[0132] 实施例37与实施例6基本相同，但采用所得到的壳聚糖纳米粒悬浮液制备金属离 子馨合剂，其余同实施例6。
[0133] 实施例38
[0134] 实施例38与实施例6基本相同，但采用改性壳聚糖制备壳聚糖纳米粒悬浮液，其 余同实施例6。
[0135] 实施例39
[0136] 实施例39与实施例12基本相同，但加入PEG400和PEG6000制备壳聚糖纳米粒悬 浮液，其余同实施例12。
[0137] 实施例40
[0138] 实施例40与实施例10基本相同，但加入HP-P-CD和P-CD制备壳聚糖纳米粒悬 浮液，其余同实施例10。
[0139] 实施例41
[0140] 实施例41与实施例2基本相同，但采用改性壳聚糖和簇甲基壳聚糖制备壳聚糖纳 米粒悬浮液，其余同实施例2。
[0141] 试验1不同制备方法样品的比较
[0142] 实验用试剂、药品等由合法渠道提供。
[0143] (1)样品制备方法：
[0144]样品 1
[0145] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌条件下，将重量百分含量为0. 2%的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中， 滴加速度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1: 5。继续揽拌60min，得到重量 百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得样品1。
[0146]样品 2
[0147] 称取适量壳聚糖粉末，制备壳聚糖混悬液。取壳聚糖混悬液，置入高压匀质机中， 压力为500Mpa，反复匀质20次，收集得到重量百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得 样品2。
[0148]样品 3
[0149] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量为0. 2%的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加 速度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1: 5。继续揽拌60min，得到壳聚糖 纳米粒粗悬浮液。取壳聚糖纳米粗悬浮液，置入高压匀质机中，压力为500Mpa，反复匀质10 次，收集得到重量百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得样品3。
[0150] (2)样品稳定性考察
[0151] 分别取样品各10血，装入20血西林瓶中，瓶口密封，在25°C下放置6个月。在规 定时间测定纳米粒的粒径和电位，比较各样品的外观变化。
[0152] (3)琼脂扩散法抑菌测定试验
[015引将100yL白色念珠菌悬液接种于马铃馨葡萄糖琼脂板（PDA)，在培养基上等距离 地用牛津杯打直径为8mm、高度为3mm的孔。平板干燥后，每孔加入100iiL不同样品。将平 板于4°C下放置化后，于37°C解化2地。测量抑菌圈的直径，采用无菌蒸馈水为阴性对照， 采用硝酸咪康挫（100yg/mL)为阳性对照，评价样品的抑菌作用。
[0154] (4)实验结果
[0155]具体结果如下；
[0156]表1为不同制备方法制备壳聚糖纳米粒的粒径W及电位(去+旨。比，n=3)。
[0157]表 1 [015引
[0159] 注：与样品1或样品2相比，*P<0. 01 ;胖<0. 05。
[0160] 表2为不同壳聚糖纳米粒25°C下放置6个月粒径和电位的变化（X+S.化，n= 3)。
[0161]表 2
[0162]
[016引注：与样品1或样品2相比，*P<0. 05
[0164] 表3为不同样品抑菌圈比较（X+S.化，n= 3)
[0165] 表 3
[0166]
[0167] 注：与阴性对照组相比，*P<0. 01 ;与样品1或样品2相比，▲P<0. 05。
[016引从表1至表3可知，样品3使用的是本发明的技术方案，其方法显著优于离子凝胶 或高压均质处理单独使用的效果，优化方案产生意想不到的效果。
[0169] 本发明所述的"离子凝胶处理与高压均质处理组合"的优化方案显著改善了壳聚 糖纳米粒的外观形状、平均粒径、电位和稳定性，产生意想不到的效果。本发明方案优于任 一技术单独使用或其它组合的效果。
[0170] 本发明技术方案的组合物进行了系统的理化表征、稳定性考察和药理活性评价。 在表征研究中，建立了电镜分析和粒径电位作为技术指标。在药理活性研究中，设计了抗菌 药效实验。在稳定性考察中，考察了 25°C条件下6个月的稳定性。结果表明本发明技术方 案所制备的壳聚糖纳米粒的平均粒径为50~300nm纳米，其表面电位为25~35mv。
[0171] 更重要的是，与单独采用离子凝胶法处理或高压均质处理的壳聚糖纳米粒相比， 本发明组合物具有显著优势。本发明方案中处理方法的优化、制备参数的优化和原辅料比 例的优化均能产生意想不到的效果，特别是运=个优化方案联合应用可W具有更显著的优 势。
[0172] 试验2不同制备参数样品的比较
[0173] 实验用试剂、药品等由合法渠道提供。
[0174] (1)样品制备方法：
[017引样品4
[0176] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量为0. 2%的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加 速度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1:10。继续揽拌60min，得到壳聚糖 纳米粗悬浮液。取壳聚糖纳米粗悬浮液，置入高压匀质机中，压力为500Mpa，反复匀质10 次，收集得到重量百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得样品4。
[0177]样品 5
[0178] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量的0. 2%=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加速 度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1: 5。继续揽拌60min，得到壳聚糖纳米 粗悬浮液。取壳聚糖纳米粗悬浮液，置入高压匀质机中，压力为300Mpa，反复匀质3次，收集 得到重量百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得样品5。
[0179]样品6
[0180] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量为0. 2%的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加 速度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1: 5。继续揽拌60min，得到壳聚糖纳 米粗悬浮液。取壳聚糖纳米粗悬浮液，置入高压匀质机中，压力为500Mpa，反复匀质10次， 收集得到重量百分含量为1 %的壳聚糖纳米粒悬浮液，制得样品6。
[0181] 似样品稳定性考察：同试验1
[0182] (3)琼脂扩散法抑菌测定试验：同试验1
[0183] (4)实验结果：
[0184] 表4为不同制备方法制备壳聚糖纳米粒的粒径W及电位（X+S.化，n= 3)。表5 为不同壳聚糖纳米粒25 °C下放置6个月粒径和电位的变化（X±S.化，n= 3)。表6为不同 样品抑菌圈比较（X+S.化，n= 3)。
[0185]表 4
[0186]
[0187]注：与样品4或样品5相比，*P<0. 05
[018引 表5
[0189]
[0194] 注：与阴性对照组相比，*P<0. 01 ;与样品4或样品5相比，▲P<0. 05。
[0195] 从表4至表6可知，本发明方案的制备方法和参数均有同样效果。本发明方案中 制备技术参数的优化显著改善壳聚糖纳米粒的粒径和电位，从而确保药理效果和有利于药 物剂型制备。
[0196] 试验3不同高分子辅料配比参数样品的比较
[0197] 实验用试剂、药品等由合法渠道提供。
[019引 （1)样品制备
[0199]样品7
[0200] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量为0. 2 %的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加 速度为1~2ml/min，S聚憐酸钢与壳聚糖的重量比为1: 5。继续揽拌60min，得到壳聚糖纳 米粗悬浮液。取壳聚糖纳米粗悬浮液，加入重量百分含量为0. 2%泊洛沙姆后混合均匀，置 入高压匀质机中，压力为500Mpa，反复匀质10次，收集得到重量百分含量为1 %壳聚糖纳米 粒悬浮液，制得样品7。
[0201] 样品 8
[0202] 称取适量壳聚糖粉末，溶于重量百分含量为1 %的冰醋酸溶液，制备壳聚糖醋酸溶 液。在揽拌下，将重量百分含量为0. 2 %的=聚憐酸钢溶液滴加到壳聚糖醋酸溶液中，滴加 速度为1