二核苷多磷酸衍生物的新应用的制作方法

专利名称：二核苷多磷酸衍生物的新应用的制作方法
二核苷多磷酸衍生物的新应用 本发明涉及二核普多磷酸类似物和衍生物的应用。
二核苷多磷酸为包含两个通过多磷酸桥连接的核苷部分的一组化 合物。二核苷多磷酸形成重要族的化合物并且认为它们具有胞内和胞
外生物作用"2。
特别关注的一种二核苷多肽为二腺苷5\ 5'〃-pi，p4-四磷酸酯 (Ap4A)。认为Ap,A在原核生物和低等真核生物中起对细胞增殖和环境 应激的反应的作用并且在高级真核生物(eurkaryotes )的胞外信号传 导中起作用3人还报导了 Ap4A可以在确定的中风和帕金森病大鼠模型
的皮质和中脑中具有防护作用5。
已经报导了许多制备二核苷多磷酸的合成方法并且已经更具体地 尝试进行了对其生物作用的研究6'7。尽管如此，并且实际上广泛发现 了许多这些化合物且已知了它们许多年3 ，但是经证实难以确定这类化 合物的生物功能。实际上，有关这类化合物作用上的混乱已经产生了 不确定的提示，即它们可以作为"友或敌"起作用8。 一般而言，在有二 核苷多磷酸存在下获得体内或离体充分再现相关生物功能的结果相当
困难，其原因并不清楚，但是可能与水解不稳定性相关3。
有关研究和利用二核苷多肽类的尝试还受到了从天然来源中分离 和纯化这类化合物中遇到的常见困难的阻碍。例如，二腺苷多磷酸类
(ApnA; n = 2-6)表现出对生物流体和组织样品中的特异性酶促和非特 异性水解高度不稳定3',
本发明解决了现有技术中的问题。
本发明在一个方面中提供了式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐在制备用于如下情况中的一种或多种的药
剂中的应用
治疗局部缺血； 作为神经防护剂； 作为组织防护剂； 治疗疼痛；和 治疗炎症， 其中X选自<formula>formula see original document page 6</formula>其中X!和X'独立地选自H、 Cl、 Br和F; Y各自独立地选自S和0; Z各自独立地选自
_CX3"—， 一NH— ，——O——；
其中乂3和X"选自H、 Cl、 Br和F;
B:和B2独立地选自腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧咬、 月包嘧，定和"几苷；
S!和S2独立地选自核糖、2'-脱氧核糖、3'脱氧核糖、阿拉伯呋喃 糖苷及其开环形式；
V选自0、 1、 2、 3、 4和5; W选自0、 1、 2、 3、 4和5;且 V +W为2 — 6的整数。
我们发现通过我们对X和Z基团的选择，我们提供了化合物(和新 化合物)在有生物流体和组织样品存在下产生持久和可再现生物效果 的应用。因此，提供了能够在体内可再现的应用和新化合物。
为便于参考，本发明的这些和其它方面在适当部分的标题中描述。 然而，各部分中的教导不一定是对每一特定部分的限定。
优选方面<formula>formula see original document page 7</formula>X选自
<formula>formula see original document page 7</formula>其中Xi和X"虫立地选自H、 Cl、 Br和F。
在一个方面中，X为-NH-。
在一个方面中，X为 s
<formula>formula see original document page 7</formula>在一个方面中，X为-CX丄X2-。 在一个方面中，X〗和X2的至少一个为H。 在一个方面中，X'和乂2中至少一个为Cl。 在一个方面中，X'和X2中至少一个为Br。 在一个方面中，X'和X'中至少一个为F。 优选乂!和X'均为H。 优选X为-CXH X1和X2均为H。 Y
Y各自独立地选自S和0; 在一个方面中，至少一个Y为S。 在一个方面中，Y各自为S。 在一个方面中，至少一个Y为0。 优选Y各自为0。 Z
Z各自独立地选自
<formula>formula see original document page 7</formula>
其中乂3和X"选自H、 Cl、 Br和F; 在一个方面中，至少一个Z为-CXY-； 在一个方面中，Z各自为-CXY-; 在一个方面中，义3和X^中至少一个为H。 在一个方面中，义3和X"中至少一个为Cl。 在一个方面中，X3和X4中至少一个为Br。 在一个方面中，乂3和X4中至少一个为F。 优选乂3和乂4均为H。 优选Z为-CXY-且X3和X4均为H。 在一个方面中，至少一个Z为-NH-。 在一个方面中，Z各自为-NH-。 在一个方面中，至少一个Z为-0-。 优选Z各自为-0-。 Bi和B2
B!和B2独立地选自腺噪呤、鸟嘌呤、黄噪呤、胸腺嘧咬、尿嘧咬、 胞嗜咬和肌苷；
在一个方面中，Bi和B2中至少一个为尿嘧啶。 在一个方面中，B,和B2中至少一个为乌嘌呤。 优选B,和B2中至少一个为腺噪呤。
优选B,和B2中至少一个为腺噪呤且81和B2中的另一个为鸟嘌呤。 优选B,和B2中至少 一个为腺噪呤且B,和B2中的另 一个为尿嘧咬。 优选Bi和B2均为腺嘌呤。 Si和S2
S,和S2独立地选自核糖、2'-脱氧核糖、3'脱氧核糖、阿拉伯咬喃 糖苷及其开环形式。
优选S:和S2中至少一个为核糖。
优选S,和S2中至少一个为核糖的开环形式。
优选S!和S2中至少一个为核糖且S!和S2中的另一个为核糖的开
环形式。
优选Si和S2相同。
优选S，和S2为核糖。
V和w
V选自0、 1、 2、 3、 4和5。 W选自0、 1、 2、 3、 4和5。
V + W为2-6的整数，即V和W之和可以为2、 3、 4、 5或6 优选V为2。 优选W为2。 优选V + W为4。
其它方面和特征 优选式(l)的化合物为:
0
优选式(l)的化合物为:
优选式(l)的化合物为:
优选式(l)的化合物为:本发明的另一个方面提供了如上文所述的式(l)的化合物或其药 学上可接受的盐在制备用于如下情况中的一种或多种的药剂中的应
用
(a) 治疗与P2-受体相关的疾病和医学情况；
(b) 治疗与Al腺苷受体相关的疾病和医学情况；
(c) 减緩P2-受体的活性；
(d) 减緩Al腺苷受体的活性；和
(e) 通过哺乳动物细胞中的G蛋白门控内向整流K+(GIRK)通道调 节K+内向流量。
本发明在另一个方面中提供了选自如下的化合物<formula>formula see original document page 10</formula>优选4匕合物为AppspA。 优选化合物为A二醇ppCH2ppA二醇。 优选化合物为AppNHpppU。
局部缺血
在一个方面中，本发明涉及治疗局部缺血和局部缺血相关疾病和 病症的方法。这些治疗方法可以包括诱导局部缺血耐受，调节脑缺血 并且在局部缺血情况开始时延緩低氧去极化阶段的发作。局部缺血情 况在对人或动物体的器官或部分供血不足时发生。作为这种供血不足 的结果，身体的器官或部分缺氧和营养物，诸如葡萄糖。这可以导致 身体器官或部分受损。例如，如果对中枢神经系统(CNS)的任何部分的 供血中断，那么CNS该部分的神经细胞(或神经元)会快速变性。
特别地，本发明可以涉及化合物在制备用于治疗下列病症的药剂 中的应用局部缺血；整体缺血；脑缺血；神经细胞缺血，诸如与脊 柱损伤和头部创伤相关的神经细胞缺血；心肌缺血；心血管疾病，选 自高血压、心绞痛、稳定和不稳定的心绞痛、普林兹迈(Prinzmetal ) 心绞痛、心律失常、血栓形成、栓塞和充血性心力衰竭，包括慢性或 急性充血性心力衰竭；或特征在于因外周血管疾病导致的下肢局部缺 血的疾病，包括间歇性跛行；特征在于平滑肌痉挛的疾病，选自输 尿管痉挛、膀胱痉挛、子宫痉挛和肠易激综合征；或预防外科手术过 程中的血管收缩和/或缺血组织损伤，选自旁道移植、血管造影术、 血管成形术、移植过程中的器官保护、高血压危象或术后高血压。
神经性疾病和障碍
本发明可以用于治疗神经性疾病和障碍，特别是治疗神经元细胞。
这类治疗包括治疗脑外伤、脑或脑血管缺血、神经变性疾病、神经元 细胞中毒和保护神经移植物。
神经变性疾病为特征在于正常神经功能改变的一组病症，可以导 致神经元死亡(这些疾病中的大部分，尤其是晚期阶段与严重神经元缺 失有关)。这些神经变性疾病可以包括肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默 病、帕金森病和亨廷顿舞蹈病。
疼痛
在另一个方面中，本发明可以用于治疗疼痛。这类治疗包括治疗 与关节疾病(诸如类风湿性关节炎和骨关节炎)相关的疼痛，与癌症相 关的疼痛，术后痛，产后痛，与牙病(诸如龋齿和龈炎)相关的疼痛， 与灼伤(包括晒伤)相关的疼痛，治疗骨病(诸如骨质疏松症、恶性高钧 血症和佩吉特病)，与运动损伤和扭伤相关的疼痛。
炎症
在另一个方面中，本发明可以涉及治疗炎症。炎症可以因各种情 况导致，由此，例如本发明可以涉及治疗关节炎、心肌炎、脑炎、移 植物排斥、系统性红斑狼疮、痛风、皮炎、炎症性肠病、肝炎或甲状腺炎。
应激
在另一个方面中，本发明涉及治疗化学品和/或环境应激。特别地， 本发明可以涉及化合物在诱导神经预调节中的应用。在给予合适的化 合物后，这类神经预调节能够使神经组织耐受通常证明为致命性的化 学品和/或环境应激水平和/或在其中存活。本发明中所述化合物的这
种应用可以涉及这些化合物产生一氧化氮(NO)中的应用，而一氧化氮 可以作为组织对化学品和/或环境应激预调节中的介质起作用。
现在借助于实施例并且仅参照附图来进一步详细描述本发明，其
中
附

图1表示AppCH2ppG的合成； 附图2表示AppNHpppU的合成； 附图3表示A二醇ppCH2ppA二醇的合成。
附图4表示顺向(上2)和逆向(下2)诱导的尖峰信号群的概况图， 解释了电极的位置；
附图5表示增加量的AppCH2ppA对顺向诱导的尖峰信号群(附图 5A),逆向诱导的尖峰信号群(附图5B)和激发突触后电流EPSCs(附图 5C)的作用;
附图6表示吡,醛-磷酸-6-偶氮苯基-2'，4'-二磺酸(PPADS)和 AppCH2ppA对顺向尖峰信号的影响；
附图7表示环戊基teophylline (CPT)和AppCH2ppA对顺向尖峰 信号的影响；
附图8表示a， p-亚曱基-ATP对顺向尖峰信号的作用； 附图9表示增加量的ATPyS对顺向尖峰信号的作用； 附图10表示二肌苷四氢磷酸酯(IpJ)和AppCH2ppA对顺向尖峰信 号的影响；
附图11表示二肌苷四氢磷酸酯(IpJ)和AppCH2ppA对逆向尖峰信 号的影响；
附图12表示2-苯基-4，4，5，5-四曱基咪唑啉-l-氧基3-氧化物 (PTIO)和AppCH2ppA对顺向尖峰信号的影响；
附图13表示在22。C下AppCH,ppA对顺向尖峰信号的影响； 附图l4表示在36。C下AppCH2ppA对顺向尖峰信号的影响。 现在在下列实施例中进一步详细描述本发明。
将在Bruker Esquire 3000机器上进行的电喷身质谱(ES-MS)设定 在100%碎片强度。在包含0. 1°/。乙酸的1:1乙腈水中上样。在400匪z Bruker UUrashield上记录质子和磷NMR光谱，其中在020中样品在 "0K。将64次扫描用于质子光谦，1024次扫描用于磷。为了简单性，
实施例 仅描述用于化合物鉴定的那些NMR信号。
化合物的制备 AppCH2ppG
将IO x lml的LysU反应混合物部分制成等分部分。该混合物包 含在pH8. 0的50mMTris-HCl緩冲液中的2 mM L-赖氨酸、1G mM MgCh、 160 pM ZnCl2和6U焦磷酸酶711。将核苷酸加入到8 inM ATP和4 mM GMPPCP (oc ， P -亚甲基-鸟苷-三磷酸)中，涡旋该混合物并且将LysU 加入至9 pM浓度(二聚体)。然后将该混合物在38。C下孵育并且通过 使用2 ml SOURCE 15Q (Amersham Biosciences)离子交换柱的HPLC 监测反应，所述的柱用50 raM Tris-HCl緩冲液(pH 8.0)装填并且用0 -0. 5 M梯度的盐以2ml/分钟在5分钟内洗脱9。 25分钟后，ATP和 GMPPCP的峰(预先在5. 5分钟和5. 2分钟时观察)消失并且在7. 2分钟 时被ApA峰取代并且在6. 8分钟时被靶标取代。持续孵育在1小时后 将Ap4A转化成Ap3A (5. l分钟)，无靶标降解。使用装填了水的60ml SOURCE Q柱纯化AppCH2ppG，用0 - 2M梯度的TEAB (碳酸氢三乙铵緩 冲液)以8 ml/分钟在30分钟内洗脱并且冻干以便在-20。C下储存9'12。 SoQ/NaCl HPLC显示单峰并且产物具有848.9 m/z的ES-MS ( M-H )。
1H NWIR: 8.39 s, 8>H-i<D), 8.15 (W, s, 2-H-Ad)' 8.03 (州,s, 8-H-GU), 6.04 (州,s, 1'-H-riblAd])， 5.82 (W, s. 1'-H-rib[Gu〗),2.46
未观察到2-H-Gu推测的不稳定， 31P刚R: 8.74 (2P, m. p-P), - 10.63 (2户,m' a-P).
产率为90°/。+ AppNHpppU
AppNHpppU的LysU合成需要NH取代的腺苷四磷酸，它并非可得 到的。因此，我们使用了基于脱水剂EDC(l-乙基-3-(3-二曱氨基丙基)
碳-二亚胺)的化学偶联13。 amppnhp (腺苷- ( P ， y -亚氨基)三磷酸， 50 mg)和UDP(尿苷二磷酸，150 mg)溶于10x 1 ml等分部分中包含 75 mM MgCh的pH 6. 5的2 M HEPES。将400 mg EDC加入到各等分部 分中并且将该混合物在37。C下孵育，通过SoQ/NaCl HPLC (UDP 3.8 分钟，AMPPNHP 4.7分钟)再次进行监测。12小时后，在6.1分钟和 7. 0分钟观察到两个产物峰。用SoQ/TEAB柱提取它们并且冻干9' 12。 通过SoQ/NaCl HPLC证实两个产物均显示出单一傳带，6. 1分钟具有 788.6 m/z的ES-MS (M-H)并且鉴定为Up4U,而7.0分钟具有与 ApppNHppU相匹酉己的890.7 m/z。
ApppNHppU 1H NMR: 8.52 (甸s' 8-H-Ad), 8.21 (州,s, 2-H-Ad)' 7.87 s, 6-H-Ur)' 6.08 (f〃, s. 1'-H-ribAdl), 5.90 (2H， d 1'-H-rib[Ur
和'5^H-Ur),
未观察到3-H-Ur (推测不稳定)，0-NH-0模糊，"P NMR:复杂 多重性的三个接近谱带，-10. 89, -10. 97和-11. 25。将后者暂时鉴定 为a-P, (3-P和e-P重叠。Up4lTH腿:7.91 (2H， s， 6—H-Ur) ， 5.93 (4H， s， l'-H-rib和5-H-Ur) 31P NMR:在-ll. 46 ppm观察到单i普带 (d m)。与起始AMPPNHP相比产率为45% (但是仍然回收了 一定的原料)。
A 二酵ppCH2ppA 二醇
将AppCH2ppA(100mg，预先通过LysU偶联由ATP和AMPPCP [ oc ， (3-亚曱基-腺苷5'-三磷酸]制备)9溶于2 ml蒸馏水。加入150 pi 0. 3 M高》典酸钠水溶液，10分钟后加入50 pi 0. 5 M硼氢化钠水溶液(警 告仏放出)。通过作为标准的SoQ/NaCl HPLC监测反应，伴AppCH2ppA 在5. 8分钟的峰在氧化成二醛时为向上移动至6. 2分钟并且在还原成 二醇时下落至4. 4分钟。通过SoQ/TEAB9' 12分离得到两个主要的镨带， 提取它们并且冻干。通过SoQ/NaCl HPLC发现两者均显示单峰，其中 较大的产物具有836. 9 m/z的ES-MS (M-H),而较少的产物具有585. 7 m/z。它们分另'J与A 二醇ppCH2ppA 二醇和A 二醇ppCH2pp相匹酉己。A 二醇ppCH2ppA
二醇 1H8.34 (2H, s, 8-H>Ad)， 8.13 (2H, s,
2朴Ad)， 5邻(2H s, r-H"b), 3.。7 (州,s, 2'Wrib), 3.80 (4W， s, 3'朴rib), 3.70 (4W, s, rib~CH2-0)， 2.31 (2H. t, O备O) 31P ,: 7.17 (2P, q, M3)， -".16 (2P, d, a-P). A 二醇ppCH2pp1H N隨:8.41 (W, s, 8-H-Ad), 8.22 s. 2-H-Ad), 6.01 (f/i s, 1'-H-rib), 4.01 (2H， s, 2'-H-rib), 3:74 (4" m. 3'-H-rib和rit>CH;rO), 2.36 (2R t O-CHrO) 31P NMR: 7.50 m, P-P)， 6.45 (7P， q d, y墨P). -10-56 "P. d, 5-P), -11.21 (fP, d m, a-P).
产率为80%。
生物试验
需要下列生物数据以便确定二核苷多磷酸类似物的作用和机理。 关键的是，如果证实化合物为P2和/或Al受体激动剂，那么可以预计 它们具有令人印象深刻范围的潜在治疗特性。在过去的25年中，已经 进行的许多研究提示用于中枢神经系统(CNS)和外周神经系统(PNS)的 P2和/或Al受体激动剂促进各种CNS活性药物的作用或与之发生协同 作用，所述的药物包括止痛药、抗精神病药、抗抑郁药、抗焦虑药、 促智药/认知促进剂和各种对与中风相关的CNS损伤有效的活性剂。此 外，这类受-
抗中风和局部缺in
作为Al受体激动剂起作用的化学活性剂表现出促进导致神经元 兴奋性和兴奋性氨基酸(EAA)释放的稳定的神经膜电位22。阻断EAA释 放由此防止了与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体活化相关的神经中毒 后遗症。Al受体激动剂还可以减少与中风相关的细胞死亡和海马神经
变性22。
抗癫痫
作为Al受体激动剂起作用的化学活性剂在动物模型中降低各种 化学和电刺激诱发的癫痫发作活动23'24。在电引起的发作模型中，Al 受体激动剂为减轻癫痫发作严重程度和缩短期限而没有明显改变癫痫
发作阈值的抗惊厥剂"。 抗神经变性
与局部缺血、低氧和癫痫相关的神经元超兴奋性也基于与老化相
关的神经变性过程是广泛可接受的。作为P2和/或Al受体激动剂起作 用的化学活性剂减轻EAA神经毒性并且产生的导致神经细胞死亡的4丐 动态平衡改变可以反映出与阿尔茨海默病(AD)和帕金森病(PD)相关的 更敏锐的长期改变的急性表现25。激动剂为起抑制自由基产生作用的 有效的抗炎药"且由此可以在提供可能的AD治疗中提供超过并且高于 上述对神经递质介导的神经情况的直接作用的额外有益性。Al受体激 动剂可以减少紋状体多巴胺(DA) Dl受体的高度亲和力27。在功能上， Al激动剂阻断DA Dl受体-介导的利血平化的小鼠的运动活跃。或者， 激动剂可以减弱家兔中选择性DA Dl活化诱导的口周运动障碍。精神 运动功能的神经化学中的多巴胺能与嘌呤能(purinergic)系统之间 的这种动态相互关系为通过Al受体调节改善多巴胺能机能障碍提供 了新的可能性。
抗失眠
将作为Al受体激动剂起作用的化学活性剂直接给药入大脑引起 了类似于在深度睡眠中观察到的EEG分布型，表现为REM睡眠增加与 导致总体睡眠增加的REM睡眠潜伏期减少28。 Al选择性激动剂可以在 引起慢波睡眠(SWS)增加前抑制SWS和反常睡眠(PS)。
止痛
将ATP施用于感觉传入神经产生超兴奋性和强烈疼痛感觉。核苷 酸还可以在给药局部位点上诱导感受伤害反应并且可以促进对其它有 害刺激的感受伤害反应"。ATP的前感受伤害作用由存在于感觉传入神 经上和脊髓中的P2X受体介导。同源P2X3和异源P2X2/3受体显然位 于特异性传递感受伤害信号的感觉神经上3"。ATP从大量细胞类型中释
放(例如交感神经、内皮细胞、内脏平滑肌)作为对创伤的反应"并且
存在大量证据，即P2X3受体活化可以启动和促使于内脏伤害感受相 关的外周和中枢致敏31。 P2X3受体表达在外周感觉纤维受损后在感觉 传入神经和脊髓中得到增量调节32。因此，可以预计研发选择性生物 可利用的P2X3受体拮抗剂为治疗疼痛提供了新的化合物。
相反，作为Al受体激动剂起作用的化学活性剂的给药在广泛动物 模型中提供了疼痛緩解(例如小鼠热板试验、小鼠-尾摇摆试验、大鼠 福尔马林试验、小鼠腹部收缩试验"'"'"'35。 Al激动剂还有效地緩解大 鼠模型的神经性疼痛36并且抑制因脊柱注射P物质和谷氨酸激动剂 MDA引起的与疼痛相关的行为。在机制方面，已知Al受体激动剂可 抑制谷氨酸释放入脊髓液并且还降低大鼠P物质的脑脊液水平"'"'38。 谷氨酸为与临床疼痛状态相关的脊髓背侧角神经元异常超兴奋性的关 键介质(中枢致敏)39。 P物质为伤害感受反应的另一种关键介质29'37'38。 Al激动剂还表现出在緩解人疼痛中的应用38。 Al激动剂的脊柱给药緩 解了神经性疼痛患者的异常性疼痛，而不会影响正常的感觉。输注改 善了临床疼痛模型中的疼痛症状，从而减轻了患有神经性疼痛的患者 的自发性疼痛、进行性痛觉过敏和异常性疼痛。此外，手术过程中低 剂量输注激动剂可以减少对挥发性麻醉药和术后阿片类止痛药的需求
37' 40
一般方法 海马切片制备
本研究针对21-日龄的Wistar大鼠(WAG/GSto， Moscow, Russia) 进行。在快速断头后，即刻将大鼠大脑转移至培养皿中，其中包含冷 却的(4。C) 120 mM NaCl、 5mM KC1、 26mM NaHC03、 2mM MgCh和20 mM 葡萄糖的组合物溶液。可以不使用4丐盐以减少可能的神经元损害。用 95%02/5%0)2气体混合物使该溶液恒定发泡以便维持pH 7. 4。用剃刀刀 片沿泡状纤维手动切下海马切片(300-400iliM厚度)以保护兴奋连接的 片层结构。在预孵育和实验过程中，将切片完整地保持浸入pH7.4的
胞外溶液，它由135mM NaCl、 5raM KC1、 26mM Na跳、1. 5mM CaCl2、 1. 5mM MgCh和20mM葡萄糖组成，其中在30-31。C下用95% 02/5% CO) 使该溶液持续发泡。在实验过程中，所述的胞外溶液还包括25-50mM 印防己毒素(RBI， Natick， MA， USA)，以^更抑制中间神经元的抑制活 性。电生理测量值为预孵育至少2小时后的记录。
电生理测量
用海马的CA1分支区域中的标准全细胞膜片钳技术记录作为对 Schaffer侧枝/联接途径刺激反应的兴奋性突触后电流(EPSCs)。为了 防止CA3区域传播电活性，通过制备与延伸至莒藓纤维层的锥体层成 直角的切片制备小-切片。用于膜片吸移管的pH 7.2的胞内溶液由 lOOmMCsF (Merck， Darmstadt, FRG) 、 40mMNaH2PO4、 lOmM HEPES-CsOH、 10mM Tris-HC1组成。通常将2-3mM N-(2， 6-二曱基-苯基氨基曱酰基 甲基)-三乙基铵溴化物(QX-314; Tocris Cookson， Bristol, UK)加 入到胞内溶液中以便阻断电压控制的钠电导。在两极水平拔具上从软 硼硅酸盐玻璃中拉出膜片吸移管。当火焰抛光的和填充胞内溶液时， 它们具有的电阻为2-3MQ。为了使CA1锥体神经元的细胞体显现，使 用从微量吸移管中喷出的盐水除去oriens层和海马白质。在400ms 间隔，用12-指ADC宽对电流进行数字取样，在3kHz处过滤并且将数 据储存在硬盘上以便进一步分析。在整个实验过程中监测存储电阻并 且一般在6 - 9MQ。弃去来自实验过程中存储电阻改变25%以上的细胞 的数据。使用Ni/Cr电极记录胞外区域电位。将尖峰信号群数字化并 且储存在计算机磁盘上。将拮抗剂的受体激动剂作用测定为平均比值 1/1。，其中I为物质作用下的电流并且1。为对照组盐水中的电流。为 了刺激Schaffer侧枝/联接途径输入，双极Ni/Cr电极位于切片表面。 通过隔离的刺激器HG 203 (Hi-Med， London, UK)在0. 066-0. 2Hz下 递送0.1-1 ms期间的电流脉沖(10-100pA)。
实验1
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群(附图5A)、逆向诱导的尖峰信号群(附图5B)和兴奋性突触 后电流EPSCs(附图5C)中振幅改变的时程。随时间的改变，将增加量 的Ap2CH2p2A施加在大鼠海马切片上。因此，在10分钟后施加1. 9jLim Ap2CH2p2A，在14分钟后增加至3. 7pm并且在18分钟后增加至7. 4]um。
在本实验中用于诱导顺向(上2)和逆向(下2)诱导的尖峰信号群 的电极位置如附图4中所示。发现AppCH2ppA在包括CA3-CA1突触的 海马中(附图5A)的所有突触途径中(附图4)可再现地产生顺向引起的 场电位的快速并且可逆抑制。附图5A中在右侧的时程显示尖峰信号群 的起始痕量(5-倍平均值)，相当于时程中的点l(对照组)和 2(Ap2CH2ia作用)。
与顺向引起的场电位相反，在CA1锥体神经元(附图5C)中记录的 逆向尖峰信号振幅(此处和下文中的CA3-CA1突触)(附图5B)以及 EPSCs保持不变。EPSC衰变也未改变，提示AppC仏ppA也不调节EPSCs 的薩DA成分(附图5C)。
相反，文献表示Ap,A谦导兴奋性突触后电流和顺向引起的场电位 抑制"。这些结果还证实难以再现并且不可靠。
实验2
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。8分钟后，施加吡喷醛-磷酸-6-偶氮 苯基-2',4'-二磺酸(PPADS)(2 0inM)。然后在12分钟后应用Ap2CH2p2A。
发现使用吡。多醛-磷酸-6-偶氮苯基-2' ， -二磺酸(PPADS)完全消 除了 AppCH2ppA对顺向尖峰信号的阻断作用(附图6)。附图6在左侧表 示了顺向诱导的尖峰信号群中振幅改变的时程并且在右侧上显示了尖 峰信号群的起始痕量(5-倍平均值)，相当于时程中的点l(对照组)和 2 (Ap2CH2p2A/PPADS作用)。由于PPADS为众所周知的宽带P2-受体族拮
抗剂15"，所以这一结果提示观察到的AppCH2ppA作用可以由新P2-族 受体以非常规的药理学机制介导。
实验3
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。9分钟后，施加a， p-亚曱基 -ATP(100iaM)(附图8)。
实验4
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。随时间的改变，将增加量的ATPyS 施加在大鼠海马切片上(附图9)。因此，在10分钟后施加10pm ATP yS;在15分钟后增加至2Qjam; 21分钟后增加至5G^im;并且在29分 钟后增加至1Q0nm。
实验3和4为使用公知P2X和/或P2Y-族受体激动剂的激动剂实 验。然而，cc， P-亚甲基-ATP(附图8)和ATPyS(附图9)不能按照与 AppCH2ppA相同的方式抑制顺向引起的场电位。仅观察到的作用为在极 高核苷酸浓度(10(^M)下弱的緩慢发生抑制。由于使用了高浓度的激 动剂，所以这类作用至多为非特异性的。因此，显然AppCH2ppA作用 不能由主要的P2X或P2Y-族受体介导。考虑到ApnAs作为P2Xh、 P2Yi、 P2Y;和P2Y4受体激动剂在神经组织中起作用的已知能力，所以这一结 果可能令人意外5。
实验5
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程(附图10。 10分钟后施加二肌苷四磷酸 (IpJ)(20jaM)。然后在20分钟后，i;^Ap2CH2p2A (7. 4jaM)。
实验6
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中逆向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程(附图11) 。 10分钟后施加二肌苷四磷酸 (Ip4I) (20jliM)。然后在16分钟后，施力口Ap2CH2P2A (7. 4juM)。
在实验5和6中评价了预先在大鼠脑突触末端上鉴定的P4-二核 苷酸受体可以介导AppCH2ppA的作用的可能性17。然而，发现甚至添加 高浓度的P4拮抗剂二肌苷四磷酸(IpJ) (20^M)不改变AppCH2ppA对顺 向诱导的尖峰信号群中振幅的改变的作用(附图10)。此外，发现添加 IpJUOjiM)不导致AppCH2ppA对逆向诱导的尖峰信号中振幅改变具有 作用(附图11)。这些结果完全排除了 P4-二核香酸受体介导的可能性。 因此，这些结果提示新的P2-族受体可以介导观察到的AppCH2ppA作 用。
实验7
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。10分钟后施加荷苞牡丹碱(50)iM)。然 后在20分钟后，施加Ap2CH2p2A(7. 4pM)。
荷苞牡丹碱的存在不影响AppCH2pPA诱导的对顺向引起的场电位 的抑制。
实验8
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。10分钟后施加六甲季铵(100pM)。然 后在20分钟后，施加Ap2CH2p2A(7. 4pM)。
六甲季铵的存在不影响AppCH2ppA诱导的对顺向引起的场电位的抑制。
实验9
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程(附图7)。 10分钟后施加士的宁 (500nM)。然后在20分钟后，施加Ap2CH2p2A (7. 4)uM)。
士的宁的存在不影响AppCH2ppA诱导的对顺向引起的场电位的抑
制。
实验10
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。10分钟后施加环戊基teophylline (CPT)(lpM)。然后在26分钟后，施加Ap2CH2p2A(7.4jLiM)。
CPT的存在消除了 AppCH2ppA诱导的对顺向引起的场电位的抑制。
实验7、 8、 9和IO研究了介导AppCH2ppA作用的受体的位置。可 以推定对顺向尖峰信号的精确抑制必定因单独调节突触后神经元兴奋 性而产生，这是因为AppCH2ppA完全不调节突触传递。此外，如果逆 向引起的场电位不受AppCH2ppA调节，那么调节位点必须位于突触后 CA1树突中。众所周知CA1锥体神经元树突为通过大量受体，包括胆 碱能和GABA能受体介导的皮质调节的重要靶标。因此，这些实验使用 已知的Y-氨基丁酸(GABA)拮抗剂(实验7)、毒蕈碱性(实验8)和甘氨 酸受体(实验9)。然而，这些拮抗剂中没有一种影响AppC仏ppA诱导的 对顺向引起的场电位的抑制。相反，观察到给予Al腺苷受体拮抗剂 CPT可消除AppCH2ppA的作用(附图7),由此提示AppCH2ppA的作用由 PPADS-敏感性P2受体活化的Al腺苷受体活化下游介导。
这一提示得到了如下事实的支持，即预先已经证实对海马切片给 予腺苷(5^M)以与AppCH!ppA类似的方式抑制顺向尖峰信号18。然而， 还证实腺苷给药以与APPCH2ppA给药后观察到的作用相反的方式消除 了 EPSC振幅19(附图5C)。因此，AppCH2ppA介导的作用完全比单独的 腺苷更具有选择性。
实验11
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。5分钟后施加2-苯基-4， 4， 5， 5-四曱基 咪唑啉-1-氧基3-氧化物PTIO(lmM)(附图12)。然后在ll分钟后，施 加Ap2CH2p2A(2. 5 pM)。PTI0的应用将AppCH2ppA-介导的对顺向引起的场电位的抑制程度 减少了 50%以上(附图12)。
已经证实一氧化氮(NO)介导对P2-受体活化的反应的腺苷流出2°。 因此，预计已知的NO特异性清除剂PTIO的应用影响AppCH2ppA-介导 的对顺向引起的场电位的抑制，只要它涉及P2受体。在这种情况中， 观察到的减少与具有直接作用的P2受体一致。因此，可以推定 AppCH2ppA-介导的作用通过连接因结合AppCH2ppA产生的PPADS-敏感 性P2受体活化的途径进行，其中产生的NO随后刺激腺苷的胞内合成， 由此导致排他的突触后Al受体活化。
实验12
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的 尖峰信号群中振幅改变的时程。10分钟后施加腺苷脱氨酶(约2U/ml)。 然后在20分钟后，施加Ap2CH2p2A(7. 4 jiM)。
存在的腺苷脱氨酶消除了 AppCH2ppA诱导的对顺向引起的场电位 的抑制。
在早前研究中已经观察到核苷-活化的受体使得海马神经元中谷 氨酸释放的突触前抑制21。该过程由所谓的P3受体(P2Y-茶碱-敏感性 受体)介导并且具有与观察到的AppCH2ppA作用的一定相似。然而， AppCH2pPA作用被腺苷脱氨酶消除这一事实与P3机理不一致，表明 AppCH2ppA作用并不通过类似的途径介导。
实验13
在22°C (附图13)和36°C (附图14)下添加Ap2CH2 p2A(2. 5一前后
测定按照一般操作步骤制备的大鼠海马切片CA1区中顺向诱导的尖峰 信号群中振幅改变的时程。
这种作用的温度依赖性与涉及小分子介质，诸如腺苷的扩散的信 号传导途径一致。
实验14
通过二腺苷多磷酸的不能水解的类似物调节NMDA-受体介导的电
流
二腺苷多磷酸为可以在中枢神经系统突触末端中起神经递质作用 的天然化合物。我们在本文中证实二腺苷多礴酸的不能水解的类似物 AppCH2ppA可以影响NMDA-受体-介导的通道的功能。在分离的海马锥 体神经元中，以低微摩尔浓度施用的AppCH2ppA以浓度依赖性方式增 加NMDA-活化的电流的振幅。AppCH2ppA的这些作用在有噪呤P2受体 拮抗剂PPADS和活性蓝存在下得到消除，从而提示AppCH2ppA的作用 被嘌呤受体活化介导。AppCH2ppA的作用在有EDTA存在下被除去，表 明主要以微量存在于胞外溶液中的某些二价阳离子涉及P2-受体活化 下游观察到的作用。此外，AppCH2ppA的作用在用酪氨酸蛋白激酶抑制 剂染料木黄酮(genestein)的非特异性抑制剂预处理神经元后得以消 除。这些数据能够共同提示AppCH2ppA强化的NMDA-电流因通过经某些 二价阳离子，最可能的是Zn2+减少对NMDA受体的强烈抑制的酪氨酸激 酶P2受体-依赖性活化所致。
结果如附图15和16中所示。
附图15表示嘌呤P2受体介导AppCH2ppA(l jiM)对分离海马锥体 神经元中记录的NMDA受体-活化的电流的调节。
NMDA受体-活化的电流由1-2秒长的共同施用天冬氨酸(ASP) (1 mM)和甘氨酸(lO iaM)引起。在不含Mg^溶液中Vh--lOO mV。
(a) 在对照组、有AppCH2ppA存在和洗涤掉AppCH2ppA后的NMDA-活化电流的有代表性的痕量。
(b) AppCH2ppA和其它嘌呤激动剂ADP(l nM)、 UTP(l 一 、 UDP (1 pM)对NMDA-电流的峰值振幅的作用的统计。
(c) 非特异性噪呤P2受体拮抗剂PPADS对NMDA-电流的 AppCH2ppA-介导的强化的抑制。
(d) AppCH2ppA对对照组条件和有P2拮抗剂PPADS存在下NMDA-电流的峰值振幅的作用的统计。
(e) P2Y受体拮抗剂活性蓝(RB)对AppCH2ppA-介导的作用的抑制。 附图16表示AppCH2ppA调节NMDA受体-活化的电流因二价阳离子 产生的强烈抑制解除所介导。
(a) 在有二价阳离子螯合剂EDTA存在下消除NMDA-活化的电流的 增强。在对照组、有EDTA存在、有AppCH2ppA和EDTA存在下NMDA-活化电流的有代表性的痕量。
(b) AppCH2ppA对对照组条件和预先施用EDTA后NMDA-电流的峰 值振幅的作用的统计。
(c) 通过酪氨酸蛋白激酶染料木黄酮的非特异性抑制剂抑制 AppCH2ppA-介导的对NMDA-电流的增强。
(d) AppCH2ppA在对照组条件下和染料木黄酮预处理后NMDA-电流 峰值振幅的作用的统计。
材料和方法 材料
所有用于胞内和胞外溶液的化学品均购自Sigma Chemical Co. (St. Louis, M0， USA)。 细胞制备
在乙醚麻醉下对Wistar大鼠(12-17-日龄断头并且取出海马(或 小脑)。在溶液中将其切成切片(300-500 |am)，所述的溶液包含(按mM 计)150 NaCl; 5 KC1; 1.25 NaH2P04; 26 Na跳;1. 1 MgCl2; 10葡 萄糖；pH 7.4。然后将切片在32"C下与来自米曲審(Aspergillus oryzae)的0. 5 mg/ml蛋白酶(XXIII型) 一起孵育10分钟。通过在锥 体层CA3中局部振动分离从CA1和CA3锥体层中分离单一锥体细胞并 且根据其特征形式和部分保存的树突羊齿状结晶鉴定CA1海马锥体神 经元。
在分离后，细胞通常适合于记录2-4小时。在整个操作步骤过程 中，持续用95% 02和5% C02气体混合物饱和有切片的溶液以便维持 pH 7. 4。将测试物质溶于DMSO而得到10 mM的储备溶液浓度并且保持 冷冻在-40'C下的每日等分部分中。将这些物质溶于外部盐水至其即刻 实验前的终浓度。
电；虎{己录
使用计算机化的"Pharma-Robot"设置(Pharma-Robot， Kiev),通 过在"浓度钳"模式中分步施用天冬氨酸(l mM)和甘氨酸(l mM)诱导分 离的神经元中的NMDA-活化的电流(Krishtal等，1983)。
该仪器能够在15 ms内完全改变盐水。使用常规的膜片钳技术在 完整的细胞构型中记录跨膜电流。使用水平拔具(Sutter Instruments) 拉出膜片钳电极并且它具有1.4-1.8 的内部尖端直径和2.5-5 MOm的尖端电阻。胞内溶液包含(按mM计)70 Tris-PO" 5 EGTA; 40TEA-C1(氯化四乙基铵)；30Tris-Cl; 5 Mg-ATP; 0. 5 GTP; pH 7. 2。 胞外溶液的组成为(按mM计)130 NaCl; 3 CaCl2; 5 KC1; 2 MgCl2; 10 HEPES-NaOH; Q. 1 TTX; pH 7. 4。使用膜片钳放大器(DAGAN， USA) 记录电流。在3 kHz过滤跨膜电流，储存并且使用应用自带软件的 IBM-PC计算机分析。使用3分钟间隔记录NMDA响应值。所有实验均 在室温下进行(19-24°C)。
实验15
AppCH2ppA的抗伤害感受活性 实验操作步骤
CFA-诱导的热痛觉过敏。通过将IOO pl CFA (Sigma)在生理盐水 中的50%溶液注入大鼠右后爪的跖表面诱发单侧炎症。在使用如下文 对有害急性热试验所述的相同设备进行CFA注射后4 8小时测定对热刺 激的痛觉过敏。
热敏感性在机械测试后的每天，将大鼠放入热测试仪(Plantar test, UgoBasile， Italy),其中使它们自由活动。在适应30分钟后， 使恒定能量的IR刺激通过玻璃基底集中在足底部并且如Hargreaves 等1988所述通过光电监测器自动记录反射性足退缩的潜伏期。
在每一试验期限过程中，在约l5分钟间隔的三次依次试验中测试
每只大鼠(来自6只测试大鼠)。 结果
AppCH2ppA的抗伤害感受活性。为了表征AppCH2ppA的抗伤害感受 活性，在皮下给药后在CFA-诱导的热痛觉过敏动物模型中评价该化合 物的作用。AppCH2ppA显然可有效减轻热痛觉过敏(附图17)。
足内给予CFA诱导炎症48小时后，AppCH2ppA完全阻断热痛觉过 敏(附图l7)。 AppCH2ppA的抗伤害感受作用对受损爪具有特异性，因 为AppCH2ppA在测试剂量下对未受损伤的爪的爪退缩潜伏期改变的有 效性较低。AppCH2ppA在受损爪中的抗伤害感受作用延迟发作并且在注 射后3小时后出现。
附图17 -AppCH2ppA增加足内给予CFA后48小时的爪退缩潜伏期。 在对照组和CFA-注射的爪中的响应值(爪退缩潜伏期(平均值士SEM))。
AppCH2ppA(50 pmol/kg皮下)减弱了 CFA-诱导的大鼠热痛觉过敏。
附图18 - AppCH2ppA增加对侧(未发炎的)的爪中48小时的爪退 缩潜伏期。在对照组和对侧爪中的响应值(爪退缩潜伏期(平均值 士SEM))。
AppCH2ppA (50 )imol/kg皮下)减弱了大鼠热痛觉过敏。 * P<0， 05 CFA vs CFA+AP4 50 |uM $ P<0, 05 CFA vs对照组
** P<0，05 CFA vs对侧爪CFA+AppCH2ppA 50 |iM
P对照组vs CFA 1. 58E-12
P CFA vs CFA+AP4 50jliM 0. 000314
P CFA vs CFA+AP4 50 |iM 0.000501
P CFA vs对侧爪CFA+AP4 50 0.0043
P CFA vs对侧爪CFA+AP4 50 fiM 0.000335
P CFA vs对侧爪CFA+AP4 50 jiM 3. 67E-06
P CFA vs对侧爪CFA+AP4 50 jiM 1. 53E-07
P CFA vs对侧爪CFA+AP4 50 jiM 6. 54E-05
仪器描述
7370 足部试验
未受到限制的动物对热刺激的痛觉过敏测定 特征
行为端点的自动检测
通过反复测试未受影响的可靠性
生物测定灵敏度大于其它热或机械试验
将每只动物用作其自身的对照组
仪器主要由下列部分组成 . 可运动的I. R.(红外)源 大鼠围绕物位于的玻璃方格 控制器
装配3-室围绕物以便在包含大量动物时加速试验。在每一室内， 动物不受约束。
在适应期后，由操作者将位于玻璃底部下的I.R.源(参见图)直接 定向于后爪下。通过按压启动I.R.源的键开始试验并且启动数字固态 定时器。
当大鼠感觉疼痛并且退缩其爪时，骤然下降反射光而关闭I.R.源 并且终止反应时间计数器。
测定退缩潜伏期最接近0. 1 s。
校准放射计
通过I.R.放射计精确校准各足部试验以确保其I.R.源递送相同 的能量输出(以mW/平方cm计)和由此相同强度的伤害感受刺激。
最终使用者应考虑这种极其有用的辅助物热流I.R.源放射计Cat.
37300，它为电池操作自身完备的仪器，配有完整的I.R.探头，数字 计量器和用于摇尾和足部试验的适配器，所有部件均整齐地排列在带 有穿孔的泡沫衬垫的完整的塑料箱中。 37300放射计能够使实验者
i) 检查(且如果必要调整)I.R.发射。实际上，足部试验的I.R. 输出在1-2年过程中可以进行至减少2-3%,这是因为粉尘聚集在光学 镜头上，使I.R.灯泡变黑，意外的敲击，因热循环导致的部件老化等。
此外，就替换灯泡或维修电子设备而言，更明显等级的输出改变， 即8-10%可能发生。
ii) 确保两个或多个足部试验部件确切递送相同强度的伤害感受 刺激。如果必要，平衡它们。
iii) 已知绝对项中的I.R.能(ls期限的1 mW相当于1 mJ),即 比较任何文献中所述的相同或不同方法/仪器的有用数据。
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止匕夕卜，美国(例3口 Society for Neuroscience)和国际(例i口 International Association for the Study of Pain)科学会议上已 经提出了使用该装置的30篇以上的摘要
hup: //www. ugobasile. com/site/manuaIs/condensed— catalogu e. pdf
http://www. ugobasile. com/site/product2. asp ID=3
技术人员显然可以在不脱离本发明范围和实质的情况下对本发明的方 法和系统做出各种变型和变化。尽管已经结合具体的优选实施方案描 述了本发明，但是应理解请求保护的本发明不应过度限于这类具体的 实施方案。实际上，可以对实施本发明的所述方式进行各种变型，认 为它们均属于下列权利要求的范围内，这对化学、生物学领域或相关 领域技术人员而言显而易见。 参考文献
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权利要求
1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于如下情况中的一种或多种的药剂中的应用id="icf0001" file="S2006800090694C00011.gif" wi="88" he="26" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>治疗局部缺血；作为神经防护剂；作为组织防护剂；治疗疼痛；和治疗炎症，其中X选自-CX1X2-， -NH-，id="icf0002" file="S2006800090694C00012.gif" wi="35" he="20" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中X1和X2独立地选自H、Cl、Br和F；Y各自独立地选自S和O；Z各自独立地选自-CX3X4-，-NH-，-O-；其中X3和X4选自H、Cl、Br和F；B1和B2独立地选自腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、胞嘧啶和肌苷；S1和S2独立地选自核糖、2′-脱氧核糖、3′脱氧核糖、阿拉伯呋喃糖苷及其开环形式；V选自0、1、2、3、4和5；W选自0、1、2、3、4和5；且V+W为2-6的整数。
2. 权利要求1的式(l)的化合物的应用，其中Bi和B2中至少一个 为腺嘌呤。
3. 权利要求1或2中任意一项的式(l)的化合物的应用，其中B: 和B2均为腺噪呤。
4. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中S,和S2 相同。
5. 权利要求4的式(1)的化合物的应用，其中其中Si和S2为核糖。
6. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中Z各自为0。
7. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中V为2。
8. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中W为2。
9. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中X为 -CXX2-。
10. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物的应用，其中X工和X4匀为H。
11. 上述权利要求中任意项的式(l)的化合物或其药学上可接受 的盐在制备用于下列情况中的一种或多种的药剂中的应用(a) 治疗与P2-受体相关的疾病和医学情况；(b) 治疗与Al腺苷受体相关的疾病和医学情况；(c) 减緩P2-受体的活性；(d) 减緩A1腺苷受体的活性；和(e) 通过哺乳动物细胞中的G蛋白门控内向整流K+(GIRK)通道调 节K+内向流量。
12. 选自如下的化合物 (a) AppspA<formula>formula see original document page 4</formula>
13.基本上如本文所述的式(l)的化合物涉及实施例中的任意一 个中的应用。
全文摘要
本发明提供了具有式(I)的二核苷多磷酸类似物和衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于如下情况中的一种或多种的药剂中的应用治疗局部缺血、诱导局部缺血耐受、调节脑缺血、在局部缺血情况开始时延缓低氧去极化发作；作为神经防护剂；作为组织防护剂；治疗疼痛；和治疗炎症，其中X选自其中X¹和X²独立地选自H、Cl、Br和F；Y各自独立地选自S和O；Z各自独立地选自-CX³X⁴、-NH-、-O-；其中X³和X⁴选自H、Cl、Br和F；B1和B2独立地选自腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、胞嘧啶和肌苷；S₁和S₂独立地选自核糖、开链核糖、2′-脱氧核糖、3′脱氧核糖和阿拉伯呋喃糖苷；V选自0、1、2、3、4和5；W选自0、1、2、3、4和5；且V+W为2-6的整数。
文档编号A61K31/7084GK101180066SQ200680009069
公开日2008年5月14日 申请日期2006年2月1日 优先权日2005年2月3日
发明者A·D·米勒, J·A·坦纳, M·赖特, N·洛佐瓦亚 申请人:伊姆太斯有限公司