预后情况进行预测；
[0026] 5、有望通过miRNA模拟物和拮抗物对特定精神分裂症某种特定症状进行针对性 治疗。
【附图说明】
[0027] 图1为精神分裂症患者与对照者间9个miRNA表达结果对比。
【具体实施方式】
[0028] 一、研宄对象
[0029] 1.病例组：2012年8月至2014年5月于解放军第102医院门诊以及精神科病房 连续收治的病人。入组标准：①符合美国精神疾病诊断和统计手册第4版（DSM-IV)GAD标 准；②首发病人或入组前3个月未服抗精神病药物；③年龄15~80岁。排除标准：①患有 其他精神疾病；②患有脑外伤等躯体或神经系统疾病；③有酗酒或药物滥用史；④入组前1 个月内有输血史；⑤入组前3个月内使用过无抽搐电休克治疗者（MECT)。共入组82例患 者，其中男性39例，女性43例。
[0030] 2.对照组：来自解放军第102医院工作人员、健康体检人员，除一例性别不匹配 外，其余与病例组年龄、性别和民族一一匹配，最大限度排除了性别、年龄和民族等因素带 来的误差。纳入标准：①无精神疾病家族史；②近1个月内无重大创伤事件；③近1月内无 输血史。共入组43例，其中男性20例，女性23例。
[0031] 在开展研宄前，首先对参加本课题的精神专科医师和研宄生进行培训。采用精神 分裂症阳性和阴性症状量表（PANSS)、大体评定量表（GAS)、临床疗效总评量表（CGI)在病 例入组前、药物治疗3周后、药物治疗6周后分别进行评估。由两位精神科主治医师根据 DSM-IV-TR对患者进行诊断，如果出现不一致情况，则请一位精神科主任医师共同讨论后确 定诊断。
[0032] 入组时记录一般情况（姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状 况、药物成瘾史及精神疾病家族史等）。同样，记录正常对照组一般情况。
[0033] 本研宄获得中国人民解放军第102医院医学伦理委员会批准，所有受试者或受试 家属（监护人）均签署知情同意书。
[0034] 二、研宄方法
[0035] ①使用量表
[0036] 精神分裂症阳性和阴性症状量表（PANSS) : 19世纪末，由Hughlings-Jackson首先 提出，经后人整理，于1987年正式发表，现已广泛应用。阳性与阴性症状量表是为评定不同 类型精神分裂症症状的严重程度而涉及和标准化的评定量表，由简明精神病量表和精神病 理评定量表合并改编而成，共有33个条目，其中阳性症状条目7条，阴性症状条目7条，一 般精神病理量表16项，复合量表3项。
[0037] 大体评定量表（GAS):大体评定量表是评价各类精神疾病症状的量表，在同类量 表中是应用最广泛的一种。本研宄使用的是美国心理卫生研宄所（NMH) 1976年的Spitzer 版本，共有10级评定分（1~10分），根据患者临床症状进行评定。总分越高，说明病情越 轻。本研宄中使用GAS量表的中文版本进行评估，该版本经信效度检验分析，达到心理测量 学标准。
[0038] 临床疗效总评量表（CGI):临床疗效总评量表由WHO设计，用于国际精神疾病试点 调查（IPSS)的研宄，现用以评定临床疗效，适用于任何精神科治疗和研宄对象。量表分为 病情严重程度（severity of illness，SI)，疗效总评（global improvement，GI)和疗效指 数（efficacy index，EI)三个分量表。本研宄中使用CGI量表的中文版本进行评估，该版 本经信效度检验分析，达到心理测量学标准。本研宄中使用疾病严重程度分（severity of illness，SI)和疗效总评分（global improvement，GI)进行统计分析。
[0039] ②资料收集
[0040] 入组时记录一般情况（姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状 况、药物成瘾史及精神疾病家族史等）。由3名精神科主治医师或医师使用精神分裂症阳性 和阴性症状量表（PANSS)和临床疗效总评量表（CGI)于用药前及用药6周以上对病例组被 试进行评定。评定前，所有参与研宄人员进行统一培训，统一方法等，标准化施测过程。其 中HAMD使用总分和因子分统计，CGI使用疗效总评分（global improvement, GI)统计。
[0041] ③药物干预
[0042] 在82例病例中，随机选取16例进行临床药物干预随访观察。对其采用每日服用 奥氮平（剂量范围5mg-20mg)、脑力静（剂量范围800mg-1600mg)、齐拉西酮（剂量范围 40mg-80mg) 口服治疗。
[0043] ④主要试剂和耗材
[0044] RNA提取试剂盒：miRNeasy血清/血衆提取试剂盒（德国凯杰公司，货号 NO. 217184);外参试剂：miRNeasy血清/血浆外参（德国凯杰公司，货号.NO. 219610);荧 光定量PCR引物：TaqMan MicroRNA Assays (美国ABI公司）；荧光定量PCR试剂：TaqMan 通用混合试剂盒II (美国ABI公司，货号NO. 121207);反转录试剂盒：TaqMan MicroRNA反 转录试剂盒（美国ABI公司，货号NO. 1302146R)。
[0045] ⑤主要仪器
[0046] 扫描仪（仪器来源：Affymetrix，型号：Scanner 3000);杂交炉（仪器来源： Affymetrix，型号：Hybridization Oven 640);洗绦工作站（仪器来源：Affymetrix， 型号：Fluidics Station 450) ;2100(仪器来源：Agilent，型号：G2939A);2100 振荡器 (仪器来源：Agilent，型号：9600) ;NanoDrop(Thermo,2000) ;PCR 仪（ABI，9700);离心机 (eppendorf，5418);浓缩仪（eppendorf，5301);离心机（其林贝尔，LX-200);离心机-1(其 林贝尔，LX-300);振荡器-1(其林贝尔，GL-88B);磁力搅拌器（其林贝尔，GL-3250B);金 属浴_2(博日，HB-100);金属浴_3(博日，CHB-100);电热恒温培养箱（精宏实验设备， XMTD-8222);冰箱（荣事达，BCD-265F) ;ABI9700 型 PCR 仪（美国 ABI 公司）；天美 CT14RD 型台式高速冷冻离心机（上海天美生化仪器设备工程有限公司）；Nan〇Dr〇p100 0超微量 紫外分光光度计（附电脑1套）（美国Thermo公司）；ABI 7900HT Fast Read-Time PCR SyStem(附电脑1套）（美国ABI公司）；WH-2微型漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限 公司）JS-400A恒温金属浴（上海培清科技有限公司）；DK-8D数显恒温水浴锅（金坛市医 疗仪器厂）；SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台（苏净净化设备有限公司）；-81°C超低温冰 箱（日本三洋公司）；
[0047] ⑥基因芯片筛查
[0048] 用AffymetrixmiRNA 3. 0芯片，对GAD患者3人，正常对照3人共6个样本检 测和分析。样品总 RNA 利用 NanoDrop ND-2100 (Thermo Scientific)定量并经 Agilent 2100(Agilent Technologies)检测RNA完整性。RNA质检合格后，样本的标记、芯片的杂 交以及洗脱参照芯片标准流程。首先，总RNA经过Ploly A加尾，再进一步用生物素标 记。标记好的RNA和芯片杂交，洗绦和染色后利用AffymetrixScanner 3000 (Affymetrix) 扫描得到原始图像。数据分析：将原始数据导入Expression Console软件（version I. 3. 1，AfTymetix)，利用RMA的方法进行标准化后得到的结果，包含原始信号值，标准化信 号值，检出情况以及详细的注释信息。在筛选差异miRNA之前，先进行探针过滤，每一个探 针至少有一个样品标记为"Detected"则保留用于后续筛选。对生物学重复分析，则利用T 检验得到的差异显著性P值和标准化信号值的差异倍数Fold change值进行筛选，标准为 Fold change值多2. 0且P值< 0. 05。对于没有生物学重复的分析，仅利用差异倍数Fold change值进行筛选，标准为Fold change值^ 2. 0。