本发明进一步涉及本发明的金属蛋白酶在除去蛋白质污物过程中的用途。蛋白质 污物可能是如食品污物等污物，如婴儿食品、皮脂、可可、蛋、血、奶、墨水、草、或其组合。
[0231] 典型的洗涤剂组合物包括除酶之外的各种组分，这些组分具有不同的作用，一些 组分像表面活性剂降低洗涤剂的表面张力，这允许正清洁的污物被提起和分散并随后被洗 涤出来，其他组分像漂白系统通常通过氧化除去颜色并且许多漂白剂还具有强杀菌特性， 并且用于消毒和灭菌。其他组分像助洗剂和螯合剂例如通过从液体中除去金属离子来软化 洗漆水。
[0232] 在一个具体实施例中，本发明涉及包括本发明的金属蛋白酶的一种组合物在衣物 或餐具洗涤中的用途，其中所述酶组合物进一步包括以下各项中的至少一种或多种：表面 活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分。
[0233] 在本发明的一个优选实施例中，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系 统和/或漂白组分的量相比于在未添加本发明的金属蛋白酶情况下使用的表面活性剂、助 洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量有所减小。优选地，作为一种表面 活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的该至少一种组分按以下 量存在：比在不添加本发明的金属蛋白酶的情况下组分在系统中的量（例如，此组分的常 规的量）少1%、如少2%、如少3%、如少4%、如少5%、如少6%、如少7%、如少8%、如 少9%、如少10%、如少15%、如少20%、如少25%、如少30%、如少35%、如少40%、如少 45 %、如少50 %。在一个方面中，将本发明的金属蛋白酶用于洗涤剂组合物中，其中所述组 合物不含至少一种组分，该组分是一种表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统 或漂白组分和/或聚合物。
[0234] 洗涤方法
[0235] 本发明的洗涤剂组合物理想地适用于在洗衣应用中使用。因此，本发明包括一 种洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包含根据本发明的洗涤剂组合物的 清洁洗衣溶液接触的步骤。织物可以包括能够在常规消费者使用条件下被洗涤的任何织 物。该溶液优选具有从约5. 5至约8的pH。可以在溶液中按以下浓度使用这些组合物： 从约IOOppm,优选500ppm至约15, OOOppm。水温的范围典型地是从约5°C至约90°C，包括 约 KTC、约 15°C、约 20°C、约 25°C、约 30°C、约 35°C、约 40°C、约 45°C、约 50°C、约 55°C、约 60°C、约65°C、约70°C、约75°C、约80°C、约85°C以及约90°C。水与织物之比典型地是从约 1:1 至约 30:1。
[0236] 在具体实施例中，在从约5. 0至约11. 5的pH下执行该洗涤方法，或在替代性实施 例中，甚至从约6至约10. 5,例如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至 约7、约5. 5至约11、约5. 5至约10、约5. 5至约9、约5. 5至约8、约5. 5.至约7、约6至约 11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6. 5至约11、约6. 5至约10、约6. 5 至约9、约6. 5至约8、约6. 5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9或约7至约8， 优选约5. 5至约9,并且更优选约6至约8。
[0237] 在具体实施例中，在以下硬度下执行该洗涤方法：从约0° dH至约30° dH，例 如约 Γ dH、约 2° dH、约 3° dH、约 4° dH、约 5° dH、约 6° dH、约 7° dH、约 8° dH、约 9° dH、约 10° dH、约 1Γ dH、约 12° dH、约 13° dH、约 14° dH、约 15° dH、约 16° dH、约 17° dH、约 18° dH、约 19° dH、约 20° dH、约 2Γ dH、约 22° dH、约 23° dH、约 24° dH、 约25° dH、约26° dH、约27° dH、约28° dH、约29° dH、约30° dH。在典型欧洲洗涤条 件下，硬度是约15° dH，在典型美国洗涤条件下，是约6° dH，并且在典型亚洲洗涤条件下， 是约3° dH。
[0238] 本发明涉及一种用包括本发明的金属蛋白酶的洗涤剂组合物清洁织物、餐具或硬 表面的方法。
[0239] -个优选实施例涉及一种清洁方法，所述方法包括在适合于清洁物体的条件下将 所述物体与包括本发明的金属蛋白酶的清洁组合物接触的步骤。在一个优选实施例中，该 清洁组合物是一种洗涤剂组合物并且该过程是一个衣物洗涤或餐具洗涤过程。
[0240] 另一个实施例涉及一种用于从织物上除去污物的方法，该方法包括在适合于清洁 所述物体的条件下将所述织物与包括本发明的金属蛋白酶的组合物接触。
[0241] 在一个优选实施例中，用于在以上方法中使用的组合物进一步包括至少一种如以 上"其他酶"部分列出的另外的酶，如选自下组的酶，该组由以下各项组成：碳水化合物酶、 肽酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶，木聚糖酶或角质酶或其组合。在又另一个优选实施例中， 这些组合物包括减少的量的以下组分中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或 螯合试剂、漂白系统或漂白组分或聚合物。
[0242] 还考虑了使用一种或多种本发明的金属蛋白酶处理织物（例如，使纺织品脱浆） 的组合物和方法。能以任何织物处理方法使用金属蛋白酶，这些方法在本领域是已熟知的 (参见，例如，美国专利号6, 077, 316)。例如，在一个方面中，通过一种方法改善织物的触感 和外观，该方法包括将该织物与溶液中的金属蛋白酶接触。在一个方面中，在压力下用该溶 液处理该织物。
[0243] 低温用途
[0244] 本发明的一个实施例涉及一种进行衣物洗涤、餐具洗涤或工业清洁的方法，该方 法包括使有待清洁的表面与本发明的金属蛋白酶接触，并且其中所述衣物洗涤、餐具洗涤、 工业或机构清洁在约40°C或以下的温度下进行。本发明的一个实施例涉及金属蛋白酶在衣 物洗涤、餐具洗涤或清洁过程中的用途，其中衣物洗涤、餐具洗涤、工业清洁中的温度是约 40°C或以下。
[0245] 在另一个实施例中，本发明涉及根据本发明的金属蛋白酶在除蛋白过程中的用 途，其中除蛋白过程中的温度是约40°C或以下。
[0246] 本发明还涉及与商业金属蛋白酶（例如Neutrase? )相比具有至少一种改进特 性的金属蛋白酶在衣物洗涤、餐具洗涤或工业清洁过程中的用途并且其中衣物洗涤、餐具 洗涤或清洁过程中的温度在约40°C或以下的温度下进行。
[0247] 在以上确定的方法和用途的每一者中，洗涤温度是约40°C或以下，例如约39°C或 以下、例如约38°C或以下、例如约37°C或以下、例如约36°C或以下、例如约35°C或以下、例 如约34°C或以下、例如约33°C或以下、例如约32°C或以下、例如约31°C或以下、例如约30°C 或以下、例如约29°C或以下、例如约28°C或以下、例如约27°C或以下、例如约26°C或以下、 例如约25°C或以下、例如约24°C或以下、例如约23°C或以下、例如约22°C或以下、例如约 21°C或以下、例如约20°C或以下、例如约19°C或以下、例如约18°C或以下、例如约17°C或以 下、例如约16°C或以下、例如约15°C或以下、例如约14°C或以下、例如约13°C或以下、例如 约12°C或以下、例如约lit：或以下、例如约KTC或以下、例如约9°C或以下、例如约8°C或 以下、例如约TC或以下、例如约6°C或以下、例如约5°C或以下、例如约4°C或以下、例如约 3°C或以下、例如约2°C或以下、例如约1°C或以下。
[0248] 在另一个优选实施例中，洗涤温度在约5°C -40°C的范围内，例如约5°C -30°C、约 5°C -20°C、约 5°C -10°C、约 10°C -40°C、约 10°C -30°C、约 10°C -20°C、约 15°C -40°C、约 15°C -30°C、约 15°C -20°C、约 20°C -40°C、约 20°C -30°C、约 25°C -40°C、约 25°C -30°C或约 30°C -40°C。在一个特别优选的实施例中，洗涤温度是约30°C。
[0249] 在具体实施例中，在从约5. 0至约11. 5的pH下执行该低温洗涤方法，或在替代性 实施例中，甚至从约6至约10. 5,例如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约 5至约7、约5. 5至约11、约5. 5至约10、约5. 5至约9、约5. 5至约8、约5. 5.至约7、约6 至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6. 5至约11、约6. 5至约10、 约6. 5至约9、约6. 5至约8、约6. 5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9或约7至 约8,优选约5. 5至约9,并且更优选约6至约8。
[0250] 在具体实施例中，在以下硬度下执行该低温洗涤方法：从约0° dH至约30° dH， 例如约 Γ dH、约 2° dH、约 3° dH、约 4° dH、约 5° dH、约 6° dH、约 7° dH、约 8° dH、约 9° dH、约 10° dH、约 1Γ dH、约 12° dH、约 13° dH、约 14° dH、约 15° dH、约 16° dH、约 17° dH、约 18° dH、约 19° dH、约 20° dH、约 2Γ dH、约 22° dH、约 23° dH、约 24° dH、 约25° dH、约26° dH、约27° dH、约28° dH、约29° dH、约30° dH。在典型欧洲洗涤条 件下，硬度是约15° dH，在典型美国洗涤条件下，是约6° dH，并且在典型亚洲洗涤条件下， 是约3° dH。
[0251] 在除去鸡蛋污物中的用途
[0252] 本发明的另一个具体实施例涉及鸡蛋污物的去除。这些类型的污物通常非常难于 完全去除。鸡蛋污物在硬表面清洁中是特别有问题的，例如餐具洗涤，其中污物在洗涤后通 常留在盘和刀具上。本发明的金属蛋白酶特别适于去除鸡蛋污物。
[0253] 因此，本发明进一步涉及用于从纺织品、织物和/或硬表面（像餐具和刀具），特别 是从织物和纺织品去除鸡蛋污物的方法。本发明的一个优选方面涉及一种从纺织品和/或 织物去除鸡蛋污物的方法，该方法包括使需要去除鸡蛋污物的表面与本发明的金属蛋白酶 接触。在一个实施例中，本发明包括一种从纺织品和/或织物去除鸡蛋污物的方法，该方法 包括使需要去除鸡蛋污物的表面与包括本发明的金属蛋白酶的洗涤剂组合物接触。本发明 还涉及一种去除鸡蛋污物的方法，该方法包括向待洗衣物和/或在洗涤过程中添加本发明 的金属蛋白酶，其中所述纺织品和/或织物包括不同鸡蛋污物。
[0254] 本发明的一个实施例涉及一种用于从硬表面或从待洗衣物除去鸡蛋污物的方法， 该方法包括将含鸡蛋污物的硬表面或含鸡蛋污物的衣物与包含本发明的金属蛋白酶的清 洁或洗涤剂组合物，优选衣物洗涤或餐具洗涤组合物接触。
[0255] 另一个实施例涉及一种用于从织物或纺织品去除鸡蛋污物的方法，该方法包括使 该织物或纺织品与包括本发明的金属蛋白酶的清洁或洗涤剂组合物，优选衣物洗涤或餐具 洗漆组合物接触。
[0256] -个仍另外的实施例涉及一种用于从织物或纺织品去除鸡蛋污物的方法，该方法 包括使所述织物或纺织品与包括本发明的金属蛋白酶的组合物接触，其中所述组合物进一 步包括至少一种如以上"其他酶"部分列出的另外的酶，例如一种选自下组的酶，该组由以 下各项组成：碳水化合物酶、肽酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、木聚糖酶、角质酶或其组合。
[0257] 在具体实施例中，在从约5. 0至约11. 5的pH下执行该除鸡蛋方法，或在替代性实 施例中，甚至从约6至约10. 5,例如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5 至约7、约5. 5至约11、约5. 5至约10、约5. 5至约9、约5. 5至约8、约5. 5.至约7、约6至 约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6. 5至约11、约6. 5至约10、约 6. 5至约9、约6. 5至约8、约6. 5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9或约7至约 8,优选约5. 5至约9,并且更优选约6至约8。
[0258] 在具体实施例中，在以下硬度下执行该除鸡蛋方法：从约0° dH至约30° dH，例 如约 Γ dH、约 2° dH、约 3° dH、约 4° dH、约 5° dH、约 6° dH、约 7° dH、约 8° dH、约 9° dH、约 10° dH、约 1Γ dH、约 12° dH、约 13° dH、约 14° dH、约 15° dH、约 16° dH、约 17° dH、约 18° dH、约 19° dH、约 20° dH、约 2Γ dH、约 22° dH、约 23° dH、约 24° dH、 约25° dH、约26° dH、约27° dH、约28° dH、约29° dH、约30° dH。在典型欧洲洗涤条 件下，硬度是约15° dH，在典型美国洗涤条件下，是约6° dH，并且在典型亚洲洗涤条件下， 是约3° dH。
[0259] 在此引用的所有文献均通过引用以其全文结合在此。
[0260] 通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应当解释为限制本发明的范围。
[0261] 实例
[0262] 材料与方法
[0263] 洗漆测定
[0264] 用于衣物洗涤的自动机械应力测定（AMSA)
[0265] 为了评定洗涤性能，使用自动机械应力测定（AMSA)进行衣物洗涤实验。使用 AMSA，可以检查大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有许多用于测试溶液的缝 和盖子，盖子针对所有缝开口强力挤压洗涤样品（有待洗涤的纺织品）。在洗涤时间期间， 板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈振动从而使测试溶液与纺织品接触并以规则、周期性摆动 方式施加机械压力。关于进一步描述，参见WO 02/42740,尤其是第23-24页的"特定方法 实施例（Special method embodiments)" 段落。
[0266] 将洗涤性能作为所洗涤纺织品颜色的亮度进行测量。亮度也可以表达为当用白光 照亮时从样品反射的光的强度。当样品受到污染时，反射光的强度低于干净样品的反射光 的强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能。
[0267] 使用专业平板扫描仪（Kodak iQsmart (柯达（Kodak) )，Midtager 29， DK-2605 Bmndby (丹麦）进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
[0268] 为了从扫描的图像中提取光强度值，将来自图像的24-位像素值转化为红、绿以 及蓝（RGB)的值。通过将RGB值作为向量相加在一起并然后考虑所得向量的长度可以计算 强度值（Int):
[0269]
【主权项】
1. 一种包括具有蛋白酶活性的多肽的组合物，其中具有蛋白酶活性的该多肽选自： a) -种多肽，该多肽与SEQIDN0:2或SEQIDNO4的成熟多肽具有至少70%序列 一致性，例如至少75%-致性，例如至少80%-致性，例如至少85%序列一致性，例如至少 90%-致性，例如至少95%-致性，例如至少97%-致性，例如至少98%-致性，例如至少 99 % -致性； (b) -种多肽，该多肽由以下多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQIDN0:1或SEQIDNO3 的成熟多肽编码序列具有至少70%序列一致性，例如至少75%-致性，例如至少80%-致 性，例如至少85%序列一致性，例如至少90%-致性，例如至少95%-致性，例如至少97% 一致性，例如至少98 %-致性以及例如至少99 % -致性； (c) 一种变体，该变体包括SEQIDNO: 2或SEQIDNO3的成熟多肽的一个或多个（若 干个）氨基酸的取代、缺失、和/或插入；以及 (d) (a)、（b)或（c)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。
2. 如权利要求1所述的组合物是一种洗涤剂组合物。
3. 如权利要求2所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包括一种或多种选自以 下各项的另外的酶：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化物酶、纤维素酶、果胶酶、甘露 聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶、和/或过氧化物酶。
4. 如权利要求2-3中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物处于以下形式：棒、 均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、 颗粒、膏、凝胶、或规则压缩的或浓缩的液体。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的组合物在清洁过程，例如衣物洗涤、硬表面清洁、 餐具洗涤或自动化餐具洗涤中的用途。
6. 具有蛋白酶活性的多肽在清洁过程中的用途，其中具有蛋白酶活性的该多肽选自： a) -种多肽，该多肽与SEQIDN0:2或SEQIDNO4的成熟多肽具有至少70%序列 一致性，例如至少75%-致性，例如至少80%-致性，例如至少85%序列一致性，例如至少 90%-致性，例如至少95%-致性，例如至少97 %-致性，例如至少98 % -致性以及例如 至少99 % -致性； b) -种多肽，该多肽由以下多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQIDNO: 1或SEQIDNO3 的成熟多肽编码序列具有至少70%序列一致性，例如至少75%-致性，例如至少80%-致 性，例如至少85%序列一致性，例如至少90%-致性，例如至少95%-致性，例如至少97% 一致性，例如至少98% -致性并且最优选至少99% -致性； c) 一种变体，该变体包括SEQIDNO:2或SEQIDNO4的成熟多肽的一个或多个（若 干个）氨基酸的取代、缺失、和/或插入；以及 d) (a)、（b)或（c)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。
7. -种从表面除去污物的方法，该方法包括使该表面与根据权利要求1至4中任一项 所述的组合物接触。
8. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物或根据权利要求5或6所述的用途，其 中该多肽来源于微小杆菌属ATlb。
9. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物或根据权利要求5或6所述的用途，其 中该多肽来源于西伯利亚微小杆菌。
【专利摘要】本发明涉及具有蛋白酶活性的分离的多肽的用途和包括具有蛋白酶活性的分离的多肽的组合物以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及清洁组合物以及这些多肽在清洁过程中的用途。
【IPC分类】C12N9-52
【公开号】CN104603265
【申请号】CN201380046080
【发明人】A·贝尼, P·R·厄斯特加德, M·哥杰曼森, M·S·博彻特
【申请人】诺维信公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年8月21日
【公告号】EP2888358A1, WO2014029820A1