水稻基因OsDF1及抗病调控功能的应用的制作方法

文档序号:12056431阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一个水稻抗病调控基因,命名为Oryza sativa defense-related 1,简称OsDF1,其核苷酸序列如SEQ ID:1所示,该基因的开放阅读框长1512bp,编码的蛋白由503个氨基酸组成,其序列如SEQ ID:2所示,该基因编码产物不包含任何已知功能的结构域。

2.根据权利要求1所述的一种水稻抗病调控基因OsDF1在通过创制转基因水稻来获取抗病性得到改变的水稻材料中的应用,其特征在于,在通过创制超表达OsDF1的转基因水稻纯合系来获得降低对水稻细菌性病害抗性的水稻材料中的应用;以及在通过创制OsDF1-RNAi的转基因水稻纯合系来获得增高对水稻细菌性病害广谱抗性的水稻材料中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,通过以下步骤实现获得降低对水稻细菌性病害抗性的水稻材料中的应用:

(1)OsDF1基因超表达结构的构建和获取

将OsDF1基因ORF克隆入一个植物表达载体,使其受强启动子的驱使表达;

(2)转化OsDF1基因超表达结构的农杆菌的获取

将构建好的OsDF1基因超表达结构通过电击方法转化对水稻具有强侵染能力的农杆菌菌株;

(3)超表达OsDF1的转基因水稻创制和获取

通过农杆菌介导法将OsDF1基因超表达结构导入水稻,获取转OsDF1基因超表达结构的水稻;

(4)超表达OsDF1的转基因水稻纯合系的获取

分别以抗生素抗性和OsDF1基因表达为检测指标,检测转基因植株后代的性状分离情况,获取后代性状不再分离的、并能稳定遗传的超表达OsDF1的转基因水稻纯合系;

(5)对细菌病害抗性下降的超表达OsDF1的转基因水稻纯合系筛选鉴定和获取

以超表达OsDF1的转基因水稻纯合系为材料,检测分析对各类水稻细菌病害的抗性,获取抗细菌病害能力下降的转OsDF1基因水稻。

4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,通过以下步骤实现获得增高对水稻细菌性病害广谱抗性的水稻材料中的应用:

(1)OsDF1基因RNAi结构的构建和获取

将OsDF1基因的一个特异性序列片段克隆入中间表达载体pENTR,再将重组结构pENTR-OsDF1与RNAi载体(pANDA载体)进行LR酶反应,获取RNAi结构pANDA-OsDF1;

(2)转化OsDF1基因RNAi结构的农杆菌的获取

将OsDF1基因RNAi结构(pANDA-OsDF1)通过电击方法转化对水稻具有强侵染能力的农杆菌菌株;

(3)转OsDF1基因RNAi结构水稻的创制和获取

通过农杆菌介导法将OsDF1基因RNAi结构导入水稻,获取转OsDF1基因RNAi结构的水稻;

(4)转OsDF1基因RNAi结构水稻纯合系的获取

分别以抗生素抗性和OsDF1基因表达为检测指标,检测转基因植株后代的性状分离情况,获取后代性状不再分离的、并能稳定遗传的转OsDF1基因RNAi结构的水稻纯合系;

(5)对细菌病害抗性增强的转OsDF1基因RNAi结构水稻纯合系的筛选鉴定和获取

以转OsDF1基因RNAi结构(pANDA-OsDF1)的水稻纯合系为材料,检测分析对各类细菌病原物所致病害的抗性,获取抗细菌病害能力增强的OsDF1基因RNAi水稻。

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