一种灰霉病菌实验室材料的常备形态及其制备与应用方法与流程

文档序号:11144763阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种灰霉病菌实验室材料的常备形态,其特征在于,用灰霉病菌的分生孢子作日常工作的常备形态;分生孢子纯净无污染;分生孢子存放于无菌水中;分生孢子暂停生长发育,但转到培养基上能马上恢复正常生长发育。

2.如权利要求1所述的一种灰霉病菌实验室材料的常备形态的制备与应用方法,其特征在于,制备和应用方法步骤如下:

1)分生孢子的制备培养:用三角瓶作培养器具,装盛马铃薯葡萄糖培养基作产孢培养基,该培养基的组分配比为:马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL;将灰霉病菌的菌丝体移植入三角瓶内的产孢培养基上,在合适的温度下培养,直到培养基面上形成菌落和分生孢子;

2)灰霉病菌材料常备形态的制备:取无菌水注入步骤1)培养获得的产孢菌落上,轻轻洗脱菌落上的孢子,获得含有菌丝碎段的孢子液;用灭菌纱布过滤去除该孢子液中的菌丝碎段;将该孢子液进行离心沉淀,倒掉上清液,除去孢子液中混杂的菌体代谢产物和培养基组分;剩下的沉淀为纯净的分生孢子;以该纯净分生孢子作为灰霉病菌材料的常备形态;用无菌水将沉淀孢子悬浮,搅动使孢子充分分散,获得灰霉病菌材料的常备孢子液;

3)灰霉病菌材料常备形态的孢子含量标定:用无菌水将步骤2)获得的常备孢子液的孢子浓度,调配为106孢子/mL;

4)灰霉病菌材料常备形态的日常存放:在无菌条件下,将步骤3)标定的常备孢子液分装到有盖密闭的灭菌容器内,并转移到20℃的暗环境中存放备用;

5)灰霉病菌材料常备形态的应用:将步骤4)存放的灰霉病菌材料常备孢子液转到超净工作台,振荡装存常备孢子液的容器,使分生孢子充分悬浮和分散;开盖后用移液器定量吸取孢子液,移植到相关的工作环节或实验程序中;吸液移植操作完毕后回盖密封,将剩余的常备孢子液转回步骤4)的存放处存放。

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