N‑(4‑取代苯基)‑2‑取代乙酰胺类化合物及其作为SIRT2蛋白抑制剂的用途的制作方法

本发明属于化合物药物领域，具体涉及N-(4-取代苯基)-2-取代乙酰胺类化合物及其作为SIRT2蛋白抑制剂的用途。
背景技术：
：沉默信息调节因子2(Sir2)相关蛋白(Sirtuin，SIRT)为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的第III类组蛋白去乙酰化酶(HDAC)，可通过对组蛋白、转录因子等蛋白质的赖氨酸残基进行去乙酰化修饰作用来调控靶基因的转录和表达，从而参与机体代谢、细胞分化、凋亡以及肿瘤的发生发展等病理生理过程。基于氨基酸序列的相似性，人类SIRT蛋白共分为四类，七种亚型，即SIRT1-SIRT7，其中，SIRT1-3属于第一类，具有较强的脱乙酰化作用，也具有一定脱长链脂肪酸酰化的作用；SIRT4，SIRT5分别属于第二和第三类，SIRT6、SIRT7同属于第四类，它们几乎无脱乙酰化作用或只有极弱的脱乙酰化作用。尽管如此，因SIRT1-7分别位于不同的亚细胞结构，催化不完全相同的底物去酰基化，同一类的SIRT蛋白也具有不同的催化作用和活性。据报道SIRT2在各种组织中表达，尤其是成人的大脑中表达量较高，可发挥重要的表观遗传调控作用。SIRT2主要位于细胞质，其可通过催化转录因子和α-tubulin等的去乙酰化作用而调控细胞的分裂。另外，SIRT2可在细胞周期G2/M期不断穿梭于细胞质和细胞核之中，因此其除了催化非组蛋白α-tubulin,Foxo3a,eIF5a和p53等的去乙酰化作用外还可催化组蛋白H4的去乙酰化作用而调控基因的表达。近年来研究发现SIRT2活性失调与癌症、炎症和神经退行性病变的发病机制密切相关。Outeiro等人在帕金森细胞模型中发现抑制SIRT2可逆转α-突触核蛋白的毒性并改善包含物的形态学；Green团队研究发现在阿尔兹海默症的转基因小鼠模型中SIRT2抑制剂烟酰胺可增加α-tubulin乙酰化水平从而改善小鼠的认知；另Lin及其同事通过研究证实在小鼠乳腺癌模型中选择性SIRT2抑制剂TM可有效抑制肿瘤的生长，且表现出较低的毒性。综上，SIRT2被认为是肿瘤、神经退行性等疾病的潜在治疗靶点，新型高活性和选择性SIRT2抑制剂的研究是如今药物研究的热点之一。然而，现有SIRT2抑制剂的数量仍然较少，难以满足广大患者的需求，因此，需要发明一类新的沉默信息调节因子2相关蛋白的抑制剂，为广大患者提供更多的用药选择。技术实现要素：本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的N-(4-取代苯基)-2-取代乙酰胺类化合物：式Ⅰ所示的化合物。本发明提供的式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物：其中，X选自Y选自R1、R2、R3分别独立地选自H、羟基、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基或苯基；R4选自芳基、杂芳基、取代的芳基或取代的杂芳基；所述取代芳基和取代杂芳基的取代基，分别独立地选自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基、卤素、羟基、巯基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨酰基。进一步的，R1、R3分别独立地选自H、羟基、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基或C1～C4卤代烷基；R2为H。进一步的，R4选自苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、取代的苯基、取代的吡啶基、取代的呋喃基或取代的噻吩基；所述取代苯基、取代吡啶基、取代呋喃基和取代噻吩基的取代基，分别独立地选自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基。进一步的，所述的化合物为：本发明还提供了一种制备上述化合物的方法，当X选自时，它包括以下步骤：①、化合物A与化合物B反应，得到化合物C；其中，化合物A与化合物B的摩尔比为1：0.5～2；Y选自R4选自芳基、杂芳基、取代的芳基、取代的杂芳基；所述取代芳基和取代杂芳基的取代基，分别独立地选自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基、卤素、羟基、巯基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨酰基；Z选自卤素或羟基；②、化合物C与化合物D反应，得到化合物Ⅰa；其中，化合物C与化合物D的摩尔比为1：0.5～2；R1、R2、R3分别独立地选自H、羟基、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基或苯基。本发明还提供了另外一种制备上述化合物的方法，当X选自时，它包括以下步骤：a、按照上述方法，制备得到X为的化合物Ⅰa，即：b、X为的化合物Ⅰa与间氯过氧苯甲酸反应，得到化合物Ⅰb；其中，X为的化合物Ⅰa与间氯过氧苯甲酸的摩尔比为1：0.5～5；Y选自R1、R2、R3分别独立地选自H、羟基、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基或苯基；R4选自芳基、杂芳基、取代的芳基或取代的杂芳基；所述取代芳基和取代杂芳基的取代基，分别独立地选自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4卤代烷基、卤素、羟基、巯基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨酰基。本发明还提供了上述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物在制备沉默信息调节因子2相关蛋白的抑制剂中的用途。本发明还提供了上述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物在制备治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。进一步的，所述的肿瘤为肝癌、肝母细胞瘤、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病。本发明还提供了一种治疗和/或预防肿瘤的药物组合物，它是以上述式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐、晶型、溶剂合物为活性成分，加上药学上常用的辅料制备得到的制剂。本发明式Ⅰ所示的新化合物，不仅对SIRT2具有良好的抑制活性，而且对肿瘤具有很好的抑制作用，具有很好的药用价值，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明新化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，能耗小，产率高，成本低，可适合产业化生产。本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀Ca～Cb烷基表明任何包含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，C1～C4烷基是指包含1～4个碳原子的烷基，换句话说，C1～C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基。术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。本发明所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然属于本发明保护的范围。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明图1为本发明化合物1的1HNMR图。图2为本发明化合物1的13CNMR图。图3为本发明化合物15的1HNMR图。图4为本发明化合物15的13CNMR图。图5为本发明化合物17的1HNMR图。具体实施方式本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。实施例1、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯氨基)苯基)乙酰胺(化合物1)的合成将化合物1a(1mmol,184mg)溶于二氯甲烷(DCM,3ml)中,加入三乙胺(3mmol,416μl)，后将反应置于0℃搅拌溶解，在0℃下将溴乙酰溴(1.1mmol,96μl)的DCM(1ml)溶液缓慢加入到反应后，将反应移至室温搅拌反应4-5h,经TLC检测反应完全后，减压除去多余的溶剂，柱层析得到中间体1b。然后，将4,6-二甲基-2-巯基嘧啶(1.2mmol,168.2mg)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺，3ml)中，室温条件下加入叔丁醇钾(2mmol,224.4mg)，接着在室温下搅拌反应30min后，将化合物1b(1mmol,305mg)溶于DMF(1ml)中缓慢加入到反应中，室温搅拌反应4-5h后，经TLC检测反应完全后，往反应中加入冰水(40ml)，并用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，有机层经无水MgSO4干燥，浓缩后经柱层析得到化合物1(142mg,产率41％)。化合物1的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.08(s,1H),8.05(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.20(t,J＝8.0Hz,2H),7.05-6.98(m,5H),6.77(t,J＝7.2Hz,1H),4.02(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.3,144.5,139.4,132.3,129.6,121.0,119.5,118.3,116.5,116.3,35.9,23.8ppm。实施例2、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物2)的合成将化合2a(1mmol,185mg)和溴乙酸(1.2mmol,166.8mg)溶于DCM(16ml)中，并置于0℃搅拌溶解后，在0℃下依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,1.2mmol,230.4mg),1-羟基苯并三唑(HOBT,1.2mmol,162mg),N,N-二异丙基乙胺(DIEA,2mmol,331μl)，加毕，将反应移至室温搅拌反应过夜。经TLC检测反应完全后减压除去多余的溶剂，柱层析得中间体2b。以中间体2b为原料，按照实施例1化合物1类似的合成方法，得到目标化合物2，产率52％。化合物2的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.27(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.37(t,J＝8.0Hz,2H),7.11(t,J＝7.6Hz,1H),7.01-6.96(m,5H),4.04(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,157.8,152.3,135.4,130.4,123.5,121.3,119.9,118.4,116.5,35.8,23.8ppm。实施例3、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)亚磺酰基)-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物3)的合成将化合物2(70.0mg,0.185mmol)用DCM(4mL)溶解，0℃搅拌下加入间氯过氧苯甲酸(33.5mg,0.194mmol)，室温反应45min，经TLC检测反应完全后，减压除去多余的溶剂，柱层析得白色固体目标化合物3(44mg，产率62％)。化合物3的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.32(s,1H),7.47(d,J＝8.8Hz,2H),7.33(t,J＝7.6Hz,2H),7.10(t,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.93(m,5H),4.16(d,J＝14.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.4Hz,1H),2.55(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ171.5,168.9,162.9,157.7,152.7,134.9,130.4,123.5,121.9,121.4,119.9,118.4,60.5,23.9ppm。实施例4、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)磺酰基)-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物4)的合成将化合物2(70.0mg,0.185mmol)用DCM(4mL)溶解，0℃搅拌下加入间氯过氧苯甲酸(95.6mg,0.554mmol)，室温反应3h，经TLC检测反应完全后减压除去多余的溶剂，柱层析得白色固体目标化合物4(44mg，产率71％)。化合物4的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.33(s,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(t,J＝7.6Hz,2H),7.13(t,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.95(m,5H),4.16(d,J＝14.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.4Hz,1H),2.55(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.3,164.5,159.8,157.6,152.9,134.6,130.5,123.7,123.6,121.4,119.9,118.5,57.9,23.8ppm。实施例5、N-(4-苄基苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物5)的合成将LiAlH4(10mmol,379.5mg)加入到反应瓶中后，置于0℃下约15min后将AlCl3(10mmol,1333mg)的乙醚(15ml)溶液滴加到反应中，混合液在0℃搅拌5min。接着将对氨基二苯甲酮(5a,1mmol,197.2mg)的乙醚(15ml)溶液滴加到反应中，并将反应移至室温反应3h,经TLC检测反应完全后，反应液先用6MHCl稀释，后用饱和NaHCO3中和，水层经乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，柱层析得中间体5b。以中间体5b为原料，按照实施例2化合物2类似的合成方法，得到目标化合物5，三步总产率36％。化合物5的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.17(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,2H),7.22-7.15(m,5H),6.97(s,1H),4.02(s,2H),3.89(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,141.9,137.5,136.7,129.4,129.1,128.8,125.4,119.8,116.5,40.0,35.9,23.8ppm。实施例6、N-(4-苯甲酰基苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物6)的合成以化合物5a为原料，按照实施例2化合物2类似的合成方法，得到目标化合物6，两步总产率45％。化合物6的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.65(s,1H),7.79-7.74(m,4H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(t,J＝4.4Hz,1H),7.56(t,J＝8.0Hz,2H),6.98(s,1H),4.10(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ195.00,169.7,167.7,167.5,143.6,138.0,132.7,131.9,131.7,129.8,128.9,118.8,116.6,36.1,23.8ppm。实施例7、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(羟基(苯基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物7)的合成将LiAlH4(5mmol,189.8mg)加入到反应瓶中，置于0℃下搅拌15min后将AlCl3(5mmol,666.7mg)的乙醚(8ml)溶液滴加到反应后，将混合液在0℃搅拌5min。接着将对氨基二苯甲酮(5a,1mmol,197.2mg)的乙醚(8ml)溶液滴加到反应中，然后将反应移至室温反应3h,经TLC检测反应完全后，反应液先用6MHCl稀释，再用饱和NaHCO3中和，水层经乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机层，无水Na2SO4干燥，浓缩，柱层析得到化合物中间体7a。以中间体7a为原料，按照实施例2化合物2类似的合成方法，得到化合物7，三步总产率32％。化合物7的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.20(s,1H),7.57(s,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.30(t,J＝8.0Hz,2H),7.25-7.19(m,2H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),5.89(d,J＝4.0Hz,1H),5.65(d,J＝4.0Hz,1H),4.01(s,2H),2.32(s,6H)ppm。实施例8、N-(4-(苄胺基)苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物8)的合成利用8a按照实施例2中间体2b的合成方法合成中间体8b，接着利用8b按照实施例2目标化合物2的合成方法合成中间体8c。然后将苯甲醛(0.374mmol,39.6mg)和化合物8c(0.34mmol,98.1mg)溶于DCM(6ml)中，再将2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸乙酯(汉斯酯，0.477mmol,120.1mg)加入，最后滴入三氟乙酸(0.17mmol,12.7μl)并置于45℃回流反应过夜。经TLC检测反应完全后，减压除去多余的溶剂，柱层析得目标化合物8，三步反应总产率为27％。化合物8的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.85(s,1H),7.37-7.31(m,4H),7.30-7.25(m,4H),6.98(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,2H),4.26(s,2H),3.97(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,150.2,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,116.5,112.7,46.1,35.7,23.8ppm。实施例9、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((3-甲氧基苄基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物9)的合成利用中间体8c与3-甲氧基苯甲醛，按照实施例8化合物8类似的合成方法获得目标化合物9，产率75％。化合物9的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.85(s,1H),7.38-7.32(m,3H),7.28-7.24(m,4H),6.98(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,2H),4.26(s,2H),3.97(s,2H),3.83(s,3H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ170.0,167.6,166.2,159.9,150.3,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,117.0,116.5,112.7,54.2,46.1,35.7,23.8ppm。实施例10、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((吡啶-4-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物10)的合成利用中间体8c与4-吡啶甲醛，按照实施例8化合物8类似的合成方法获得目标化合物10，产率78％。化合物10的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.83(s,1H),8.48(d,J＝5.6Hz,2H),7.33(d,J＝6.0Hz,2H),7.24(d,J＝8.8Hz,2H),6.97(s,1H),6.50(d,J＝8.8Hz,2H),6.29(t,J＝6.0Hz,1H),4.29(d,J＝6.4Hz,2H),3.96(s,2H),2.32(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,150.2,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,116.5,112.7,46.1,35.7,23.8ppm。实施例11、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((噻吩-2-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物11)的合成利用重要中间体8c与2-噻吩甲醛，按照实施例8化合物8类似的合成方法获得目标化合物11，产率71％。化合物11的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.80(s,1H),7.32(d,J＝3.2Hz,1H),7.24(d,J＝5.6Hz,2H),7.01(s,1H),6.93(t,J＝3.2Hz,2H),6.57(d,J＝5.6Hz,2H),6.07(brs,1H,),4.39(s,2H),3.95(s,2H),2.32(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ170.8,169.9,167.4,165.9,145.1,144.8,129.2,127.2,125.2,124.8,121.3,116.5,113.0,55.4,35.8,23.8ppm。实施例12、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((呋喃-2-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物12)的合成利用中间体8c与糠醛，按照实施例8化合物8类似的合成方法获得目标化合物12，产率70％。化合物12的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.89(s,1H),7.58(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),6.97(s,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H),6.38(s,1H),6.29(s,1H),4.24(s,2H),3.99(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,153.4,144.2,142.5,129.8,121.2,116.5,113.5,110.8,107.7,41.0,35.8,24.1ppm。实施例13、N-(4-(苄氧基)苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物13)的合成将对氟硝基苯(13a,0.5mmol,70.5mg)、苯甲醇(0.75mmol,72mg)溶于二氧六环(5ml)中，加入KOH(1.5mmol,84mg)，室温搅拌反应过夜，经TLC检测反应完全后减压除去溶剂二氧六环，加适量水和乙酸乙酯，经萃取、干燥、浓缩后柱层析得中间体13b。接着将13b(0.45mmol,103.5mg)溶于乙醇(3ml)和水(1.5ml)的混合溶剂中，加入NH4Cl(0.225mmol,12mg)和Fe(2.25mmol,126mg)，于80℃反应30min，经TLC检测反应完全后过滤除去不溶物质，加入NaHCO3调节PH至碱性，再减压除去乙醇，水层经乙酸乙酯萃取，浓缩，柱层析得到中间体13c。利用13c按照实施例2化合物2类似的合成方法，合成目标化合物13，四步总产率为41％。化合物13的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.10(s,1H),7.49(d,J＝6.8Hz,2H),7.46-7.44(m,2H),7.41-7.38(m,2H),7.35-7.31(m,1H),7.00-6.95(m,3H),5.07(s,2H),4.01(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.5,154.8,137.6,132.9,128.9,128.2,128.1,121.1,116.5,115.3,69.8,35.8,23.8ppm。实施例14、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯氧甲基)苯基)乙酰胺(化合物14)的合成将苯酚(14a，1mmol,94mg)加到反应瓶中，用2mlDMF溶解，接着加入碳酸钾(5mmol，690mg)后将对硝基苄溴(1mmol,216mg)溶解在2mlDMF中并滴加到反应瓶中。室温搅拌反应2小时。经TLC检测反应完全后，经过萃取减压蒸馏得到化合物14b。然后将化合物14b(1mmol,229mg)溶解在乙醇和水(10ml,乙醇：水＝2：1)的混合溶剂后，加入铁粉(5mmol,280mg)和氯化铵(1mmol,53.5mg)于80℃搅拌回流反应0.5小时，TLC检测反应完全后，用碳酸氢钠调节pH至碱性，抽滤后减压蒸馏除去乙醇，再加少量水，用乙酸乙酯萃取后经过柱层析得到化合物14c。利用14c按照实施例2目标化合物2的合成方法，合成化合物14，四步总产率为24％。化合物14的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.30(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.2Hz,2H),7.01-6.98(m,2H),6.94(t,J＝7.2Hz,1H),5.04(s,2H),4.05(s,2H),2.34(s,6H)ppm.实施例15、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((苯氨基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物15)的合成将对硝基苯甲醛(15a,2mmol,302.2mg)和苯胺(2.2mmol,201μl)溶于DCM(16ml)中，接着将2，6-二甲基-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸乙酯(汉斯酯，2.8mmol,708.4mg)加入，最后滴入三氟乙酸(1mmol,74.6μl)并置于45℃回流反应过夜。经TLC检测反应完全后减压除去多余的溶剂，柱层析得到还原胺化产物15b。将还原胺化产物15b(1.89mmol,427mg)溶于乙醇(10ml)和水(5ml)的混合溶剂后加入铁粉(9.44mmol,528.4mg)和NH4Cl(0.945mmol,50.6mg)至反应中并置于80℃回流反应30min，经TLC检测反应完全后过滤除去不溶物质，加入NaHCO3调节PH至碱性，减压除去乙醇，水层经乙酸乙酯萃取，浓缩，柱层析后得化合物15c.利用15c按照实施例2目标化合物2的合成方法，合成化合物15，四步总产率37％。化合物15的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.19(s,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(t,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.56(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(t,J＝7.2Hz,1H),6.14(t,J＝6.0Hz,1H),4.20(d,J＝6.0Hz,2H),4.03(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,149.1,138.0,135.6,129.2,128.0,119.6,116.5,116.2,112.7,46.6,35.9,23.8ppm。实施例16、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(((3-(三氟甲基)苯基)氨基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物16)的合成利用3-三氟甲基苯胺替换苯胺，按照实施例15化合物15的合成方法，合成目标化合物16，四步总产率38％。化合物16的1HNMR和13CNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.21(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),6.84-6.79(m,3H),6.69(t,J＝6.0Hz,1H),4.26(d,J＝5.6Hz,2H),4.03(s,2H),2.33(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.9,149.6,138.2,134.7,130.2,128.1,125.4,123.6,119.7,116.5,116.0,112.0,108.6,46.3,35.9,23.8ppm。实施例17、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯硫基)苯基)乙酰胺(化合物17)的合成向反应瓶中加入对碘苯胺(17a,2mmol,438mg)、CuSO4.5H2O(0.1mmol,25mg)、KOH(10mmol,561mg)和DMSO(二甲基亚砜，4ml)/H2O(0.4ml),然后加入1,2-乙二硫醇(2mmol,180μl)并于100-110℃反应8h，接着将反应液冷却至室温后将碘苯(2.6mmol,530.4mg)溶于DMF(2ml)中后加入到反应中，于120℃继续反应18h。经TLC检测反应完全后反应冷却至室温，加入水和乙酸乙酯，水层经乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，浓缩，柱层析得中间体17b。利用17b按照实施例2化合物2的合成方法，合成目标化合物17，三步总产率48％。化合物17的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.40(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.6Hz,2H),7.26-7.20(m,3H),6.98(s,1H),4.06(s,2H),2.33(s,6H)ppm。实施例18、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯亚磺酰基)苯基)乙酰胺(化合物18)的合成利用化合物17b按照实施例3目标化合物3的合成方法，经m-CPBA氧化生成化合物18a。然后，利用化合物18a按照实施例2化合物2的合成方法，合成目标化合物18，三步总产率为41％。化合物18的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.46(s,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(t,J＝7.6Hz,2H),7.27-7.22(m,3H),6.97(s,1H),4.09(s,2H),2.34(s,6H)ppm。实施例19、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯磺酰基)苯基)乙酰胺(化合物19)的合成将化合物17b按照实施例4目标化合物4的合成方法，经m-CPBA氧化生成化合物19a。利用化合物19a按照实施例2化合物2的合成方法，合成目标化合物19，三步总产率为41％。化合物19的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.46(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.27-7.20(m,3H),6.97(s,1H),4.08(s,2H),2.33(s,6H)ppm。实施例20、2-((4-甲基-6-羟基-1,6-二氢嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯胺基)苯基)乙酰胺(化合物20)的合成利用中间体1b和甲基硫脲嘧啶作为原料，按照实施例1化合物1的合成方法，合成目标化化合物20，产率65％。化合物20的1HNMR数据如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.56(brs,1H),10.16(s,1H),8.20(s,1H),7.46(s,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,2H),7.15(t,J＝8.0Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(t,J＝7.6Hz,1H),6.75(dd,J＝1.6Hz,J＝7.6Hz,2H),6.01(brs,1H),4.06(s,2H),2.15(s,3H)ppm,。实施例21、本发明化合物对体外SIRT2蛋白的抑制活性测试方法如下：(1)实验材料：购买于美国BPSBioscience公司的SIRT2酶(产品编号：50013)；美国PerkinElmer公司的384孔板(产品编号：6007279)；Sigma公司的阳性对照产品Suramin(产品编号：S2671)。(2)实验方法：首先，制备三羟甲氨基甲烷缓冲液；然后，将所有受试化合物及阳性对照化合物Suramin溶解于100％的DMSO中配制成不同浓度的测试溶液并转移至测试孔板中；随后将SIRT2酶溶于缓冲溶液中配制酶溶液；同时利用烟酰胺腺嘌呤核苷酸(NAD+)和乙酰化的底物肽溶解于缓冲溶液中配制成底物缓冲溶液；接着在测试孔板中分别加入10μL酶溶液或空白对照缓冲溶液后，将测试孔板置于室温孵化15分钟；再向每孔中加入10μL底物缓冲液反应4小时；反应完毕后向每孔中加入胰蛋白酶溶液反应1.5小时；最后使用SynergyMX酶标仪在激发光为360nM和460nM发射光波长处测试以上反应液的发光强度，从而确定化合物对SIRT2的抑制活性。(3)实验结果：通过以上实验方法，测试了本发明化合物针对SIRT2的抑制活性；具体的化合物在5μM、50μM浓度下的抑制活性及部分化合物对SIRT2的半数抑制有效浓度(IC50)见表1，其中“-”表示未测.。表1、本发明化合物对SIRT2的抑制活性(Inh％)上述结果表明，本发明化合物对SIRT2具有良好的抑制活性，可以用于制备沉默信息调节因子2相关蛋白的抑制剂。实施例21、本发明化合物对多种肿瘤细胞株的增殖的抑制效果测试方法如下：(1)实验材料：主要试剂：RPMI-1640、胎牛血清、胰酶等购自GibcoBRL公司(InvitrogenCorporation，USA)，IMDM培养基购自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)。四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)为Sigma公司(USA)产品。人肝癌细胞系(HUH7),人肝癌细胞系(SMMC7721)，肝母细胞瘤细胞系(HepG2)，人乳腺癌细胞系(MCF-7)，人肺癌细胞系(NCI-H460),人肺癌细胞系(A549)，人胰腺癌细胞系(MIAPACA)，人早幼粒白血病细胞系(HL60),人慢性髓系白血病细胞系(K562),人前列腺癌细胞(DU-145)等均购于美国ATCC(Americantypeculturecollection)，由本实验室保存。(2)实验方法：用完全细胞培养液调整细胞浓度为1～2×104个/mL的细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl细胞悬液，培养过夜。次日，吸弃上清(悬浮细胞离心后吸取上清)，然后分别用梯度浓度的受试化合物处理细胞。同时设不含药物的阴性对照组和等体积的溶剂对照组，DMSO浓度为0.1％，每个剂量组设3个复孔，在37℃，5％CO2条件下培养。72小时后，每孔加入浓度为5mg/mL的MTT试剂20μl，再培养2-4h后，弃上清，每孔再加入DMSO150μL，振荡混匀15min，用酶标仪(λ＝570nm)测定吸光度(A)值(A值与活细胞数成正比)，取其平均值。相对细胞增殖抑制率＝(阴性对照组A570-实验组A570)/阴性对照组A570×100％。。实验至少重复3次。实验数据用均数表示，数据统计资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。以下各化合物对细胞增殖抑制作用均用IC50或抑制率表示。(3)实验结果：采用以上方法，测试了本发明化合物17对人肝癌细胞系(HUH7),人肝癌细胞系(SMMC7721)，肝母细胞瘤细胞系(HepG2),人乳腺癌细胞系(MCF-7)，人肺癌细胞系(NCI-H460),人肺癌细胞系(A549),人胰腺癌细胞系(MIAPACA)，人早幼粒白血病细胞系(HL60),人慢性髓系白血病细胞系(K562),人前列腺癌细胞(DU-145)等进行了增殖抑制活性测试，具体的为化合物17在50μM、100μM浓度下的抑制活性。表2、本发明化合物17对不同肿瘤细胞株的增殖抑制活性化合物17Inh％@50uMInh％@100uMHUH78088SMMC77215067HepG23036MCF-74866NCI-H4604150A5493246MIAPACA3136HL603290K5621828DU-1452846上述结果表明，本发明化合物对肝癌、肝母细胞瘤、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌和白血病的细胞增殖，具有很好的抑制作用，可以用于制备治疗和/或预防肿瘤的药物。综上所述，本发明式Ⅰ所示的新化合物，不仅对SIRT2具有良好的抑制活性，而且对肿瘤具有很好的抑制作用，具有很好的药用价值，为临床用药提供了一种新的潜在选择；同时，本发明新化合物的制备方法简便，反应条件温和，便于操作和控制，能耗小，产率高，成本低，可适合产业化生产。当前第1页1 2 3