本发明涉及微生物水产抑菌制剂，具体的说是一种链霉菌nhf165菌株及其应用。
背景技术：
由于集约化养殖使水产品的重大病害频繁发生，国内大量养殖户使用化学抑菌剂，使化学抑菌剂残留严重超标，随之也带来了环境污染、人畜中毒二次污染及致畸、致癌等问题。水产病原菌对化学抑菌剂抗药性也越来越明显，传统水产养殖产业面临着巨大的风险与挑战。而与传统的化学合成水产抑菌剂相比，微生物源制剂具有对人畜和非靶标生物安全，环境兼容性好，不易产生抗性等优点。
链霉菌(streptomyces)是一类广泛分布的革兰氏阳性菌，能产生在医疗、农业、食品、化学、环保等领域具有重要意义的天然产物。应用其防治水产病原菌害具有对人畜无害，环境友好，无农药残留等优点，符合绿色水产品发展的趋势。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种链霉菌nhf165菌株及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种链霉菌nhf165菌株，链霉菌nhf165(streptomycescacaoi)保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：cgmcc13509，保藏时间为2016年12月28日。
将所述链霉菌于发酵培养基中静止或摇床下发酵培养7-20天，发酵产物待用。
一种链霉菌nhf165菌株的应用，所述链霉菌nhf165(streptomycescacaoi)在用于制备水产抑菌制剂中的应用。
将所述链霉菌于发酵培养基中静止或摇床下发酵培养7-20天，发酵产物待用。
所述发酵培养基比例为稷粉20g，葡萄糖10g，药媒20g，mops20g，天然海水1000ml，ph7.0-ph7.2。
本发明所具有的优点：
本发明所述的链霉菌nhf165菌株分离自南中国海深海海泥样品，通过测定其16srrnagene序列，并与genbank数据库中已知菌株相应序列信息比较，其与菌株streptomycescacaoi(accessionnumber：kp970679)的相似度为99％。该菌株发酵产物具有较好杀菌活性，可用于制备水产抑菌制剂，具有生产工艺简单、周期短、产品成本低及环境友好等特点，具有较好开发应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例提的链霉菌nhf165在高天培养基的生长形态图及电镜图.
具体实施方式
为阐明对本发明特征的理解，下面结合一些非限定性的实施实例对本发明做进一步阐述。
本发明所述链霉菌(streptomycescacaoi)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：cgmcc13509，保藏时间为：2016年12月28日；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例1：海洋来源链霉菌(streptomycescacaoi)nhf165菌株分类。
1)菌种培养
按照微生物的常规培养方法，挑取少量冻存于甘油管的链霉菌(streptomycescacaoi)nhf165，接种于高天培养基平板表面，28℃培养7天，初期菌落呈平茸状，后期形成乳白色气生菌丝。
2)菌种初步鉴定
按照文献方法yangn等(currmicrobiol，2016，72(5)，1-6)，通过克隆链霉菌核糖体16srrna基因并测序，并与genbank数据库中已知菌株相应序列信息比较，其与菌株streptomycescacaoi(accessionnumber：kp970679)的相似度为99％。
序列信息如下(accessionnumber：ku500370)：
catgcaagtcgaacgatgaaccggtttcggccggggattagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgccctgcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatatgaccaccggccgcatggtctggtggtggaaagctccggcggtgcaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtggggtgaatggcctaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgcaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgcgagtgacggtacctgcagaagaagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggtgcgagcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcctgtcgcgtcggatgtgaaagcccggggcttaaccccgggtctgcattcgatacgggcaggctagagttcggcaggggagattggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctgggccgatactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgttgggcactaggtgtgggcggcattccacgtcgtccgtgccgcagctaacgcattaagtgccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatacaccggaaaactctggagacagggtccccctttgggtcggtgtacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctgtgttgccagcatgcctttcggggtgatggggactcacgggagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgccccttatgtcttgggctgcacacgtgctacaatggccggtacaatgagctgcgatgccgtgaggtggagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattggggtctgcaactcgaccccatgaagtcggagtcgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcccaaccc。
实施例2：链霉菌(streptomycescacaoi)nhf165菌株的发酵培养。
1)发酵培养
菌种培养：按照微生物的常规培养方法，挑取少量冻存于甘油管的链霉菌(streptomycescacaoi)nhf165菌丝球，接种于高天培养基平板表面，高天培养基成分为：可溶性淀粉20g,l-精氨酸0.5g,硝酸钾1g,磷酸氢二钾0.5g,氯化钠0.5g,硫酸镁0.5g,蒸馏水1000ml,ph7.5。28℃培养7天，作为规模发酵培养的菌种，待用。
切取上述高天培养基平板表面的菌种适量，接种至已灭菌的、发酵培养基的锥形瓶中，28℃摇床160rpm培养10天，发酵液待用。
所述发酵培养基为稷粉5g/瓶，葡萄糖2.5g/瓶，药媒5g/瓶，mops5g/瓶，天然海水250ml/瓶，ph7.0-ph7.2。
2)发酵产物分离与纯化将上述链霉菌经发酵培养基发酵培养的产物用乙酸乙酯超声提取3次，合并提取液，减压蒸馏得浸膏。
将上述获得浸膏以二氯甲烷-甲醇(体积比2:1)为洗脱剂进行凝胶层析分离，收集黄绿色的洗脱组分。
实施例3：抑制水产病原鳗弧菌活性试验
鳗弧菌(vibrioanguillarum)，分类上属于细菌界，原生动物门，γ-变形菌纲，弧菌目，弧菌科，弧菌属。弧菌引起的弧菌病是水产养殖业危害最为严重的疾病之一，以鳗弧菌作为抗水产病原菌筛选模型进行水产病原抑菌制剂研发，国内外已经有相关报道，fransi等[jfishdis，2011,34,643–661]详细介绍了鳗弧菌引起的水产养殖业鱼虾疾病的致病因子、诊断方法、预防及治疗措施；youjl等[worldjmicrobbiot,2005,21,679–682]以弧菌作为指示菌株，快速筛选到具有抑制弧菌活性的海洋放线菌；augustined等[aquacres,2016,47,2951–2960]介绍了海洋链霉菌streptomycesrubrolavendulae在与弧菌的共培养过程中能够抑制弧菌的繁殖。总之，以海洋放线菌菌株为来源，以鳗弧菌作为抑制水产病原菌活性测定的模型具有来源广泛、操作简单等优势，可以提高筛选效率，对新水产抑菌制剂的研发具有重要意义。
1)鳗弧菌的活化
本案例鳗弧菌(vibrioanguillarum)分离自患病大菱鲆鱼组织样本，取鳗弧菌冻存管置于28℃中进行冻融，吸取20ul涂布于海水2216e平板上，28℃培养两天后挑取单菌落接种于含有海水2216e液体培养基的试管中，置于28℃摇床中于160rpm进行培养，备用。
2)样品溶液的制备
将上述实施例分离纯化的发酵产物黄绿色组分以dmso溶解，配制为4mg/ml溶液，备用。
3)抑菌试验方法
取96孔细胞培养板，每孔加80μl稀释过的对数生长期的鳗弧菌菌液(a600＝0.025)，制成测试培养板。空白对照组和各浓度样品组各设三个平行孔，空白孔组不接种菌液，空白对照组加0.8μldmso溶液，样品组加0.8μl所需浓度的样品液。28℃培养15小时后，使用多功能酶标仪进行a600吸光值测定。
抑制鳗弧菌生长活性用抑制率表示，计算公式如下：
抑制率＝((对照组a600-空白孔组a600)－(处理组a600-空白孔组a600))/(对照组a600-空白孔组a600)×100％，并计算半数抑菌浓度ic50。
试验结果为样品(发酵产物黄绿色组分)抑制鳗弧菌的抑菌率为70.0±8.3％；
上述实验结果证明本发明所涉及的发酵产物具有较好抑制鳗弧菌活性，可用于制备水产抑菌制剂。