本发明涉及中草药有效成分提取纯化技术领域，尤其是一种有效去除白花蛇舌草多糖中蛋白的方法。
背景技术：
白花蛇舌草是一种传统的抗肿瘤中药,可广泛应用于治疗各种肿瘤。白花蛇舌草多糖是从茜草科耳草属植物白花蛇舌草中提取得到的一种生物大分子,它由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖等单糖组成,能显著抑制小鼠移植性S-180实体瘤的生长,而且与环磷酰胺合用,可以明显改善环磷酰胺所致的免疫器官萎缩和造血系统的损伤。但提取的白花蛇舌草多糖常含有杂质蛋白质，降低多糖纯度，从而影响其活性和应用效果。
目前经常采用的除蛋白的方法主要是Sevag法和三氯乙酸法。但这两种方法共同的缺点是都需要用到大量的有机溶剂，对环境污染，产生大量废液，后期处理复杂，且多糖损失率大。因此，探索一种绿色环保、高效、工艺简便的去蛋白的方法迫在眉睫。
木瓜蛋白酶，主要存在于番木瓜茎叶与果实中，未成熟果实的乳汁中含量最高。因其稳定性好，蛋白水解能力强，并且对多种蛋白质均具有较好的降解作用，目前已被广泛地应用于食品、化工、化妆品、医疗卫生等行业中，由于该酶是100％纯天然产物,适应现代社会生活追求自然化趋势，因此具有诱人的开发前景。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种绿色环保、高效、简捷、安全的去除白花蛇舌草多糖中的蛋白质方法。
本发明采取的技术方案是：
白花蛇舌草经水提后(工艺参数为：料液比：1:25，提取3次，时间分别为：1.5h、1.5h、1h)后合并三次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加占底物体 积8％～15％的酶液，充分混匀，调节pH5.2～7.2。保温45～65℃，酶解0.5～2.0h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达85％～95％，多糖损失率为6～10％。
而且添加的酶液占底物体积的10％，酶解pH6.0，酶解温度55℃，酶解1h，在此处理条件下，多糖中蛋白的去除率为90％，多糖损失率为7.9％。
本发明的优点和积极效果：
本发明采用食品级的木瓜蛋白酶作为酶解剂，且无任何有机溶剂和添加剂，因此整个去蛋白过程无污染，绿色环保。所获的白花蛇舌草多糖可直接作为医药或功能食品的原料，提高了产品纯度和价值。本工艺操作简便，生产成本低，特别适用于工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
实施例1
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加8％的酶液，充分混匀，调节pH至5.5。保温45℃，酶解1.5h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达86％，多糖损失率为6.8％。
实施例2
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加10％的酶液，充分混匀，调节pH至6.0。保温55℃，酶解1h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达90％，多糖损失率为7.4％。
实施例3
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加12％的酶液，充分混匀， 调节pH至7.0。保温55℃，酶解1h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达88％，多糖损失率为8.9％。
实施例4
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加15％的酶液，充分混匀，调节pH至6.5。保温60℃，酶解1.5h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达95％，多糖损失率为9.7％。
实施例5
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加10％的酶液，充分混匀，调节pH至7.0。保温60℃，酶解1h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达90％，多糖损失率为9.1％。
实施例6
10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分搅拌，水提3次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液经微滤膜组件分离得渗出液，再经超滤后，得浓缩液，添加13％的酶液，充分混匀，调节pH至6.5。保温55℃，酶解1.5h、沸水浴10min灭酶，4000rpm离心除去沉淀，上清液醇沉12h，获得的多糖提取液中蛋白去除率可达89％，多糖损失率为8.3％。