一种链格孢属cbsx2菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，为一种纤维素降解菌，具体为一种链格抱属 ocAri97euc<3y>CBSX2 菌株及其应用。
【背景技术】
[0002] 纤维素是自然界中储存量最大、分布最广泛的可再生天然碳水化合物，其主要存 在于枯杆、木材等高等植物的细胞壁中，每年通过光合作用可生产纤维素逾10亿吨。然 而纤维素难W降解，导致其利用具有一定的局限性。长期W来，纤维素的降解主要是酸水 解，在1819年，人们就发现了酸水解可W用于生产糖浆，用于各种工业需要。酸水解主要分 为稀酸水解和浓酸水解法。稀酸水解的条件是在高温和高压下进行，水解反应的时间是几 砂或几分钟，在连续生产中应用较多；浓酸水解则相反，它要在较低的温度和压力下进行， 水解反应的时间比稀酸水解长。在酸水解的过程中会有很多因素影响单糖的得率，主要包 括温度、压力、酸浓度、生物质颗粒的大小、液固比等。在酸水解的过程中，木糖很快降解为 慷酵，葡萄糖降解为轻甲醇慷酵，一些抑制因子也会产生，造成了糖原的浪费，且抑制了己 醇的发酵过程，因而，酸水解纤维素工业仍需要不断地完善。
[0003] 目前，降解纤维素最有效、最经济的方法是生物降解法，即通过细菌、放线菌W及 真菌等生物产生的纤维素酶来催化降解纤维素。
[0004] 生物法与传统化学方法相比，具有成本低和转化率高等优点。它包括酶水解和生 物直接转化法。酶水解通常可W在常压下进行，酶具有很高的选择性，可直接水解成单一产 物，能够得到较高的产率。由于酶水解时仅生成很少的副产物，所W简化了提纯过程，也避 免了污染。而酶水解存在的问题是，酶的生产（或购买）成本很高，是现在研究的重点。直 接生物转化是指由一种菌来完成纤维素的水解和发酵过程，其优点是生产纤维素酶的该个 高成本的步骤可W省略，然而到目前为止仍没有发现该样的菌株，因此，生物直接转化在今 天仍然不可行。
【发明内容】
[0005] 本发明针对W上不足之处，提供了一种纤维素降解菌，链格抱属CBSX2菌株，该菌 株生长快，能分泌比较完整的水解木质纤维素的酶系且酶活性高。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供了一种新的纤维素降解菌，为 链格抱属（心妃raaria ocAri97euc<3乂BSX2菌株，于2014年12月8日保藏于在北京市朝阳 区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也保藏，保藏号是 CGMCCN0. 10141，命名为链格抱属化?ria 饼/caJCBSX2 菌株。
[0007] CBSX2菌落形态为灰色绒毛状，质地紧致，在PDA上涨势很快。边缘整齐，呈波状 或裂片状，在培养基表面可W看到有黑色的抱子堆形成。成熟的分生抱子具4-8个横福膜， 1-5个纵隔膜，倒棍棒形，卵形，或楠圆形，幼时抱子为透明无色，成熟后呈黑褐色，初步判定 为真菌链格抱属。
[0008] CBSX2真菌与链格抱属ocAroy饼/c<3y>的同源相似性达到99%,氨基酸 序列的相似性也达到了 92%。
[0009] 本发明的有益效果是： 目前的研究却大多集中在有限的几个菌株上，如康宁木霉、里氏木霉等。然而该些菌株 仍然存在着产酶成本高，酶活性不稳定，作用抑范围狭窄等问题。因此寻找更多、更高效、 作用范围更广泛的新菌种是十分必要的。本发明从长白山野生人参根内分离到几株高效降 解纤维素的微生物菌株，该菌株生长快，能分泌比较完整的水解木质纤维素的酶系且酶活 性高，其中菌株CBSX2纤维素降解能力最强，降解率高达23%，鉴定CBSX2菌株为链格抱属 ocAroy饼/ca乂国内外关于链格抱菌属的纤维素酶的研究较少，为纤维素的生 物降解提供了新的菌种资源。
【附图说明】
[0010] 图1所示是本发明五个时间不同真菌对枯杆的失重率； 图2所示为CBSX2菌株菌落形态和抱子形态（40X0. 65); 图3所示为CBSX2菌株显微形态（40X0. 65)和抱子形态（100XI. 4); 图4所示为该真菌引物ITS1，ITS4扩增DNA序列； 图5菌株CBSX2通过ITS序列分析建立的系统发育树。
【具体实施方式】
[0011] 下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。
[0012] 实施例1本发明纤维素降解菌链格抱属ocAroy饼/cay>CBSX2菌株的 分离与鉴定 (1)人参内生真菌链格抱属ocAroy饼/cay>CBSX2菌株的分离 ① 健康的野生人参样品采集后立即处理、洗净，然后将根切成小段，用75%的酒精冲 洗，用10%己氏消毒液洗18分钟，最后用无菌水冲洗4次； ② 将上述消毒过的根在无菌条件下分别切割成0. 5cm长的小段接种于孟加拉红培养 基平板上，置于28C度培养箱培养5天后，即可见样品切割过的边缘长出菌丝，经孟加拉红 培养基平板反复分离、纯化，将得到的真菌菌落4C保藏。
[0013] 孟加拉红培养基配方及制作方法如下；蛋白腺5g，葡萄糖lOg，磯酸二氨钟Ig，硫 酸镇（M拆〇4 ? 7&0) 0. 5g，琼脂20g，1/3000孟加拉红溶液100血，蒸觸水1000血，氯霉素 O.lg。上述各成分加入蒸觸水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量己醇溶解氯霉素，加 入培养基中，分装后，12rC灭菌20min。
[0014] ③具有纤维素分解能力的菌株的筛选： 分解纤维素的微生物种类很多，人们研究较多的是真菌和细菌，但由于细菌产的纤 维素酶多为胞内酶，所W真菌更是成为人们研究的焦点，在研究过程中，纤维素酶活的测 定方法十分繁琐，而采用平板菌落筛选则可粗略判断纤维素酶的酶活，从而减少试验的工 作量，经改良后的刚果红纤维素琼脂平板培养基配方为3(NH4)2S04 2g，M拆〇4 0. 5g，K2HP〇4 Ig，化Cl 0. 5g，纤维素粉2g，刚果红0.4g，琼脂20g，水lOOOmL,自然抑值，其中纤维素 粉WO.lmol/L的盐酸处理2化，之后水洗至抑值中性，过滤，烘干。经流水冲洗2化后烘 干，不仅单菌落生长良好，大小适度，且红色水解圈边缘清晰，大小分明，效果甚佳。
[0015] 将分离得到的单菌落点种于刚果红纤维素琼脂平板上，在28C恒温培养箱中培 养2-7d，挑选出在平板上生长快的红色浓郁透明水解圈的菌落，并测定其水解圈的大小。 对水解圈和菌落直径比值最大的菌落在进行划线分离，接种于保藏培养基上保存，命名为 CBSX2。
[0016] 表1 CBSX在刚果红平板上水解圈与菌落大小 (2)鉴定
【主权项】
1. 一种链格孢属（菌株，其特征在于：于2014年12月 8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，保藏号是CGMCCNO. 10141。
2. 权利要求1所述链格孢属（菌株的应用，其特征在 于：用于降解纤维素。
【专利摘要】本发明公开了一种链格孢属（Alternaria ochroleuca）CBSX2菌株及其应用，该菌株已于2014年12月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会，保藏号是CGMCCNO.10141。提供了链格孢属（Alternaria ochroleuca）CBSX2菌株在降解纤维素方面的作用，为纤维素的生物降解提供了新的菌种资源。CGMCC NO.1014120141208
【IPC分类】C12N1-14, C12R1-645, C12P19-14
【公开号】CN104673680
【申请号】CN201510060044
【发明人】孔波, 程丽娜, 耿全政, 崔国庆, 程玲
【申请人】山东蓬勃生物科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月5日