本发明涉及一种冬凌草甲素席夫碱衍生物及其制备方法和用途，属于药物领域。
背景技术：
冬凌草甲素是一种贝壳杉烯二萜类天然有机化合物，具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎、抗肿瘤等功效。但冬凌草甲素不溶于水，其制剂主要是片剂、糖浆剂和注射液。片剂和糖浆剂口服后，血药浓度较低，抗肿瘤效果差。注射液主要采用有机溶剂加表面活性剂的方法来增加冬凌草甲素的溶解度，但长期使用，会引发大量毒副作用。本发明将冬凌草甲素的羰基用赖氨酸及含赖氨酸的肽以形成亚胺键的方式修饰，可以提高冬凌草甲素的溶解性，减少其毒性。冬凌草甲素席夫碱衍生物在体内经代谢可以释放出冬凌草甲素起到抗癌作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种冬凌草甲素席夫碱衍生物，包括其立体异构体和互变异构体。其具有抗癌的作用。
本发明的另一目的在于提供上述冬凌草甲素席夫碱衍生物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述冬凌草甲素席夫碱衍生物包括其立体异构体和互变异构体的用途。
以下对本发明进行详细描述。
本发明的含有冬凌草甲素席夫碱衍生物，包括其立体异构体和互变异构体，结构如下所示：
式中，R为各种氨基酸、肽。
本发明的冬凌草甲素席夫碱衍生物包括其立体异构体和互变异构体。
本发明的冬凌草甲素席夫碱衍生物包括其立体异构体和互变异构体。部分化合物如下：
冬凌草甲素赖氨酸席夫碱；
冬凌草甲素赖氨酸-丙氨酸席夫碱；
冬凌草甲素赖氨酸-苯丙氨酸席夫碱；
冬凌草甲素赖氨酸-甘氨酸-谷氨酸席夫碱；
冬凌草甲素赖氨酸-脯氨酸-天冬酰胺席夫碱；
冬凌草甲素赖氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-组氨酸席夫碱。
本发明还提供了上述冬凌草甲素席夫碱衍生物包括其立体异构体和互变异构体的制备方法，包括以下步骤：
（1）Fmoc-Lys (Dde)-OCH3溶于含2%水合肼的二氯甲烷中，搅拌30min，饱和食盐水洗涤，得脱Dde产物的二氯甲烷溶液。再加入冬凌草甲素，回流12h，冷却，过滤，得产物。
（2）步骤（1）所得产物加入20%哌啶DMF溶液中，室温搅拌3h，得脱Fmoc产物的DMF溶液，再加入2mol/LNaOH溶液皂化，稀盐酸调pH5-7，减压蒸干，纯化，制得冬凌草甲素席夫碱衍生物。
本发明的冬凌草甲素席夫碱衍生物包括其立体异构体和互变异构体有抗癌活性，还具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎等的作用。
通过以下实施例进一步举例说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。
具体实施方式
实施例1
冬凌草甲素赖氨酸席夫碱（1）的制备
化合物（1）的结构如下式所示：
取546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3加入10mL含2%水合肼的CH2Cl2中，搅拌30min，饱和食盐水洗涤，加入等摩尔的冬凌草甲素，回流12h，冷却，过滤，浓缩，得到固体，收率87%。
所得固体加入20%哌啶DMF溶液中，室温搅拌3h，再加入2mol/LNaOH溶液水解，稀盐酸调pH5-7，减压蒸干，纯化，制得化合物（1），收率78%。MS（ESI) m/z:537.3 [M]+。
实施例2
冬凌草甲素赖氨酸-丙氨酸席夫碱（2）的制备
化合物（2）的结构如下式所示：
参照实施例1，取717mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-Ala-OCH3代替546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3，制得化合物（2），收率76%。MS（ESI) m/z:608.4 [M]+。
实施例3
冬凌草甲素赖氨酸-苯丙氨酸席夫碱（3）的制备
化合物（3）的结构如下式所示：
参照实施例1，取793mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-Phe-OCH3代替546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3，制得化合物（3），收率77%。MS（ESI) m/z:684.4 [M]+。
实施例4
冬凌草甲素赖氨酸-甘氨酸-谷氨酸席夫碱（4）的制备
化合物（4）的结构如下式所示：
参照实施例1，取832mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-gly-glu-OCH3代替546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3，制得化合物（3），收率72%。MS（ESI) m/z:723.4 [M]+。
实施例5
冬凌草甲素赖氨酸-脯氨酸-天冬酰胺席夫碱（5）的制备
化合物（5）的结构如下式所示：
参照实施例1，取875mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-Pro-Asp-OCH3代替546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3，制得化合物（3），收率70%。MS（ESI) m/z:748.5 [M]+。
实施例6
冬凌草甲素赖氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-组氨酸席夫碱（6）的制备
化合物（6）的结构如下式所示：
参照实施例1，取1035mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-Pro-Asp-Ser-His-OCH3代替546mg (1mmol)L-Fmoc-Lys (Dde)-OCH3，制得化合物（3），收率69%。MS（ESI) m/z:972.5 [M]+。
实施例7
冬凌草甲素席夫碱衍生物对小鼠腹水型S180肿瘤抑制活性
将接种7天，生长良好的荷S180肿瘤细胞小鼠脱椎处死，于干净工作台腹部碘酒消毒，酒精脱碘后抽取腹水瘤，用生理盐水以l：4(腹水：生理盐水)的比例稀释为细胞悬液（细胞密度2×109/L）。每只小鼠右腋窝碘酒消毒后皮下接种该肿瘤细胞液0.2ml。于接种次日将小鼠随机分为阴性对照组、冬凌草甲素和5-氟尿嘧啶组阳性对照组和冬凌草甲素席夫碱衍生物组。各组均连续灌胃给药10天。于末次给药后次日将小鼠脱椎处死，剥取瘤组织，称瘤重及体重(除瘤后)。将实验结果进行统计学处理，计算抑瘤率（表1）。
抑癌率(％)=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。