、肺出血等。引起手足口病的病原，最常见的是柯萨奇病毒A16和肠道病毒71型；由肠道病毒71型感染引起的疾病发生重症感染的比例较大，病死率也较高，重症病例病死率可达10％-25％，因此病原学诊断意义重大。肠道病毒71型(EV71)基因组为含有大约7.5Kb的单股正链RNA，包括5'端非编码区、3'端非编码区和由Pl，P2，P3所组成的多蛋白，共编码11种蛋白，其中4个结构蛋白VPl,VP2,VP3,VP4,7个非结构蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D。其中VP1,VP2,VP3暴露于病毒外壳的表面，为EV71主要的抗原变异位置；VP4包埋在病毒外壳的内侧与内部的RNA结合，其功能类似病毒外壳的锚，用以稳定病毒蛋白的结构。非结构蛋白2A为分裂初期先驱蛋白质，也与终止宿主细胞合成其本身所需蛋白有关；3C则参与大部分的蛋白裂解反应；3D为RNA聚合酶，在病毒RNA复制时主导转录及复制反应；2B，2C，3A，3B等四种蛋白则与病毒RNA的复制有关。肠道病毒EV71的临床诊断主要依据三个方面:一是临床表现，二是血清学证据，三是病原学证据。由于肠道病毒EV71型感染临床表现多，因此肠道病毒EV71的血清学检测和病原学检测是目前最主要的依据。肠道病毒71型IgM抗体的检测已经有相关文献报道，基本上多采用胶体金法或酶联免疫法，在成本，特异性等方面尚有诸多不足之处。蛋白质芯片由于技术的先进性已经成为技术发展的趋势，但是市场上为未见以蛋白质芯片法为基础的肠道病毒71型IgM抗体检测试剂盒的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种准确性好，特异性高的用于检测肠道病毒71型IgM抗体的试剂盒及检测方法。本发明人提供了4条多肽。令人惊奇的是，本发明人发现，虽然所述4条多肽单独检测手足口病感染中的IgM抗体时的灵敏度均在19.7％～78.5％之间，远远未达到作为检测工具的要求，但是，在本发明以受试者来源的生物样本是否对所述4条多肽中的至少一条或一条以上有响应作为判定受试者是否已被疟原虫感染的指标的情况下，可以以高达93.0％的灵敏度(假阳性率低至1.9％)检测肠道病毒71型IgM抗体感染，进而用于手足口病的辅助诊断。因此，本发明包括：1.一种用于检测肠道病毒71型IgM抗体的试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的下述多肽集合1：SEQIDNO：1所示的多肽；SEQIDNO：2所示的多肽；SEQIDNO：3所示的多肽；和SEQIDNO：4所示的多肽。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其用于检测肠道病毒71型抗体IgM。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，全部多肽独立地连接于同一固体载体上。4.下述多肽集合1在制备用于检测肠道病毒71型抗体IgM的试剂盒中的用途：SEQIDNO：1所示的多肽；SEQIDNO：2所示的多肽；SEQIDNO：3所示的多肽；和SEQIDNO：4所示的多肽。5.一种检测受试者是否为肠道病毒71型感染患者的方法，该方法包括：使用权利要求1～3中任一项所述的试剂盒检测所述多肽集合1中的多肽对受试者来源的血液样本中的肠道病毒71型抗体IgM是否有响应；当检测到所述多肽集合1中的任一个或一个以上多肽对受试者来源的血液样本中的肠道病毒71型抗体IgM有响应时，判定该受试者为肠道病毒71型感染患者。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述血液样本为全血、血浆或血清。7根据权利要求5所述的方法，其中，所述受试者为具有手足口病临床症状的受试者。发明的具体实施方式多肽集合本说明书中，多肽集合1是指位于第一检测区的全部多肽，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：SEQIDNO：1所示的多肽序列为APTGQNTQVSSHRLDTGKVP；SEQIDNO：2所示的多肽序列为HPYVLDAGIPISQLTVCPHQ；SEQIDNO：3所示的序列为多肽DKFANPVKDIFTEMAAPLKS；和SEQIDNO：4所示的序列为多肽DPDHFDGYKQQVVTVMDDLC。所述多肽可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等公知方法来获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本技术领域公知的。此外，在通过酶反应生产本发明的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子WO2004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸(例如羧基保护的氨基酸)在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出：具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体处理物、或该微生物来源的肽合成酶。特别是多肽的化学合成已经实现了商业化，可以通过委托专业的多肽合成公司来合成所述多肽。试剂盒本发明提供一种检测试剂盒(本发明的试剂盒)，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的下述多肽集合1：SEQIDNO：1所示的多肽；SEQIDNO：2所示的多肽；SEQIDNO：3所示的多肽；和SEQIDNO：4所示的多肽。本说明书中，灵敏度是指：用“金标准”方法确认的阳性样本中，被其他方法测定为阳性样本的比例。假阳性率是指：用“金标准”方法确认的阴性样本中，被其他方法测定为阳性样本的比例。本技术领域检测人肠道病毒71型感染的“金标准”方法是核酸检测法、即PCR法。本说明书中，“检测”可以是确诊，也可以是为确诊提供参考信息。在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料(例如是可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料)的载体即可。构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶(聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纤维素、特氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈钢、铁氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白(白蛋白等)、碳或它们的组合等。固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的那样，薄膜或板等平坦的固体载体上可以设置凹坑、沟槽、滤膜底部等。磁珠可以具有约25nm～约1mm范围的球体直径。在优选的实施方式中，磁珠具有约50nm～约10μm范围的直...