一种DNA聚合酶促进剂的制备方法及其应用与流程

文档序号:12411656阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种DNA聚合酶促进剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:首先制备热稳定性尿嘧啶DNA糖苷酶UDG、热稳定性次黄嘌呤DNA糖苷酶AlkA、热稳定性内切核酸酶IV共计3种蛋白;最后将上述3种蛋白混合在一起,并溶解在储存液(20 mM Tris-HCl pH8.0,1 mM DTT,100 mM KCl,50%甘油)中,保存于-20度或-80度,制备成DNA聚合酶促进剂。

2.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶促进剂的制备方法,其特征在于,所述热稳定性尿嘧啶DNA糖苷酶UDG的制备方法包括以下步骤:首先将UDG基因克隆到原核表达载体中,构建UDG的重组表达载体;然后将UDG重组表达载体转化到原核表达宿主中表达UDG蛋白;最后从原核表达宿主的细胞裂解液中纯化UDG蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶促进剂的制备方法,其特征在于,所述热稳定性次黄嘌呤DNA糖苷酶AlkA的制备方法包括以下步骤:首先将AlkA基因克隆到原核表达载体中,构建AlkA的重组表达载体;然后将AlkA重组表达载体转化到原核表达宿主中表达AlkA蛋白;最后从原核表达宿主的细胞裂解液中纯化AlkA蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶促进剂的制备方法,其特征在于,所述热稳定性内切核酸酶IV的制备方法包括以下步骤:首先将内切核酸酶IV基因克隆到原核表达载体中,构建内切核酸酶IV的重组表达载体;然后将内切核酸酶IV重组表达载体转化到原核表达宿主中表达内切核酸酶IV蛋白;最后从原核表达宿主的细胞裂解液中纯化内切核酸酶IV蛋白。

5.根据权利要求2或3或4所述的一种DNA聚合酶促进剂的制备方法,其特征在于,所述的原核表达宿主为大肠杆菌。

6.一种权利要求1所述的一种DNA聚合酶促进剂的制备方法中制备的DNA聚合酶促进剂的应用,其特征在于,DNA聚合酶促进剂应用于B型DNA聚合酶催化的PCR,促进PCR产量;DNA聚合酶促进剂应用于A型DNA聚合酶催化的PCR,提高PCR忠实度。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,在PCR中DNA聚合酶促进剂的工作浓度为50-500纳克/50微升反应。

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