1.一种诱导人类内胚层干细胞分化为胆管细胞和/或胆管细胞群的方法,其特征在于,包括步骤:
(a)在第一培养条件下,在培养体系中培养内胚层干细胞,从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(hepaticendoderm)细胞团;其中,所述培养体系包括bfgf、vegf、egf、和bmp4因子;
(b)在适合培养的条件下,在培养体系中培养步骤(a)获得的肝向内胚层(hepaticendoderm)细胞团,从而获得肝母细胞;
(c)在适合培养的条件下,在培养体系中培养步骤(b)获得的肝母细胞,从而获得胆管前体细胞;和
(d)在第二培养条件下,在培养体系中培养步骤(c)获得的胆管前体细胞,从而获得胆管细胞和/或胆管细胞群;其中,所述培养体系包括hgf、egf、tgfβ、dex、和tppb因子。
2.一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝向内胚层细胞团的方法,其特征在于,包括步骤:
在第一培养条件下,在培养体系中培养内胚层干细胞,从而获得经肝脏特化的肝向内胚层(hepaticendoderm)细胞团;其中,所述培养体系包括bfgf、vegf、egf、和bmp4因子。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述第一培养条件含有第一培养基。
4.一种胆管细胞和/或胆管细胞群,其特征在于,所述胆管细胞和/或胆管细胞群为封闭的具有中空结构的单层细胞球囊,其中,所述胆管细胞和/或胆管细胞群的球囊直径大小200-400μm,球囊表面胆管细胞大小50-80μm,细胞层厚度5-10μm。
5.一种权利要求4所述胆管细胞和/或胆管细胞群的用途,其特征在于,用于(a)筛选促进胆管细胞和/或胆管细胞群分化的药物;和/或(ii)评估药物对胆管细胞和/或胆管细胞群毒性。
6.一种诱导培养基,其特征在于,所述诱导培养基含有基础培养基和添加物;其中所述基础培养基选自下组:sfd、dmem、dmem/f12、bdm、或其组合;并且,所述添加物包括bfgf、vegf、egf、和bmp4因子。
7.一种诱导组合物,其特征在于,包括:
(a)第一诱导因子,所述第一诱导因子包括bfgf、vegf、egf、和bmp4因子;
(b)第二诱导因子,所述第二诱导因子包括bfgf、vegf、egf、hgf、osm、和dex因子;
(c)第三诱导因子,所述第三诱导因子包括fgf10、activin-a、和retinoicacid;
(d)第四诱导因子,所述第四诱导因子包括hgf、egf、tgfβ、dex、和tppb因子;和
(e)促进分化的其他物质,所述促进分化的其他物质选自下组:基质胶(matrigel)、层粘连蛋白(laminin)、基底膜提取物(basementmembraneextracts)、或其组合。
8.权利要求7所述的诱导组合物的用途,其特征在于,用于诱导内胚层干细胞分化为胆管细胞和/或胆管细胞群。
9.一种筛选或确定促进内胚层干细胞分化为胆管细胞和/或胆管细胞群的潜在治疗剂的方法,其特征在于,包括步骤:
(a)在测试组中,在培养体系中,在测试化合物的存在下,培养内胚层细胞一段时间t1,检测测试组所述培养体系中的胆管细胞和/或胆管细胞群的数量m1;
并且在不存在所述测试化合物且其他条件相同的对照组中,检测对照组所述培养体系中的胆管细胞和/或胆管细胞群的数量m2;和
(b)将上一步骤所检测的m1、m2进行比较,从而确定所述测试化合物是否是促进内胚层干细胞分化为胆管细胞和/或胆管细胞群的潜在治疗剂;
其中,如果m1显著高于m2,则表示所述测试化合物是促进内胚层干细胞分化为胆管细胞和/或胆管细胞群的潜在治疗剂。
10.一种评估待测化合物对胆管细胞和/或胆管细胞群的毒性的方法,其特征在于,包括步骤:
(a)在测试组中,在培养体系中,在测试化合物的存在下,培养胆管细胞和/或胆管细胞群一段时间t1,检测测试组所述培养体系中的胆管细胞和/或胆管细胞群的选自下组的一种或多种指标:形态(如囊腔状结构完整性、球体通透情况、细胞贴附情况)、或细胞凋亡;
并且在不存在所述测试化合物且其他条件相同的对照组中,检测对照组所述培养体系中的胆管细胞和/或胆管细胞群的选自下组的一种或多种指标:形态(如囊腔状结构完整性、球体通透情况、细胞贴附情况)、或细胞凋亡;和
(b)将上一步骤所检测的一种或多种指标进行比较,从而评估待测化合物对胆管细胞和/或胆管细胞群是否具有毒性;
其中,如果测试组的囊腔状结构破坏、球体不通透、细胞贴附差或脱落,细胞出现凋亡现象,则表示待测化合物对胆管细胞和/或胆管细胞群具有毒性。