TA)和AMP。所述组 合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三 种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分 中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、MES缓冲剂、氟化钠、十二烷 基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸（EDTA)。所述 组合物可以包含柠檬酸缓冲剂、HEPES缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸（EDTA)、磷酸钾、消泡 剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和AMP。
[0021] 本公开涉及具有增加的储存寿命和/或稳定性的组合物。所述组合物包含D-荧 光素、L-荧光素和ATP，其中所述组合物基本上不含荧光素酶。所述组合物可以包含至少 约0. 5:1至约2:1的L-荧光素与D-荧光素的比率。所述组合物可以包含至少约5:95至 约55:45的L-荧光素与D-荧光素的比率。与未包含L-荧光素的组合物相比，当在约0°C 至约35°C的温度下储存时，所述反应混合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。所述 组合物可以具有至少约5且小于约9的pH。D-荧光素可以是D-5'氟荧光素，且L-荧光 素是L-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白 质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、AMP、辅酶A、还原剂 或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1，2-环己二胺四乙酸（⑶TA)。所述组合 物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1，4-哌嗪二乙磺酸、1，2-二氨基环己烷四乙 酸、Tergitol洗涤剂、Mazu消泡剂、硫酸镁、ATP、辅酶A、焦磷酸盐、DTT、亚硫酸盐和硫代硫 酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分：氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基 聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸（EDTA)和AMP。所述组合物可以 包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少三种。所述 组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少 五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、MES缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基 铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和乙二胺四乙酸（EDTA)。所述组合物可 以包含柠檬酸缓冲剂、HEPES缓冲剂、镁离子、乙二胺四乙酸（EDTA)、磷酸钾、消泡剂、十二 烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和AMP。
[0022] 本公开涉及具有增加的储存寿命和/或稳定性的组合物。所述组合物包含D-荧 光素、L-荧光素和ATP，其中所述L-荧光素的浓度超过所述D-荧光素的浓度。与未包含 L-荧光素的组合物相比，当在约0°C至约35°C的温度下储存时，所述反应混合物可以具有 增加的储存寿命和/或稳定性。所述组合物可以具有至少约5且小于约9的pH。D-荧光素 可以是D-5'氟荧光素，且L-荧光素是L-5'氟荧光素。所述组合物还可以包含至少一种 选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷 酸盐、焦磷酸盐、AMP、辅酶A、还原剂或其组合。所述组合物可以包含硫酸镁和反式-1，2-环 己二胺四乙酸（⑶TA)。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的额外组分：1，4-哌嗪二 乙磺酸、1，2-二氨基环己烷四乙酸、Tergitol洗涤剂、Mazu消泡剂、硫酸镁、ATP、辅酶A、焦 磷酸盐、DTT、亚硫酸盐和硫代硫酸盐。所述组合物还可以包含至少一种选自如下的组分： 氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙 酸（EDTA)和AMP。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少两种。所述组合物可以包 含所述额外组分中的至少三种。所述组合物可以包含所述额外组分中的至少四种。所述组 合物可以包含所述额外组分中的至少五种。所述组合物还可以包含镁离子、柠檬酸缓冲剂、 MES缓冲剂、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾和 乙二胺四乙酸（EDTA)。所述组合物还可以包含柠檬酸缓冲剂、HEPES缓冲剂、镁离子、乙二 胺四乙酸（EDTA)、磷酸钾、消泡剂、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷和AMP。
[0023] 本公开涉及包含包装在至少一个容器中的如上所述的组合物的试剂盒。
[0024] 本公开涉及试剂盒，所述试剂盒包含包装在第一容器中的如上所述的组合物和第 二容器，所述第二容器包含至少一种选自如下的组分：柠檬酸缓冲剂、MES缓冲剂、氟化钠、 十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、焦磷酸盐、磷酸钾、乙二胺四乙酸（EDTA) 和AMP。与未包含L-荧光素的组合物相比，当在约0°C至约35°C之间的温度下储存时，所述 组合物可以具有增加的储存寿命和/或稳定性。
[0025] 本公开涉及用于测定样品中ATP的存在或量的方法，其包括使如上所述的组合物 与样品接触，以及检测所产生的发光度，由此测定样品中ATP的存在或量。所述样品可以包 含完整的细胞。所述样品包括未加工的细胞裂解物或澄清的细胞裂解物。所述细胞可以为 原核细胞或真核细胞。所述样品可以包含经纯化的酶，所述酶产生或使用ATP。与未包含 L-荧光素的组合物相比，当在约0°C至约35°C之间的温度下储存时，所述组合物可以具有 增加的储存寿命和/或稳定性。
[0026] 本公开涉及用于检测表达荧光素酶的细胞中荧光素酶活性的方法，所述方法包括 在细胞中表达荧光素酶；使所述荧光素酶、所述细胞或其组合与包含L-荧光素和D-荧光素 的混合物接触以及检测发光度，在所述混合物中所述L-荧光素和所述D-荧光素的比率为 (i)至少约5:95至约75:25,（ii)至少约5:95至约50:50,（iii)至少约5:95至约25:75 或（iv)至少约5:95至约20:80。所述细胞可以被裂解，并且包含荧光素酶的裂解的细胞可 以与所述混合物接触。可以使裂解的细胞澄清以形成包含荧光素酶的澄清的细胞提取物， 以及使所述澄清的细胞提取物与所述混合物接触。所述细胞可以为真核细胞，如哺乳动物 细胞。所述混合物可能增加发光信号的半衰期。可以用荧光素酶编码序列瞬时转染所述细 胞。所述混合物可以具有至少约6. 5至小于约7. 8的pH，或者至少约6. 6至至少约6. 8的 pH。D-荧光素可以是D-5'氟荧光素且L-荧光素是L-5'氟荧光素。与未包含L-荧光素 的组合物相比，当在约〇°C至约35°C之间的温度下储存时，所述组合物可以具有增加的储 存寿命和/或稳定性。所述混合物可以具有至少约5至约9的pH。
[0027] 本公开涉及用于进行荧光素酶反应的方法。所述方法包括：(a)将包含L-荧光素 和D-荧光素的混合物在约0°C至约35°C之间的温度下储存至少约4小时的时间段，其中当 在包含荧光素酶和ATP的测定物中与样品合并时，所述储存的混合物允许产生光输出，并 且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50%;以及（b)在 步骤（a)之后，允许所述储存的混合物与⑴样品和（ii)ATP或ATP源、焚光素酶或其组合 合并以形成反应测定物以及检测所产生的发光度。所述时间段可以为至少约12小时，所述 温度可以为约〇°C至约6°C或约20°C至约35°C。所述样品可以包含荧光素酶，且所述混合 物包含ATP。所述样品可以包含ATP，且所述混合物包含荧光素酶。所述时间段之后的光输 出为所述时间段开始时的光输出的至少约75%。所述混合物可以基本上不含ATP或荧光素 酶。所述温度为约20°C至约35°C。所述温度可以为约0°C至约6°C，且所述时间段为至少 约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之 后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90%。所述时间段之后的光输出可 以为所述时间段开始时的光输出的至少约50%。所述方法还可以包括在步骤（b)之后，将 所述储存的混合物与（i)荧光素酶和、（ii)ATP或ATP源或（iii)其组合合并以形成第二 混合物，以及检测所述第二混合物中所产生的发光度。所述混合物可以具有至少约5至约 9的pH。所述混合物可以包含至少约5:95至约75:25的L-荧光素与D-荧光素的比率。
[0028] 本公开涉及用于配制用于荧光素酶反应的组分的方法。所述方法包括：（a)将 D-荧光素和L-荧光素合并以形成混合物，（b)将所述混合物在约0°C至约35°C的温度下 储存至少约2天的时间段。当在包含荧光素酶的测定物中与样品合并时，所述混合物允许 产生光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约 50%。所述混合物可以基本上不含ATP或荧光素酶。所述温度可以为约20°C至约35°C。 所述温度可以为约〇°C至约6°C，并且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约 12周。所述时间段可以为至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始 时的光输出的至少约90%。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出 的至少约50%。所述方法还可以包括在步骤（b)之后，将所述储存的混合物与（i)荧光素 酶、（ii) ATP或ATP源或（iii)其组合合并以形成第二混合物，以及检测所述第二混合物中 所产生的发光度。所述混合物可以具有至少约5至约9的pH。所述组合物可以包含至少约 5:95至约75:25的L-荧光素与D-荧光素的比率。
[0029] 本公开涉及用于增加发光信号的半衰期的方法。所述方法包括：(a)使包含荧光 素酶的样品与包含D-荧光素、L-荧光素和ATP的混合物接触以形成反应测定物；以及（b) 检测发光度；其中与包含D-荧光素且基本上不含L-荧光素的可比较的反应测定物相比，发 光信号的半衰期增加。所述发光信号的半衰期可增加至少约25%。所述发光信号的半衰期 可增加至少约5倍。所述样品可以包括表达荧光素酶的细胞。所述细胞可以被裂解，并且 所述样品可以包含裂解的细胞，所述裂解的细胞包含荧光素酶。所述样品可以包括澄清的 细胞提取物，所述细胞提取物包含荧光素酶。所述细胞可以为原核细胞或真核细胞。D-荧 光素可以为D-5'氟荧光素，L-荧光素为L-5'氟荧光素，并且其中可比较的反应测定物包 含D-5'氟荧光素且基本上不含L-5'氟荧光素。
[0030] 本公开涉及用于进行荧光素酶反应的方法。所述方法包括：(a)将组合物与样品 和ATP或ATP源、荧光素酶或其组合合并以形成反应测定物，所述组合物包括L-荧光素和 D-荧光素；以及（b)检测产生的发光度，其中与未包含L-荧光素的组合物相比，如果所述 组合物在约〇°C至约35°C的温度下储存至少约4小时的时间段，则所述组合物具有增加的 稳定性。当在包含荧光素酶和ATP的测定物中与样品合并时，所述储存的组合物允许产生 光输出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50%。 所述增加的稳定性可以包括增加的储存寿命和/或增加的信号稳定性。所述时间段可以为 至少约12小时，所述温度为约0°C至约6°C或约20°C至约35°C。所述样品可以包含荧光素 酶，且所述组合物可以包含ATP。所述样品可以包含ATP，且所述混合物包含荧光素酶。所 述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约75%。所述组合物可以 基本上不含ATP或荧光素酶。所述温度可以为约20°C至约35°C。所述温度可以为约0°C至 约6°C，且所述时间段为至少约2周。所述时间段可以为至少约12周。所述时间段可以为 至少约26周。所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约90%。 所述时间段之后的光输出可以为所述时间段开始时的光输出的至少约50%。所述方法还包 括在步骤（b)之后，将所述组合物与⑴荧光素酶、（ii)ATP或ATP源或（iii)其组合合并 以形成混合物，以及检测所述混合物中所产生的发光度。所述组合物可以具有至少约5至 约9的pH。所述组合物可以包含至少约5:95至约75:25的L-荧光素与D-荧光素的比率。
[0031] 本公开涉及用于配制用于荧光素酶反应的组分的方法，所述方法包括将D-荧光 素和L-荧光素合并以形成组合物，其中与未包含L-荧光素的组合物相比，如果所述组合物 在约0°C至约35°C的温度下储存至少4小时的时间段，则所述组合物具有增加的稳定性， 其中当在包含荧光素酶和ATP的测定物中与样品合并时，所述储存的组合物允许产生光输 出，并且其中所述时间段之后的光输出为所述时间段开始时的光输出的至少约50%。所述 增加的稳定性可包括增加的储存寿命和/或增加的信号稳定性。所述组合物可以基本上不 含ATP或荧光素酶。所述温度可以为约20°C至约35°C。所述温度可以为约0°C至约6°C， 且所述时间段为至少约2周。所述