完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法与流程

本发明属于物理学和食品工程学技术领域，尤其涉及一种完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法。

背景技术：

近几十年以来，虽己从各种生物中分离的生物活性肽有几百种之多，但目前，生物活性肽还没有较为一致的分类方法。生物活性肽按照来源来分可分为外源性和内源性生物活性肽；按照功能来分可分为生理活性和食品感官肽。

外源性生物活性肽是指非机体产生成的，以肽的形式被吸收后具有生物活性的肽类物质，如动物乳汁可提供多种活性肤，包括乳源性表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)等。内源性生物活性肽是指生物体自身的组织或器官产生的对其本身具有生理调节作用的肽类物质，主要包括体内一些重要的内分泌腺分泌的肽类激素，如生长激素释放激素、促甲状腺素、胸腺肤、胰岛素等；由血液或组织中产生的组织激肤，如缓激肽。

长期以来，人们一直认为蛋白质只能以游离氨基酸的形式才能被消化吸收利用，其实动物肠道对蛋白质的利用并不局限于游离氨基酸的形式，而大部分是以2～3个氨基酸组成的寡肽形式被吸收的。这些肽类物质是介于蛋白质和氨基酸之间的分子聚合物，能够直接参与摄食、消化、代谢过程，其吸收机制优于蛋白质和氨基酸，且具有氨基酸和蛋白质不可替代的生理功能。它可作为药物、疫苗、诊断试剂、酶抑制剂及药物先导化合物。科学家们研究发现了具有免疫调节、降血压、抗病毒、抗肿瘤等功能的活性肤，它们多用于医疗、保健和食品等行业。

目前，国内用于制备动物脏器多肽的的技术主要有以下几种：

①生物酶解法；②水解法；③物理制备法。

其中：

①生物酶解法

使用多种蛋白酶(如水解酶)把蛋白质降解，之后经过十分繁琐的生物化学过程进行进一步的分离或纯化。

酶解法要求条件极高，分离过程繁琐冗长，中间产物过多，不易进行纯分离，而且，由于酶的继续作用，可导致部分活性物质的失活，且极易污染。通常多适用于实验室内制备，而真正用于规模化制备的较少。再者，使用酶解法生产的产量低，产成率<5％,产品成本高。

②水解法

包括碱法和酸法，主要原理是通过酸、碱处理控制pH，使蛋白质变性、降解或游离，最终达到分离、纯化的目的。

水解法使用较多的是酸法，但不论是酸法还是碱法均可造成某些有效成份的损失，如酸解法可造成全部色氨酸、部分丝氨酸和酪氨酸的损失，而且劳动条件差，腐蚀性强，并产生大量废物；碱法可使氨基酸发生消旋作用，使苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、胱氨酸等大部分失活。水解法制备技术的产品出成率只有2-3％。

③物理制备法

主要用于动物脏器冻干粉及冻干粉胶囊的制备，其工艺技术如下：

动物脏器预处理→剪碎→冷冻→低温粉碎→冻干→胶囊/包装

物理制备法不能使大分子结构的蛋白质降解，因而无法分离动物脏器中的有效成份，更不能进行纯分离纯化，故只能用于冻干粉这样的粗制产品的生产。其产品的吸收性差，生物利用率很低。

技术实现要素：

本专利就在物理制备法的基础上，通过对工艺技术的改进，可有效避免传统物理法制备中存在的问题，获得动物脏器中小分子肽等有效成分，进而提高产品的出成率和生物利用率。

本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法，包括如下步骤：

步骤一、动物脏器预处理：清洗去污、分离与去除动物脏器的脂肪组织和结缔组织、剪碎、清洗溶血；

步骤二、动物脏器匀浆：无菌条件下，控去多余蒸馏水，将剪碎、溶血后的组织与无菌蒸馏水按料水比30-60％(w/v)混合，然后用组织破碎匀浆器，将其匀浆细碎；

步骤三、冻融：-20至-70℃条件下使动物脏器匀浆组织迅速冷冻20-80h，然后于15-35℃水浴解冻；

步骤四、低温粉碎：在0-10℃条件下，用低温高速匀浆机粉碎匀浆脏器组织；

步骤五、超微粉碎：低温粉碎的动物脏器组织液与无菌蒸馏水按料水比30-60％(w/v)混合，用低温高速涡旋粉碎超微粉碎；

步骤六、低温高压蛋白粉碎：在0-10℃条件下，用超高压连续流细胞破碎机，将低温粉碎的脏器组织进行细胞壁破碎；

步骤七、超细分离：利用超滤和分子筛截取目标物质；

步骤八、冷冻干燥：-20至-90℃低温迅速冷冻，干燥。

在本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法一种较佳实施例中，所述步骤一中清洗溶血过程具体为：

步骤一、将剪碎的动物脏器组织用1％的新洁尔灭溶液浸泡15-20min，灭菌蒸馏水冲洗三遍；

步骤二、用75％的酒精浸泡15-20min，灭菌蒸馏水反复冲洗三遍；

步骤三、按料水比1:10-1:5(w/v)加入去离子水进行溶血，溶血时间为10-48小时。

在本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法一种较佳实施例中，所述步骤五中，低温高速涡旋粉碎器在2℃-10℃，18000转/分的工作条件下工作。

在本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法一种较佳实施例中，所述步骤五反复进行三至五次粉碎。

在本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法一种较佳实施例中，所述步骤六反复进行三至五次粉碎。

本发明的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法具有如下有益效果：

本发明的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法建立了一种能够有效制备动物脏器小分子多肽的物理学技术。本技术可简单、高效的提高动物脏器的利用率，同时保证有效成分小分子多肽、氨基酸等含量及活性。该技术是一种完全物理法制备小分子多肽的工艺技术；该技术工艺简单、方便、易操作，适用于产业化生产；该技术的应用可极大的开发动物脏器的应用价值；该技术可保证小分子多肽的活性，避免主要氨基酸的失活。

本技术专利系应用完全物理法制备动物脏器小分子多肽，避免了化学试剂对小分子多肽活性成分等的影响，在保证产品安全的基础上，获取天然高效的小肽活性物质。本品以免疫调节、营养和抗氧化为主要功效，在预防、治疗和健康保健等方面有广泛作用。该专利技术可合理利用动物脏器资源，提高动物脏器的有效利用率，进而提高动物脏器的附加值，提高动物的生产价值。

采用超微粉碎系在2℃-10℃低温条件下，高速涡旋粉碎机产生机械剪切和超声波破碎2种功能，使动物脏器变成分子级大小；采用低温高压蛋白粉碎,将低温粉碎的脏器组织进行细胞壁破碎，达到细胞破碎的效果，同时保证细胞内物质的活性和性能。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：

图1是本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法的一种实施例的工艺流程图；

图2是图1所示的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法的清洗溶血一种实施例的工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，是本发明提供的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法的制备方法一种实施例的工艺流程图。

所述完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法S1包括如下步骤：

步骤S11、动物脏器预处理：清洗去污、分离与去除动物脏器的脂肪组织和结缔组织、剪碎、清洗溶血；

步骤S12、动物脏器匀浆：无菌条件下，控去多余蒸馏水，将剪碎、溶血后的组织与无菌蒸馏水按料水比30-60％(w/v)混合，然后用组织破碎匀浆器，将其匀浆细碎；

步骤S13、冻融：-20至-70℃条件下使动物脏器匀浆组织迅速冷冻20-80h，然后于15-35℃水浴解冻；

步骤S14、低温粉碎：在0-10℃条件下，用低温高速匀浆机粉碎匀浆脏器组织；

步骤S15、超微粉碎：低温粉碎的动物脏器组织液与无菌蒸馏水按料水比30-60％(w/v)混合，用低温高速涡旋粉碎超微粉碎；

具体地，低温高速涡旋粉碎器在2℃-10℃，18000转/分的工作条件下工作，反复进行三至五次粉碎；

步骤S16、低温高压蛋白粉碎：在0-10℃条件下，用超高压连续流细胞破碎机，将低温粉碎的脏器组织进行细胞壁破碎；

具体地，反复进行三至五次粉碎。

步骤S17、超细分离：利用超滤和分子筛截取目标物质；

步骤S18、冷冻干燥：-20至-90℃低温迅速冷冻，干燥。

请再次参阅图2，图2是图1所示的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法的清洗溶血一种实施例的工艺流程图。

所述步骤S11中清洗溶血过程具体为：

步骤S111、将剪碎的动物脏器组织用1％的新洁尔灭溶液浸泡15-20min，灭菌蒸馏水冲洗三遍；

步骤S112、用75％的酒精浸泡15-20min，去离子水反复冲洗三遍；

步骤S113、按料水比1:10-1:5(w/v)加入去离子水进行溶血，溶血时间为10-48小时。

本发明的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法1及其制备方法具有如下有益效果：

本发明的完全物理法制备动物脏器小分子多肽的方法建立了一种能够有效制备动物脏器小分子多肽的物理学技术。本技术可简单、高效的提高动物脏器的利用率，同时保证有效成分小分子多肽、氨基酸等含量及活性。该技术是一种完全物理法制备小分子多肽的工艺技术；该技术工艺简单、方便、易操作，适用于产业化生产；该技术的应用可极大的开发动物脏器的应用价值；该技术可保证小分子多肽的活性，避免主要氨基酸的失活。

本技术专利系应用完全物理法制备动物脏器小分子多肽，避免了化学试剂对小分子多肽活性成分等的影响，在保证产品安全的基础上，获取天然高效的小肽活性物质。本品以免疫调节、营养和抗氧化为主要功效，在预防、治疗和健康保健等方面有广泛作用。该专利技术可合理利用动物脏器资源，提高动物脏器的有效利用率，进而提高动物脏器的附加值，提高动物的生产价值。

采用超微粉碎系在2℃-10℃低温条件下，高速涡旋粉碎机产生机械剪切和超声波破碎2种功能，使动物脏器变成分子级大小；采用低温高压蛋白粉碎,将低温粉碎的脏器组织进行细胞壁破碎，达到细胞破碎的效果，同时保证细胞内物质的活性和性能。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。