背景技术：
抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有抗菌活性的小分子多肽，广泛存在于细菌、真菌、两栖类、昆虫、高等植物、哺乳动物乃至人类中。具有广谱的杀菌、抑菌活性，不仅作用于革兰氏阳性细菌，而且也作用于真菌、昆虫和某些病毒和肿瘤。
由于抗菌肽具有普通抗生素所不具有的一系列的优点如靶菌株不易产生抗性突变，因此成为现代学术和应用研究的一个热点；同时由于它在生物防御体制中起着十分重要的作用而成为新药的新的来源。
技术实现要素：
本发明涉及一种快速高效分离纯化发酵液中抗菌肽的方法，其制备工艺合理简单、回收率高、操作条件温和。本发明采用以下方案实现：
蜜蜂抗菌肽提取制备工艺，主要包括以下步骤：
1.发酵液除菌过滤后，使用超滤膜过滤发酵滤液，截留分子量在10000D以上的物质，除去滤液中分子量较大的可溶性杂质；
2.超滤后使用纳滤膜对超滤后的滤液进行浓缩，去除水、无机盐等杂质，减少滤液的体积，这里纳滤膜为分子最小于1000道尔顿的小分子物质可透过的过滤薄膜。
3.浓缩后的滤液过分子筛Sephacryl柱，收集活性峰样品浓缩。
4.浓缩液经喷雾干燥获得蜜蜂抗菌肽成品。
本发明通过在超滤膜过滤分子量较大的可溶性杂质，有效的减少了提取过程中杂质的量，提高了产品质量；通过纳滤膜进行浓缩，滤液用分子筛柱Sephacryl分离，喷雾干燥，节约了生产成本，提高了分离效率。
具体实施方式
本发明蜜蜂抗菌肽的分离提纯方法的步骤如下：
1、将除菌粗虑后的发酵液经Millipore公司的切向流超滤系统超滤浓缩，截留分子量在10000D以上的物质，除去滤液中分子量较大的可溶性杂质。
2、超滤后使用纳滤膜对超滤后的滤液进行浓缩，去除水、无机盐等杂质，减少滤液的体积，这里纳滤膜为分子最小于1000道尔顿的小分子物质可透过的过滤薄膜，滤液中的水透过纳滤膜，而蜜蜂抗菌肽无法透过纳滤膜，纳滤后滤液中水将减少80％以上，即可将滤液浓缩至5-6倍，从而减少后续步骤的分离成本。
3、浓缩后的样品过A缓冲液(20mmol/L pH6.8磷酸盐缓冲液)预平衡的分子筛Sephacryl S-200HR柱，然后以同样的缓冲液洗脱，收集活性峰样品浓缩。
4、浓缩液在进风温度120度，出风80度下，经喷雾干燥获得蜜蜂抗菌肽成品。