一种检测伪狂犬病病毒的核酸组合及其应用、试剂盒以及方法与流程

文档序号:11145955阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测伪狂犬病病毒的核酸组合,其特征在于,其包括第一引物对和与所述第一引物对相对应的第一探针,所述第一引物对包括碱基序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物,所述第一探针的碱基序列如SEQ ID NO.3所示,所述第一探针的5’端的荧光报告基团为HEX或VIC,所述第一探针的3’端的淬灭基团为BHQ或TAMRA。

2.根据权利要求1所述的检测伪狂犬病病毒的核酸组合,其特征在于,所述核酸组合还包括:第二引物对和与所述第二引物对相对应的第二探针,所述第二引物对包括碱基序列分别如SEQ ID NO.4-5所示的引物,所述第二探针的碱基序列如SEQ ID NO.6所示,所述第二探针的5’端的荧光报告基团为FAM,所述第二探针的3’端的淬灭基团为BHQ或TAMRA。

3.权利要求1或2所述的检测伪狂犬病病毒的核酸组合在检测伪狂犬病病毒中的应用。

4.一种检测伪狂犬病病毒的试剂盒,其特征在于,其包括权利要求1或2所述的检测伪狂犬病病毒的核酸组合。

5.根据权利要求4所述的检测伪狂犬病病毒的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTP、Taq DNA聚合酶中的一种或多种。

6.一种检测伪狂犬病病毒的方法,其特征在于,其包括:

往PCR体系中加入第一引物对和与所述第一引物对相对应的第一探针,所述PCR体系包括PCR反应混合液和待测样本;

将所述PCR体系形成微滴,并进行微滴数字PCR;

其中,所述第一引物对包括碱基序列分别如SEQ ID NO.1-2所示的引物,所述第一探针的碱基序列如SEQ ID NO.3所示,所述第一探针的5’端的荧光报告基团为HEX或VIC,所述第一探针的3’端的淬灭基团为BHQ或TAMRA。

7.根据权利要求6所述的检测伪狂犬病病毒的方法,其特征在于,在所述PCR体系还加入第二引物对和与所述第二引物对相对应的第二探针,所述第二引物对包括碱基序列分别如SEQ ID NO.4-5所示,所述第二探针的碱基序列如SEQ ID NO.6所示,所述第二探针的5’端的荧光报告基团为FAM,所述第二探针的3’端的淬灭基团为BHQ或TAMRA。

8.根据权利要求6所述的检测伪狂犬病病毒的方法,其特征在于,采用微滴生成油对所述PCR体系进行微滴处理形成所述微滴,所述微滴生成油与所述PCR体系的体积比为7.8~7.2:2。

9.根据权利要求6所述的检测伪狂犬病病毒的方法,其特征在于,所述微滴的数量为1~2×104个。

10.根据权利要求6所述的检测伪狂犬病病毒的方法,其特征在于,进行所述微滴数字PCR的反应条件为:95℃预变性10min;95℃变性30s,50~60℃退火1min,40个循环;98℃10min,4℃停止反应。

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