1.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针,其特征在于,所述探针为EB病毒BamHI-W片段经过标记得到;
所述BamHI-W片段的核苷酸序列为EBV基因组13232-16189所示。
2.根据权利要求1所述的FISH检测探针,其特征在于,所述标记采用Biotin-dUTP标记。
3.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒FISH检测探针的制备方法,其特征在于,包括:
培养EB病毒并提取EB病毒DNA作为模板,PCR扩增EB病毒BamHI-W片段,对所述BamHI-W片段进行标记得到标记产物;纯化所述标记产物后得到EB病毒FISH检测探针。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,培养EB病毒所用的宿主细胞为P3hr-1细胞。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,扩增EB病毒BamHI-W片段所用的上游引物核苷酸序列为:
5’-CTTCTCTCTGTCCCCCTGCTCCTCT-3’;
下游引物核苷酸序列为:
5’-CTAGGGTCCCTTCTGGGGGACATCCT-3’。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,在所述扩增的反应程序中,Tm值为53~57℃,反应循环次数为30~34次。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,对所述BamHI-W片段进行标记的方法包括:
1)、将BamHI-W片段DNA加入水中98~100℃变性7~13分钟;
2)、按照1g BamHI-W片段DNA:3.5~4.5μL Biotin-High prime的比例加入所述Biotin-High prime,瞬时离心,36~38℃水浴8~16h;
3)、63~67℃加热8~12分钟终止标记得到标记产物。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,纯化所述标记产物的操作包括:
a)、按体积份数计,将17~23份标记产物、8~12份7.5M的醋酸铵、0.6~1.4份鱼精DNA、70~110份冰冷的无水乙醇混合并于-75~85℃沉淀60~70min;
b)、0~6℃,11000~13000rpm离心15~25min后弃上清;
c)、加入73~77%乙醇洗涤1~2次,0~6℃,11000~13000rpm离心15~25min;
d)、弃上清,风干沉淀,用FISH杂交液重悬。
9.一种用于检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒的试剂盒,其包含权利要求1或2所述的FISH探针。
10.权利要求1或2所述的FISH探针在制备检测传染性单核细胞增多症患者EB病毒的试剂或试剂盒中的应用。