一种多孔磁性铜离子金属螯合载体及其制备方法、利用载体固定化木瓜酶的方法及其应用与流程

文档序号:12411751阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种多孔磁性铜离子金属螯合载体,其特征在于,所述载体为以壳聚糖粉末为原料,Fe3O4作为磁性材料,SiO2为致孔剂,环氧氯丙烷为交联剂进行反应,合成多孔磁性壳聚糖微球;多孔磁性壳聚糖微球以环氧氯丙烷为活化剂,以亚氨基二乙酸为螯合配基,再与过渡态的金属铜离子进行螯合,制备的得到多孔磁性铜离子金属螯合载体。

2.一种多孔磁性铜离子金属螯合载体的制备方法,其特征在于,所述方法以壳聚糖粉末为原料,Fe3O4作为磁性材料,SiO2为致孔剂,环氧氯丙烷为交联剂进行反应,合成多孔磁性壳聚糖微球;然后,以环氧氯丙烷为活化剂,以亚氨基二乙酸为螯合配基,再与过渡态的金属铜离子进行螯合,制备得到多孔磁性铜离子金属螯合载体。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:

步骤a,多孔磁性壳聚糖微球载体的制备,向壳聚糖粉末中,加入乙酸溶液,室温下缓慢搅拌至壳聚糖完全溶解后;加入纳米Fe3O4,搅拌至均匀,加入致孔剂SiO2,搅拌几分钟后,加入液体石蜡脱拌后升温至50℃,滴加Span80作为乳化剂,乳化至形成壳聚糖液滴,随后升温70℃至温度恒定,调节溶液pH值为9-11,保持为碱性,缓慢的逐滴滴加环氧氯丙烷进行反应;反应后对产物进行洗涤,直至pH值为中性,然后加入NaOH的溶液,80℃的水浴锅加热2h,停止加热后,反复使用蒸馏水进行洗涤,再用稀盐酸洗涤一次,最后蒸馏水洗至中性,得到多孔磁性壳聚糖微球载体,烘干后备用;

步骤b,多孔磁性壳聚糖微球载体的活化,向步骤a中制得的多孔磁性壳聚糖微球中,加入NaOH溶液和环氧氯丙烷,以及二甲亚砜和硼氢化钠,在40℃恒温反应4h;活化反应后,用去离子水洗涤,去除未反应的环氧氯丙烷和氢氧化钠;

步骤c,多孔磁性铜离子金属螯合载体的制备,向活化好的多孔磁性壳聚糖微球载体中,加入Na2CO3溶液,再加入亚氨基二乙酸,40℃恒温反应10h;然后将反应产物分散于CuCl2溶液中,25℃恒温反应24h,得到多孔磁性铜离子金属螯合载体。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤a中乙酸溶液的质量分数为4%。

5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤b中二甲基亚砜的体积分数为6%。

6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤b中氢氧化钠溶液的浓度为0.6mol/L。

7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤b中环氧氯丙烷的体积分数为45%。

8.一种利用如权利要求1所述的多孔磁性铜离子金属螯合载体固定化木瓜酶的方法,其特征在于,向多孔磁性铜离子金属螯合载体中,加入木瓜蛋白酶溶液,室温下振荡3h,用PBS洗涤数次至上清中检测不到酶活,得到固定化的木瓜蛋白酶。

9.一种利用权利要求8所述方法制得的固定化木瓜酶在大豆分离蛋白水解中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,将大豆分离蛋白溶于水中,形成底物浓度为4%的水分散液,在80℃水浴锅中保温20min。迅速冷却至酶解温度,搅拌30min,调节pH至8,按底物比例加入6000-9000U/g的固定化木瓜蛋白酶,缓慢搅拌反应至少4h。

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