本发明属于基因检测试剂盒领域，具体涉及一种用于检测先天性白内障相关基因的探针组及试剂盒。
背景技术：
先天性白内障是出生即存在或出生后才逐渐形成的先天遗传或发育障碍引起的晶状体混浊，是导致儿童盲和视力损害的首要疾病，约占儿童盲(最佳矫正视力低于0.05)及中重度视力损害(最佳矫正视力低于0.3，不低于0.05)儿童总数的50％，其有效防治一直是备受关注和亟待解决的国际性难题。
先天性白内障约30％患儿有较明显的家族遗传倾向，有三种遗传模式，包括常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传及X连锁遗传。其中，常染色体显性遗传是最常见的遗传形式。基于孤立家系的连锁研究及疾病遗传相关候选基因的测序，据报道至少已鉴定出先天性白内障相关的22个疾病位点和17个致病基因，先天性白内障致病基因的深入全面探索是其发病机制研究中最重要的突破点。
近年来随着二代测序技术的发展，已报道的先天性白内障患病基因与日俱增，至少已包括120个基因的250个突变位点，但目前市场上仍没有较为全面的先天性白内障相关基因区域捕获探针组合及试剂盒。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术中没有较为全面的先天性白内障相关基因检测探针组及试剂盒的不足，提供一种用于检测先天性白内障相关基因的探针组及试剂盒，利用其能全面、快速、准确的检测先天性白内障相关基因。
一种用于检测先天性白内障相关基因的探针组，包含能特异性识别人类先天性白内障相关基因外显子非重复区域的多个DNA序列；
所述的先天性白内障相关基因如下所示：
PEX10,PEX14,EPHA2,HSPG2,POMGNT1,FOXE3,RPE65,CRYZ,DNASE2B,ABCD3,COL11A1,GJA8,ADAMTSL4,GPR161,PROX1,RAB3GAP2,GNPAT,PXDN,PEX13,RAB3GAP1,LCT,FIGN,LRP2,AGPS,CRYGD,CRYGC,CRYGB,CRYGA,CYP27A1,CRYBA2,KCNJ13,FYCO1,COL7A1,LAMB2,FLNB,GPX1,PVRL3,CPOX,CASR,CNBP,BFSP2,SOX2,CRYGS,WFS1,HMX1,CC2D2A,SRD5A3,CLOCK,AFF1,ANK2,ETFDH,CTNND2,ERCC8,VCAN,EFNA5,TGFBI,SIL1,SPARC,TFAP2A,GCNT2,GCM2,NEU1,PEX6,LGSN,LCA5,GJA1,PEX7,IFNGR1,PEX3,EZR,FAM126A,GTF2IRD1,HIP1,NRCAM,AGK,FDFT1,BIN3,DOCK5,ESCO2,WRN,ADAM9,EYA1,CNGB3,NBN,RECQL4,VLDLR,CDKN2A,GALT,ALDH1A1,PTCH1,TDRD7,LMX1B,POMT1,VIM,ITGB1,ERCC6,ATOH7,PCBD1,PTEN,SLC16A12,ALDH18A1,PITX3,OAT,HRAS,USH1C,LGR4,PAX6,CAT,PEX16,DHCR7,BEST1,LRP5,MYO7A,FZD4,MMP1,ATM,CRYAB,APOA1,JAM3,PEX5,COL2A1,MIP,MVK,GJA3,GJB6,B3GALTL,SLC25A15,ITM2B,COL4A1,SEC23A,OTX2,SIX6,VSX2,TGFB3,POMT2,DICER1,BUB1B,SORD,FBN1,NR2E3,LOXL1,MIR184,POLG,GFER,TMEM114,NOD2,HSF4,ADAMTS18,MAF,YWHAE+,GUCY2D,CRYBA1,UNC45B,PEX12,WNT3,NOG,GALK1,PYCR1,EPG5,CTDP1,ADAMTS10,SMARCA4,MAN2B1,SIPA1L3,OPA3,SIX5,DMPK,FKRP,FTL,LIM2,TBC1D20,BFSP1,PHARC,CHMP4B,NCOA6,SALL4,GNAS,CRYAA,COL18A1,LSS,PEX26,CRYBB3,CRYBB2,CRYBB1,CRYBA4,NF2,LARGE,ARSE,HCCS,NHS,BCOR,NDP,RP2,PORCN,PQBP1,EBP,GLA,COL4A6,COL4A5,LAMP2,OCRL,ABCD1+,IKBKG,AKR1E2,CYP51A1,FOXC1,MFSD6L,MYH9,PEX1,PEX2,PEX19,PITX2,RAB18,RNLS,SOX2,TMEM70,TMEM114,CBS,ERCC2,ERCC3,FKTN,FOXD3,PEX5L,PEX11β,SLC2A1。
所述的探针组，其每个DNA序列长度为78bp。每个DNA序列所匹配的先天性白内障相关基因外显子非重复区域的区段分别如表1所示。
所述的用于检测先天性白内障相关基因的探针组在检测先天性白内障相关基因中的应用。
一种用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒，包括所述的用于检测先天性白内障相关基因的探针组。
所述的用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒在检测先天性白内障相关基因中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明的探针组及试剂盒可一次性对先天性白内障已发现的225个相关基因进行检测，提高了分子诊断的覆盖率及效率，特异性好，灵敏度高，对先天性白内障产前筛查、早期诊断、精准防治具有重要意义。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：用于检测先天性白内障相关基因的探针组
1、先天性白内障相关基因的筛选确定
以“congenital cataract”，“inherited cataract”，“pediatric cataract”，“infantile cataract”，“childhood cataract”等为检索词，在PubMed，Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)及National Center for Biotechnology Information(NCBI)相关子网站中搜索已报导的，通过家族连锁分析、人群关联分析、散发病例基因检测及动物实验发现的不同证据等级的先天性白内障相关基因。通过进一步对临床表型及遗传背景的筛选，最终纳入225个先天性白内障相关基因，进行产品设计及检测。
筛选的先天性白内障相关基因如下所示：
PEX10(5192),PEX14(5195),EPHA2(1969),HSPG2(3339),POMGNT1(55624),FOXE3(2301),RPE65(6121),CRYZ(1429),DNASE2B(58511),ABCD3(5825),COL11A1(1301),GJA8(2703),ADAMTSL4(54507),GPR161(23432),PROX1(5629),RAB3GAP2(25782),GNPAT(8443),PXDN(7837),PEX13(5194),RAB3GAP1(22930),LCT(3938),FIGN(55137),LRP2(4036),AGPS(8540),CRYGD(1421),CRYGC(1420),CRYGB(1419),CRYGA(1418),CYP27A1(1593),CRYBA2(1412),KCNJ13(3769),FYCO1(79443),COL7A1(1294),LAMB2(3913),FLNB(2317),GPX1(2876),PVRL3(25945),CPOX(1371),CASR(846),CNBP(7555),BFSP2(8419),SOX2(6657),CRYGS(1427),WFS1(7466),HMX1(3166),CC2D2A(57545),SRD5A3(79644),CLOCK(9575),AFF1(4299),ANK2(287),ETFDH(2110),CTNND2(1501),ERCC8(1161),VCAN(1462),EFNA5(1946),TGFBI(7045),SIL1(64374),SPARC(6678),TFAP2A(7020),GCNT2(2651),GCM2(9247),NEU1(4758),PEX6(5190),LGSN(51557),LCA5(167691),GJA1(2697),PEX7(5191),IFNGR1(3459),PEX3(8504),EZR(7430),FAM126A(84668),GTF2IRD1(9569),HIP1(3092),NRCAM(4897),AGK(55750),FDFT1(2222),BIN3(55909),DOCK5(80005),ESCO2(157570),WRN(7486),ADAM9(8754),EYA1(2138),CNGB3(54714),NBN(4683),RECQL4(9401),VLDLR(7436),CDKN2A(1029),GALT(2592),ALDH1A1(216),PTCH1(5727),TDRD7(23424),LMX1B(4010),POMT1(10585),VIM(7431),ITGB1(3688),ERCC6(2074),ATOH7(220202),PCBD1(5092),PTEN(5728),SLC16A12(387700),ALDH18A1(5832),PITX3(5309),OAT(4942),HRAS(3265),USH1C(10083),LGR4(55366),PAX6(5080),CAT(12359),PEX16(9409),DHCR7(1717),BEST1(7439),LRP5(4041),MYO7A(4647),FZD4(8322),MMP1(4312),ATM(472),CRYAB(1410),APOA1(335),JAM3(83700),PEX5(5830),COL2A1(1280),MIP(4284),MVK(4598),GJA3(2700),GJB6(10804),B3GALTL(145173),SLC25A15(10166),ITM2B(9445),COL4A1(1282),SEC23A(10484),OTX2(5015),SIX6(4990),VSX2(338917),TGFB3(7043),POMT2(29954),DICER1(23405),BUB1B(701),SORD(6652),FBN1(2200),NR2E3(10002),LOXL1(4016),MIR184(406960),POLG(5428),GFER(2671),TMEM114(283953),NOD2(64127),HSF4(3299),ADAMTS18(170692),MAF(4094),YWHAE+(7531),GUCY2D(3000),CRYBA1(1411),UNC45B(146862),PEX12(5193),WNT3(7473),NOG(9241),GALK1(2584),PYCR1(5831),EPG5(57724),CTDP1(9150),ADAMTS10(81794),SMARCA4(6597),MAN2B1(4125),SIPA1L3(23094),OPA3(80207),SIX5(147912),DMPK(1760),FKRP(79147),FTL(2512),LIM2(3982),TBC1D20(128637),BFSP1(631),PHARC(100272226),CHMP4B(128866),NCOA6(23054),SALL4(57167),GNAS(2778),CRYAA(1409),COL18A1(80781),LSS(4047),PEX26(55670),CRYBB3(1417),CRYBB2(1415),CRYBB1(1414),CRYBA4(1413),NF2(4771),LARGE(9215),ARSE(415),HCCS(3052),NHS(4810),BCOR(54880),NDP(4693),RP2(6102),PORCN(64840),PQBP1(10084),EBP(10682),GLA(2717),COL4A6(1288),COL4A5(1287),LAMP2(3920),OCRL(4952),ABCD1+(215),IKBKG(8517),AKR1E2(83592),CYP51A1(1595),FOXC1(2296),MFSD6L(162387),MYH9(4627),PEX1(5189),PEX2(5828),PEX19(5824),PITX2(5308),RAB18(22931),RNLS(55328),SOX2(6657),TMEM70(54968),TMEM114(283953),CBS(875),ERCC2(2068),ERCC3(2071),FKTN(2218),FOXD3(27022),PEX5L(51555),PEX11β(8799),SLC2A1(6513)；共225个基因，其中，括号中对应为该基因的Gene ID。
2、用于检测先天性白内障相关基因的探针的设计和制备
根据Genebank中公开的人类基因组HG19的上述先天性白内障相关基因的全外显子序列，对每个外显子的非重复区域根据碱基互补配对原则设计78bp的探针序列(即探针序列与对应的先天性白内障相关基因外显子序列是严格互补匹配的)，每个探针序列沿着基因外显子位置挪动设计，由此得到与先天性白内障相关基因外显子非重复区域匹配的探针组。利用原位合成技术，大量合成设计的探针，并利用PCR的方法扩增出大量的带有生物素标记的探针组。
具体地说，单个探针序列所匹配的先天性白内障相关基因外显子的区段如表1所示。表1中所列的探针序列所匹配的先天性白内障相关基因外显子的区段的顺序为列1由上至下，列2由上至下，列3由上至下。如列1中第3行表示PITX3基因的chr10:103990252-103990330(算头不算尾，即从该区段的第一个碱基位开始、但不包含该区段的最后一个碱基位，下同)的外显子区域，共78bp，对应该区域的探针序列为5’-GGATGATCTACGGGCGGGGCCGCTCATACGGGCCTTTCCACGGCGTACTGGCACGGACTAAGGTTGGCTGCCGGGGGC-3’；列1中第4行表示PITX3基因的chr10:103990330-103990408的外显子区域，共78bp，对应该区域的探针序列为5’-GGCCCGTGCACAGCGGGGTAGCTGAAGGAGGCGTGCTGTTTGGCTTTGAGCCGCAGGCTGGCCAGGCTCGAGTTACAC-3’；列2中第2行表示FKRP基因的chr19:47261713-47261791的外显子区域，共78bp，对应该区域的探针序列为5’-GTAATAAAGCTTAAATTATTCCATTTTAAAATTATGAATATGAATAGGGTTTTTTTTATGTTTCTTGCCTCATCCCAA-3’。
表1探针序列所匹配的先天性白内障相关基因外显子的区段
实施例2：用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒
本实施例的用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒，是通过检测先天性白内障相关基因外显子的突变来进行分子遗传学检测的试剂盒。
本实施例的用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒包括：实施例1得到的探针组，还包括PCR离子扩增mix(PCR缓冲液、dNTPs、Taq酶等)，96孔板和96孔板封口模以及QIAGEN Purification kit(Cat.No.159992)、Qiagen PCR kit(Cat.No.28104)、Qiagen MinElute kit(Cat.No.28004)和Ampure beads XP(Cat.No.4471250)等。
实施例3：用于检测先天性白内障相关基因的试剂盒的应用
将质检合格的基因组DNA使用Covaris破碎仪随机打断成长度为180-280bp的片段，末端修复和尾端加A-tailing后在片段两端分别连接上接头制备DNA文库。将带有特异index的DNA文库polling后与带有生物素标记的探针进行液相杂交，再使用带链霉亲和素的磁珠将目标基因(先天性白内障相关基因)的外显子区域捕获下来，经PCR线性扩增后进行文库质检，合格后进行测序。
1.样本要求
基因组DNA样本(总DNA样品，OD260/280值介于1.8-2.0之间，浓度≧100ng/μL，总量≧50μL/样品，并确保DNA无污染，无降解)
2.基因组DNA文库构建
2.1基因组DNA打断
2.1.1将溶于TE buffer的80μL基因组DNA加入到Covaris microtube。
2.1.2按照以下设置打断程序：
2.1.3打断的样本用QIAGEN Purification kit(Qiagen PCR kit或Qiagen MinElute kit或Ampure beads XP)纯化。
2.2片断末端修复
2.2.1取1.5ml离心管或200μL PCR管，根据以下配制反应体系
DNA and H2O： 37.5μL
End Repair Reaction Buffer(红色)： 7μL
End Repair Enzyme(橙色)： 5.5μL
Total volume 50μL，20℃孵育30分钟
2.2.2反应产物用Ampure beads按照以下步骤纯化
1)将Ampure beads从冰箱里取出，上下颠倒使beads充分悬浮。
2)向产物中加入1.8倍体积充分悬浮的Ampure beads(如产物体积50μL，则加入90μL的Ampure beads)，用枪头抽吸混匀至少十次。
3)将混合液放在室温下5分钟，使DNA充分被吸附在beads上。
4)在磁铁上室温放置2分钟(不要旋转tube)。
5)2分钟或是溶液变得清澈以后，用移液器将澄清的液体移弃(注意：枪头不要碰到磁珠)。
6)Tube置于磁力架上，加入750μL(200μL PCR管中加入200μL)80％的酒精(酒精配置时间在两周以内，并确保封闭好)，关上管盖，室温放置30秒。
7)移弃澄清液。
8)重复步骤6，7一次。
9)用200μL的枪头将管底的残留液体彻底吸干。
10)将tube从磁铁上移开，打开管盖，室温放置2分钟(此步骤是为了挥发掉残留的酒精，以免影响后续反应)。
11)加入35μL的无酶水(RNase water)，充分混匀，室温放置2分钟。
12)将tube放到磁铁上，室温放置两分钟(或是待溶液完全清澈)，转移33.5μL的澄清液(DNA在澄清液中)于一个新的离心管或PCR管中，以备下步使用。
2.3片段的尾端加A(A—Tailing)
2.3.1根据以下组分配制反应体系
DNA in H2O: 33.5μL
A-Tailing Reaction Buffer(黄色): 15μL
A-Tailing Enzyme(绿色): 1.5μL
Total volume 50μL，37℃孵育30min
2.3.2反应产物用Ampure beads按照以下步骤纯化
1)将Ampure beads从冰箱里取出，上下颠倒使beads充分悬浮。
2)向产物中加入1.8倍体积充分悬浮的Ampure beads(如产物体积50μL，则加入90μL的Ampure beads)，用枪头抽吸混匀至少十次。
3)将混合液放在室温下5分钟，使DNA充分被吸附在beads上。
4)在磁铁上室温放置2分钟(不要旋转tube)。
5)2分钟或是溶液变得清澈以后，用移液器将澄清的液体移弃(注意：枪头不要碰到磁珠)。
6)Tube置于磁力架上，加入750μL(200μL PCR管中加入200μL)80％的酒精(酒精配置时间在两周以内，并确保封闭好)，关上管盖，室温放置30秒。
7)移弃澄清液。
8)重复步骤6，7一次。
9)用200μL的枪头将管底的残留液体彻底吸干。
10)将tube从磁铁上移开，打开管盖，室温放置2分钟(此步骤是为了挥发掉残留的酒精，以免影响后续反应)。
11)加入30μL的无酶水(RNase water)，充分混匀，室温放置2分钟。
12)将tube放到磁铁上，室温放置两分钟(或是待溶液完全清澈)，转移27μL的澄清液(DNA在澄清液中)于一个新的离心管或PCR管中，以备下步使用。
2.4连接illumina adaptor
2.4.1根据以下组分配制反应体系
DNA in EB: 27μL(来自A-tailing)
Ligation Reaction Buffer(白色): 30μL
Ligation Enzyme(紫色)3μL: 3μL
Total volume 70μL，25℃孵育10min。
2.4.2反应产物用Ampure beads按照以下步骤纯化
1)将Ampure beads从冰箱里取出，上下颠倒使beads充分悬浮。
2)向产物中加入1.5倍体积充分悬浮的Ampure beads(如产物体积70μL，则加入105μL的Ampure beads)，用枪头抽吸混匀至少十次。
3)将混合液放在室温下5分钟，使DNA充分被吸附在beads上。
4)在磁铁上室温放置2分钟(不要旋转tube)。
5)2分钟或是溶液变得清澈以后，用移液器将澄清的液体移弃(注意：枪头不要碰到磁珠)。
6)Tube置于磁力架上，加入750μL(200μL PCR管中加入200μL)80％的酒精(酒精配置时间在两周以内，并确保封闭好)，关上管盖，室温放置30秒。
7)移弃澄清液。
8)重复步骤6，7一次。
9)用200μL的枪头将管底的残留液体彻底吸干。
10)将tube从磁铁上移开，打开管盖，室温放置2分钟(此步骤是为了挥发掉残留的酒精，以免影响后续反应)。
11)加入32μL的无酶水(RNase water)，充分混匀，室温放置2分钟。
12)将tube放到磁铁上，室温放置两分钟(或是待溶液完全清澈)，转移30μL的澄清液(DNA在澄清液中)于一个新的PCR管中，进行以下PCR反应。
2.5PCR
2.5.1按照以下组分配制PCR反应体系
2.5.2PCR程序设置如下：
Stage1：98℃2min
Stage2：9x(98℃,30sec；65℃,30sec；72℃,30sec)
Stage3：72℃5min，4℃10s
2.5.3PCR反应产物用Ampure beads按照以下步骤纯化(先纯化一半的PCR产物，若产量低，根据其要求将另一半产物加扩相应循环数)
1)将Ampure beads从冰箱里取出，上下颠倒使beads充分悬浮。从反应产物中取出50μL至一个新的PCR管中(吸取时先用吸头上下混匀数次后再吸取)。
2)向产物中加入1.5倍体积充分悬浮的Ampure beads(如产物体积50μL，则加入75μL的Ampure beads)，用枪头抽吸混匀至少十次。
3)将混合液放在室温下5分钟，使DNA充分被吸附在beads上。
4)在磁铁上室温放置2分钟(不要旋转tube)。
5)2分钟或是溶液变得清澈以后，用移液器将澄清的液体移弃(注意：枪头不要碰到磁珠)。
6)Tube置于磁力架上，加入750μL(200μL PCR管中加入200μL)80％的酒精(酒精配置时间在两周以内，并确保封闭好)，关上管盖，室温放置30秒。
7)移弃澄清液。
8)重复步骤6，7一次。
9)用200μL的枪头将管底的残留液体彻底吸干。
10)将tube从磁铁上移开，打开管盖，室温放置2分钟(此步骤是为了挥发掉残留的酒精，以免影响后续反应)。
11)加入35μL的无酶水(RNase water)，充分混匀，室温放置2分钟。
12)将tube放到磁铁上，室温放置两分钟(或是待溶液完全清澈)，转移33μL的澄清液(DNA在澄清液中)于一个新的作好标记的离心管中，PCR管中剩余3μL样本用于凝胶电泳。
2.6文库的质量检测
1)取1μL制备好的文库样本，用Nanodrop 2000测试其OD值，取3μL制备好的文库样本，做1％的琼脂糖凝胶电泳实验，电泳结果片段大小在300bp到500bp之间。
2)制备好的文库样本短时间可以存放在4℃，长时间保存则保存在-20℃。
3.目标区域捕获及测序
取制备好的基因组DNA文库与实施例1制备的带有生物素标记的用于检测先天性白内障相关基因的探针组进行液相杂交，再使用带链霉亲和素的磁珠将与探针结合的先天性白内障相关基因的外显子序列捕获下来，经PCR线性扩增后进行文库质检，合格后进行二代测序。
实施例4：采用本发明的检测探针及试剂盒进行临床先天性白内障标本检测
选取先天性白内障家系中的三人(父亲不患病，儿子与母亲患病)进行检测，依实施例3的具体流程进行样本制备及序列检测。
以上述先天性白内障家系中的母亲样本为例，测序原始数据量为1022Mb，目标区域的测序覆盖度达99.91％，目标区域的平均测序深度达1401.99，目标区域碱基测序深度大于20x的比例达99.31％。将去除接头序列和低质量碱基的测序数据(clean data)用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)比对到人类基因组上；用GATK软件对SNP和InDel进行变异检测，用ANNOVAR软件同时关联多个数据库(如dbsnp，1000g，ESP等)对变异结果进行注释。对得到的变异结果进行必要的过滤后再进行先天性白内障相关基因的分析。
根据一般疾病的遗传方式，按照显性遗传(AD：Autosomal Dominant)、隐性遗传(AR：Autosomal Recessive)进行分析。1)显性遗传：患者和母亲有相同的杂合突变，而父亲没有该突变位点；2)隐性遗传：患者和母亲有相同的纯合突变，同时父亲在该位点为杂合突变。筛选得到的先天性白内障显性遗传方式相关突变基因结果如表2，列出突变均为未报道过的突变位点。以上结果证明本发明的探针组及试剂盒较之前的白内障基因检测产品具有更为广泛、高效的基因突变检出率。
表2先天性白内障显性遗传和隐性遗传方式相关突变基因
注：Gene：基因名称；Chr：染色体；Begin：起始位置；End：终止位置；MutPosition：突变的氨基酸位点。
其中，检测到COL18A1的A1203V突变的探针(对应的外显子区段chr21:46925269-46925347)序列为：5’-CCTGCAGCTATCAGCGTTCCCGGCCCTCCGGGCCCCCCTGGGCCCCCTGGGCCCCCTGGAACCATGGGCGCCTCCTCA-3’；检测到HIP1的L994M突变的探针(对应的外显子区段chr7:75168697-75168775)序列为：5’-GCTCTCCCAGTTTTTGACGCTCCTTCTGCAATTCATTTTCTAGCTCTAGCACCCTAACCTGTAAGGGAAAGTAAGTGG-3’；检测到MIP的G196fs突变的探针(对应的外显子区段chr12:56846818-56846896)序列为：5’-TCCAGAAGGGCTTCAGGATCTTGCCCCTCTCCCTTCACTCACCCAGTGGTTAGTGAAGTTCCCAGTGAGAATGGCAGG-3’；检测到SORD的P96S突变的探针(对应的外显子区段chr15:45353227-45353305)序列为：5’-TCCCACCCTCGGACATGGTGCCATCTTTGTTTTCCTCTCCAGGTGATCGTGTTGCCATCGAGCCTGGTGCTCCCCGAG-3’；检测到VCAN的R3092P突变的(对应的外显子区段chr5:82841334-82841412)探针序列为：5’-TTTCTTACTTTCCTGAATATGGTAGGACCTGATCGCTGCAAAATGAACCCGTGCCTTAACGGAGGCACCTGTTATCCT-3’；检测到VCAN的P1872L突变的探针(对应的外显子区段chr5:82834364-82834442)序列为：5’-ACCACTGTTTCTTCATTTTCATTAAACGTAGAGTATGCAATTCAAGCCGAAAAGGAAGTAGCTGGCACTTTGTCTCCG-3’。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。