似的残基来取代某一残基。保守性突变的 例示包括疏水性残基（如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸与甲硫氨酸）彼此间的置换，或极性残 基（如精氨酸与赖氨酸；或谷氨酸与天冬氨酸，或谷氨酰胺与天冬酰胺）彼此间的置换等。 "保守性突变"在此亦指利用取代的氨基酸来取代未取代的原始氨基酸，只要针对该取代的 多肽产生的抗体也能与该未取代的多肽发生免疫反应即可。
[0059] 依据本公开多种实施例，所述的个体可以是归类为哺乳动物的任何动物，包括人。
[0060] 亦可将上述实施方式所述的各种合成肽调制成药物组合物，以治疗个体的骨关节 炎；此种药物组合物即属于本发明另一方面之范围。
[0061] 根据本公开一实施方式，上述药物组合物包含根据本发明上述任一方面/实施例 的合成肽，且此合成肽以足以治疗该个体的骨关节炎的有效量存在。此药物组合物亦包含 可用以携带该合成肽的药学上可接受赋形剂。
[0062] 根据本公开的可任选实施例，此药物组合物中所述合成肽的含量为约 1 - 1000yM;较佳为约10 - 500yM;更优秀为约25-250yM。举例来说，合成肽的浓度可 为约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、 100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950 或 1，000yM。具体而言，下文实施例中针对约310克重的大鼠所用的浓度为约200yM。本发 明所属技术领域具有通常知识者可基于本说明书提出的动物给药剂量计算出本发明合成 肽或药物组合物的人体等效剂量（HE?。譬如，可根据美国食品暨卫生管理局（FDA)已批 准的题为"成年健康志愿者临床治疗实验中最大安全起始剂量的估算"（Estimatingthe MaximumSafeStartingDoseinInitialClinicalTrialsforTherapeuticsinAdult HealthyVolunteers)的工业指南来估算人个体的最大安全剂量。
[0063] 可根据既有的药学程序来制备上述药物组合物，譬如《雷明顿制药科学》 (Remington'sPharmaceuticalSciences)(第 17 版，AlfonosoR.Gennaro编，麦克出版 公司（MackPublishingCompany)，伊斯顿，宾夕法尼亚（1985)) -书中有详细的记载。
[0064] 在选择适用于投递合成肽的赋形剂时，主要需考虑此药物组合物的给药方式。
[0065] 根据本公开的可任选实施例，可利用关节内注射的方式局部给药。在此种情形 中，可利用例如无菌水溶液作为药学上可接受载体来配制所述合成肽，此水溶液较佳为与 接受者体液等张的溶液。可将固体活性成分溶解或悬浮于含有生理可兼容物质（如氯化 钠、甘胺酸等），且其pH值经缓冲可与生理条件兼容的水中以得到一水溶液，而后再进行 灭菌，从而制备所述制剂。可用来制造上述无菌注射溶液或悬浮液的其它稀释剂或溶剂包 括，但不限于，1,3-丁二醇、甘露醇、水与林格氏溶液（Ringer'ssolution)。也可使用脂 肪酸（如，油酸）及其甘油酯衍生物，或是天然药学可接受的油（如，橄榄油或蓖麻油）来 制造注射剂。这类油性溶液或悬浮液中也可包含醇类稀释剂或羧甲基纤维素或类似的分散 剂。于调制制剂时，亦可使用其它常用的表面活性剂（如，Tweens或Spans系列）、或其它 类似的乳化剂，或于制备药学上可接受剂型时常用的生物利用度促进剂（bioavailability enhancer)〇
[0066] 根据本发明任选实施例，所述的药物组合物还可包含糖胺聚糖。糖胺聚糖是一 种线性多糖类，由重复的具有羧基和一个或多个硫酸酯的双糖单元所构成。糖胺聚糖连 接至核心蛋白（coreprotein)，形成蛋白多糖，此乃骨细胞外基质（boneextracellular matrix)的主要成分。在患有骨关节炎的软骨处，基质中糖胺聚糖的含量降低，而使得糖胺 聚糖和II型胶原蛋白之间的连结减弱，而使病况加重。因此，提供外来的糖胺聚糖至病灶 部位，有助于治疗骨关节炎。糖胺聚糖的例子包括但不限于：透明质酸与透明质酸钠。作为 非限制性实施例，本发明药物组合物可包含1-15% (重量百分比）的透明质酸。
[0067] 同样可任选地，本发明的药物组合物亦可包含所属技术领域中具有通常知识者所 熟知的药学上可接受的一或多种添加剂。上述添加剂包括但不限于：干燥剂、抗痒剂、抗 发泡剂、缓冲剂、中和剂、pH调节剂、着色剂、脱色剂、润肤剂、乳化剂、乳液稳定剂、增黏剂 (viscositybuilders)、保湿剂、添味剂（odorants)、防腐剂、抗氧化剂、化学稳定剂、增稠 剂、硬化剂、或悬浮剂。。
[0068] 在又一方面中，本发明提出了一种治疗个体的骨关节炎的方法。所述个体可以是 任何归类为哺乳动物的动物，包括人。根据本发明的原理与精神，所述方法能够促进软骨再 生，进而能够缓和或治愈该个体的骨关节炎。
[0069] 于一实施例中，上述方法包含给予该个体有效量的根据本发明上述方面/实施例 的合成肽，藉使所述肽到达邻近病灶的滑液腔。
[0070] 于可任选的实施例中，可将所述合成肽调制为本公开上述方面/实施例所述的药 物组合物。
[0071] 于一些实施例中，可将所述合成肽或药物组合物以关节内注射的方式递送至滑液 腔内。
[0072] 下文提出多个实施例来说明本发明的某些方面，以利本发明所属技术领域中具有 通常知识者实施本发明。不应将这些实施例视为对本发明范围的限制。据信本领域技术人 员在阅读了本文的描述后，可完整利用本发明。本文所引用的所有公开文献，其全文均以引 用的方式纳入本文。
[0073] 实验例
[0074] 材料与方法
[0075]〈材料〉
[0076]DMEM培养基、胎牛血清（FBS)、0.25%胰蛋白酶、抗生素、TRIzol和Dynabeads皆购 自英杰生命技术有限公司（Invitrogen，加利福尼亚，卡尔斯巴德）。透明质酸（HA)、单碘乙 酸（MIA)、二甲亚砜（DMSO)、纤连蛋白、Percoll、胰岛素、氢化可的松、牛血清白蛋白（BSA)、 5-溴-2' -脱氧尿苷（BrdU)、Hoechst33258染料购自西格玛奥德里奇（Sigma-Aldrich， 圣路易斯，密苏里州）。抗-BrdU抗体、抗蛋白聚糖（anti-aggrecan)抗体和抗II型胶原 蛋白抗体购自基泰（GeneTex，台北，台湾）。各种荧光染料结合的二级抗体皆购自生物传奇 公司（BioLegend，加利福尼亚，圣地亚哥）。链霉蛋白酶（Pronase)与胶原酶购自罗氏（印 第安纳州，印第安纳波利斯）。苏木精与曙红（H&E)染料购自默克（美国新泽西州，雷威 (Rayway))〇
[0077]合成PEDF合成肽（包括 29-聚体（SEQIDNO:3)、24_ 聚体（SEQIDNO:5)、20_ 聚 体（SEQIDNO:6)与18-聚体（SEQIDNO:7))，并将其N端乙酰化、C端酰胺化而进行修 饰。然后以质谱仪（金斯瑞，新泽西州皮斯卡塔市）表征修饰的肽（纯度>95%)。以DMSO 重构各PEDF衍生的短合成肽（所述29-聚体、24-聚体或20-聚体，下文称为PEDF肽），制 成浓度为5mM的储备溶液，并储存于-20°C中以供后续使用
[0078]〈动物〉
[0079] 本公开所载实施例所用的所有动物皆饲育于有温度与湿度控制的饲养笼中，饲养 温度约24°C至25°C，光暗循环为12 :12小时。试验过程中提供饮水与标准使用时饲料供任 食。实验计划皆通过马偕纪念医院（新北市，台湾）伦理委员会核准，并遵循国家动物保护 相关规范。
[0080] 对大鼠进行MIA关节内注射，以建立骨关节炎的动物模型。具体来说，10周大的 成年雄性Sprague-Dawley大鼠（最初体重312±llg)经腹腔内注射甲苯噻嘆（每公斤体 重10毫克）以进行麻醉；接着在右膝以单一剂关节内注射的方式注入MIA(1毫克MIA溶于 25y1的无菌生理盐水中）。具体而言，将膝盖处弯曲成90度，利用27G的针头，经由膝韧 带（patellarligament)注入上述MIA溶液。
[0081] 欲侦测体内细胞增殖时，在DMS0中重构BrdU，获得储备溶液（80mM)。将150y1 的BrdU储备溶液和350y1的磷酸缓冲液（PBS)混合后，经腹膜内注射至大鼠体内，并于16 小时后将大鼠安乐死。其后根据下文所述方法利用抗-BrdU抗体来标记BrdU，以评估DNA 合成。
[0082]〈关节软骨细胞的分离与培养〉
[0083]自8周大成年雄性Sprague-Dawley大鼠的股骨髁（包括前方、后方与侧边区域） 得关节软骨。取样时需小心以免滑膜引起污染并避免破坏骨质结构。取下的样品切成约 0. 5mm3的小片后，依序以链霉蛋白酶（70U/ml，37°C下1小时）与胶原酶（300U/ml，37°C下 3小时）处理。之后，以无菌PBS冲洗一次，之后再以添加了 2%F