本发明涉及一种细菌感染的分子生物学检测和鉴定技术领域，尤其涉及生殖道感染的特异性纯净靶标捕获方法。
背景技术：
生殖道感染细菌的实验室诊断主要包括，细胞生物学方法(直接镜检，分离培养)，免疫学方法(直接荧光抗体检测，酶联免疫吸附试验)和分子生物学方法。
分子生物学方法现有技术通常采用的是实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneousamplificationandtesting，简称sat)，该技术是将新一代的核酸恒温扩增技术和实时荧光检测技术相结合的一种新型核酸检测技术。与传统的检测方法相比具有高灵敏度、高特异性、低污染和反应稳定。
关于生殖道细菌的检测技术，欧美疾控部门和who都推荐，分子诊断法作为生殖道感染细菌检测的一种手段，是目前最为灵敏准确的方法。而且，只有分子诊断法可以检测尿液，因为采样方便，非常适用普遍筛查。在美国，恒温扩增技术(tma)以64％的绝对优势成为主流的检测技术。国外研究表明，该技术不受标本取材的影响，取样方便，灵敏度高，特异性好，同时还可以用于用药情况的监测和判愈。对于医院而言，可提高其整体的诊疗水平，对病人而言，则避免了反复就诊，可降低诊治成本。国外市场是gen-probe公司的转录介导的扩增(tma)，扩增并检测生殖道细菌的rrna。优点是每个感染细胞中有大量的rrna，而且操作步骤简便，只是一个恒温过程，不需要变换温度的扩增仪。由于检测方法是终点检测，容易导致环境污染，国内尚无采用该法进行检测的报道。目前国内对生殖道感染细菌的检测主要为胶体金和pcr。但培养的不易，胶体金检测结果的不佳，pcr的污染问题，也引发了临床对rna检测的期盼。医院常规生殖道感染细菌样本为尿道拭子和宫颈拭子(部分为阴道拭子)，需要专业的医务人员进行样本采集，对男性患者而言，采集样本过程痛苦。恒温扩增检测试剂盒是唯一获得sfda批准的，可用于检测尿液样本的诊断试剂，灵敏度高，特异性好，并因扩增产物为rna，可避免dna引起的临床污染，然而其采样仍然属于侵入型，患者比较痛苦。
rna检测技术不仅可以检测尿道和宫颈拭子，而且可以检测尿液标本。以培养法为金标准，以pcr法为扩大金标准采用sat检测男女生殖道标本的生殖道感染细菌，拭子标本的灵敏度97.0％，特异性99.1％、准确度98.6％；首次排空尿液样本的灵敏度95.8％、特异性99.1％、准确度98.3％。尿液标本的选择，可减轻患者痛苦，减少医务人员工作量。由于rna核酸检测技术的高灵敏度和特异性，在具备分子生物学条件的实验室，可以采用该方法常规检测应用。sanger测序是目前所有基因检测的国际金标准！sanger测序是目前所有基因检测的国际金标准，是包括荧光定量pcrtaqman探针法、普通pcr法、芯片法、二代测序法、质谱法等方法的金标准。科研领域发表基因检测相关文章，必须要有sanger测序验证数据予以支持。sanger测序之所以是目前基因检测的国际金标准，是因为sanger测序原理非常科学，过程非常缜密，结果真实可视，准确率非常高，达到99.999％。不需要建库，属于直接测序，直接读取结果，连续读取数据(不是一个点)，不需要推导结论，过程明朗数据支撑充分。这项技术是虽然经过了38年，但应用仍然广泛，还是测序的主力军，好多检测其他方法不能替代。然而，如何提取纯净的rna作为靶标也是目前的一大难题。
技术实现要素：
为了克服现有技术检测方法中的以上缺陷，本申请提供了一种生殖道感染的特异性纯净靶标捕获方法，其发明构思在于：通过特异性靶标捕获技术获取rna，特异性靶标捕获技术，也可以称为磁珠法，是获得纯净的细菌靶核酸(rna)从而作为精确检测沙眼衣原体感染的最重要的基础。
一种生殖道感染的特异性纯净靶标捕获方法，采用特异性靶标捕获技术，即磁珠法提取纯净的细胞靶核酸，即rna作为靶标，包括如下步骤：
步骤一，手工提取靶标核酸特异性：包括在磁珠微粒表面标记oligo(dt)，在该段oligo(dt)上连接带有一段oligo(da)的特异性的核酸捕获片段，当捕获探针与靶标核酸结合后，用磁铁吸附磁珠，即可提取靶标核酸特异性；
步骤二，获取纯净的细菌靶核酸，即rna做为靶标：包括在核酸提取的过程中，病原体裂解释放出的核酸与核酸提取液中的磁性颗粒特异结合，清洗磁性颗粒获得纯净的细菌靶核酸rna，最大限度的将样本中的杂质去除掉，保证反应时的特异性。
优选的，所述步骤一手工提取靶标特异性以及步骤二获取纯净的细菌靶核酸使用到磁珠分离器、电动吸引器、干式恒温仪和连续微量加样器完成。
优选的，所述步骤一手工提取靶标特异性以及步骤二获取纯净的细菌靶核酸还可以通过magx全自动核酸提取仪完成所有的提取过程，提取出来的核酸在荧光pcr仪器上进行扩增检测。
获得纯净rna，以纯净rna为模板进行扩增，并进行实时检测，有效节约了医疗资源，并给患者带来便利，检测成本低，可受惠于更多患者，作为最新的诊断技术，具有快速、灵敏、特异、简便，极大降低漏检、误检率。
根据下文结合附图对本发明具体实施例的详细描述，本领域技术人员将会更加明了本发明的上述以及其他目的、优点和特征。
附图说明
后文将参照附图以示例性而非限制性的方式详细描述本发明的一些具体实施例。附图中相同的附图标记标示了相同或类似的部件或部分。本领域技术人员应该理解，这些附图未必是按比例绘制的。本发明的目标及特征考虑到如下结合附图的描述将更加明显，附图中：
图1为根据本发明实施例的采用特异性靶标捕获技术，即磁珠法提取纯净的细胞靶核酸，即rna作为靶标的原理图。
具体实施方式
本实施例针对一种基于rna靶标的sat的沙眼衣原体感染分子生物学检测方法，通过特异性靶标捕获技术获得纯净rna，并与荧光恒温扩增检测技术(sat)的结合将rna靶标和sat技术的优点有机结合，当然本发明的技术方案并不是两种技术的简单叠加，而是通过特异性靶标捕获技术，也可以称为磁珠法获得纯净的细菌靶核酸(rna)作为精确检测沙眼衣原体感染的最重要的基础；实时荧光核酸恒温扩增检测技术使用m-mlv反转录酶、t7rna多聚酶和优化探针技术来同时实现，包括如下步骤：
参见图1，一种生殖道感染的特异性纯净靶标捕获方法，采用特异性靶标捕获技术，即磁珠法提取纯净的细胞靶核酸，即rna作为靶标，包括如下步骤：
步骤一，手工提取靶标核酸特异性：包括在磁珠微粒表面标记oligo(dt)，在该段oligo(dt)上连接带有一段oligo(da)的特异性的核酸捕获片段，当捕获探针与靶标核酸结合后，用磁铁吸附磁珠，即可提取靶标核酸特异性；
步骤二，获取纯净的细菌靶核酸，即rna做为靶标：包括在核酸提取的过程中，病原体裂解释放出的核酸与核酸提取液中的磁性颗粒特异结合，清洗磁性颗粒获得纯净的细菌靶核酸rna，最大限度的将样本中的杂质去除掉，保证反应时的特异性。
获取纯净的细菌靶核酸使用到磁珠分离器、电动吸引器、干式恒温仪和连续微量加样器完成。还可以通过magx全自动核酸提取仪完成所有的提取过程，提取出来的核酸在荧光pcr仪器上进行扩增检测。表1列出本实施例实施的场所和部分所使用的设备，即荧光定量pcr仪，全自动核酸提取仪，磁珠分离器，连续微量加样器、电动吸引器、干式恒温仪的型号和数量这些详细的情况。
表1
获得纯净rna，以纯净rna为模板进行扩增，并进行实时检测，有效节约了医疗资源，并给患者带来便利，检测成本低，可受惠于更多患者，作为最新的诊断技术，具有快速、灵敏、特异、简便，极大降低漏检、误检率
虽然本发明已经参考特定的说明性实施例进行了描述，但是不会受到这些实施例的限定而仅仅受到附加权利要求的限定。本领域技术人员应当理解可以在不偏离本发明的保护范围和精神的情况下对本发明的实施例能够进行改动和修改。