本发明属于生物化学药物制药技术领域，具体涉及一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺。
背景技术：
胰蛋白酶(trypsin，ec3.4.21.4)在胰脏中以作为酶的前体胰蛋白酶原的形式被合成，并作为胰液的成分而分泌，受肠激酶的酶解或胰蛋白酶的自身激活成为活性胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用，是特异性最强的蛋白酶，在蛋白质测序中是重要的工具酶。能水解蛋白质为多肽或氨基酸，对精氨酸和赖氨酸的肽链具有选择性的水解作用，为一肽链内切酶。胰蛋白酶能对脓及坏死组织起消化作用，从而使正常组织分泌血清去除异物，助长新生肉芽之生长。其应用范围广阔，包括：1、各种溃疡和发炎坏疽，创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿、脓肿等；2、支气管炎、支气管气喘、干咳等(能使分泌物稀薄便于咳出)；3、各种蛇咬伤等。
胰蛋白酶最早是从新鲜动物的胰脏制备获得的，具体为通过绞碎、配料、磨浆、消化、过滤、干燥、球磨等工艺制备成胰蛋白酶原粉，然后加填充剂稀释成不同酶活性的胰蛋白酶成品。虽然制备过程相对简单，但由此制备的胰蛋白酶活性相对较低，且难以控制，从而限制了胰蛋白酶的使用。
技术实现要素：
为克服现有技术所存在的缺陷，本发明提供一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺，能够解决上述技术问题。
本发明要解决其技术问题所采用的技术方案是：设计一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺，按照下述步骤依次进行：
步骤一：将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；
步骤二：将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；
步骤三：用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；
步骤四：平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；
步骤五：向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；
步骤六：将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节ph值；将溶液透析，去除杂质；
步骤七：取出透析液，抽滤，得滤液，调节ph值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。
作为本发明的进一步优化方案，步骤三中所述的磷酸盐缓冲液的浓度为1-5mmol/l。
作为本发明的进一步优化方案，步骤四中所述的海藻酸钠和氯化钙溶液的体积比为1:5-1:7。
作为本发明的进一步优化方案，步骤六中调节ph值为8-8.5。
本发明所具有的有益效果是：
本发明通过将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节ph值；将溶液透析，去除杂质；取出透析液，抽滤，得滤液，调节ph值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。能够提高胰蛋白酶的活性，提高工作效率。使得到的胰蛋白酶的活性达到4000u/mg以上。
具体实施方式
实施例一
一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺，按照下述步骤依次进行：
步骤一：将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；
步骤二：将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；
步骤三：用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；磷酸盐缓冲液的浓度为1mmol/l。
步骤四：平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；所述的海藻酸钠和氯化钙溶液的体积比为1:5。
步骤五：向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；
步骤六：将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节ph值为8；将溶液透析，去除杂质；
步骤七：取出透析液，抽滤，得滤液，调节ph值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。
实施例二
一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺，按照下述步骤依次进行：
步骤一：将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；
步骤二：将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；
步骤三：用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；磷酸盐缓冲液的浓度为3mmol/l。
步骤四：平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；所述的海藻酸钠和氯化钙溶液的体积比为1:6。
步骤五：向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；
步骤六：将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节ph值为8.3；将溶液透析，去除杂质；
步骤七：取出透析液，抽滤，得滤液，调节ph值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。
实施例三
一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺，按照下述步骤依次进行：
步骤一：将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；
步骤二：将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；
步骤三：用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；磷酸盐缓冲液的浓度为5mmol/l。
步骤四：平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；所述的海藻酸钠和氯化钙溶液的体积比为1:7。
步骤五：向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；
步骤六：将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节ph值为8.5；将溶液透析，去除杂质；
步骤七：取出透析液，抽滤，得滤液，调节ph值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品。
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。