一种具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药，特别是一种具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备 方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤已经成为当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。肝癌 是指发生于肝脏的恶性肿瘤，全世界每年新发肝癌患者约60万，发病率居恶性肿瘤的第五 位，其死亡率仅次于胃癌和食道癌居第三位。我国每年死于肝癌的患者约11万，占全世界 肝癌死亡人数的45%。目前临床上广泛使用的合成的抗肝癌药物普遍存在着毒副作用如脱 发、贫血和胃肠不适等现象。因此加强肝癌治疗的研究，延长患者的生存期，改善患者的生 活质量是药学工作者的当务之急。中草药在抗肿瘤方面的应用历史悠久，从中草药中寻找 高效低毒的抗肿瘤活性物质，研制选择性强、毒副作用低的新型抗肿瘤药物是药学科研工 作者迫切解决的首要问题。
[0003] 小叶莲是小檗科桃儿七属植物鬼白Sinopodophyllumemodi(Wall.)Ying.的干 燥成熟果实。鬼白是一种具有悠久历史的药用植物，古代《神农本草经》中就有记载：杀大 毒，疗咳嗽喉疾，风邪烦感，失魄妄见。不入汤。以后的历代本草亦多有记载，主要用于活血 散结、祛风除湿、虫蛇咬伤、跌打、心胃痛、风寒咳嗽、月经不调、铁棒锤中毒、风湿筋骨痛及 气管炎等症。鬼白分布比较广泛，我国主要分布在四川、青海、西藏、甘肃、陕西。小叶莲作 为传统藏药始载于《月王药诊》，具有悠久的药用历史。化学成分研究表明主要含有木脂素 和黄酮类化合物，其中异戊烯基化黄酮是小叶莲中代表性的活性成分，具有重要而广泛的 生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗骨质疏松、预防老年痴呆、抗糖尿病、心脑血管保 护、雌激素样等。本发明所涉及的异戊烯基化黄酮类化合物及其生物活性，迄今为止未见有 专利或文献报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种具有抗肝癌 活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用，可有效解决制备具有抗肝癌活性的 异戊烯基化黄酮类化合物，实现制备抗肝癌药物的问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，该类化合物是从小叶莲药材中分离得到的桃儿七酮E(SinoflavonoidE)、桃儿七酮H(SinoflavonoidH)、桃儿七酮I(SinoflavonoidI)，分子 结构式分别为：
[0006]
[0007] 其制备方法是，以小叶莲6_9kg为原料，以2 - 5倍原料重量、体积比为75% -95%的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90 - 95°C，每次提取时间为1. 5 - 2小时，减压回 收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2 - 3. 2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸 乙酯、正丁醇萃取3次，每次2 - 3. 2L，时间为1. 5 - 2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱 色谱分离，依次用体积比为 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、 100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1 - 13L洗脱液，流速 为10 - 15mLmin\每350 - 500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测 分析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据 薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16个组份；将组份Fr. 5经S印hadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每 5 - 10mL为一流份，收集36个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以 体积比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显 色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份 29 - 36,得到3个亚组份Fr. 5-1，Fr. 5-2,Fr. 5-3 ;将Fr. 5-2经硅胶柱色谱纯化，用体积比 100 : 10、体积比100 : 15、体积比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脱液进行梯度洗脱，分别 收集洗脱液，收集体积比100 : 10石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮H，收集体积比 100 : 15石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮I，收集体积比100 : 20石油醚-丙酮洗 脱液得化合物桃儿七酮E。
[0008] 本发明制备的具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮E、桃儿七酮 H、桃儿七酮I具有抗肝癌活性，有效用于制备抗肝癌药物，具有实际的临床意义，经济和社 会效益显著。
【具体实施方式】
[0009] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010] 本发明在具体实施中可由以下实施例给出。
[0011] 实施例1
[0012] 本发明在具体实施中，具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物可由小叶莲 9kg为原料，以18L、体积比为95%的乙醇加热回流提取3次，提取温度为95°C，每次提取 时间为1. 5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3. 2L的蒸馏水中，依次以 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3. 2L，时间为1. 5小时；将乙酸乙酯萃 取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用13L 洗脱液，流速为15mLmin\每500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱 检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲 烷-甲醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到Fr. 1-Fr. 16个组份；将组份Fr. 5经S印hadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗 脱，每10mL为一流份，收集36个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层 板，以体积比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作 为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份4 - 16、流份17 - 28、 流份29 - 36,得到3个亚组份Fr. 5-1，Fr. 5-2,Fr. 5-3 ;将Fr. 5-2经硅胶柱色谱纯化，用体 积比100 : 10、体积比100 : 15、体积比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脱液进行梯度洗脱， 分别收集洗脱液，收集体积比100 : 10石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮H，收集体积 比100 : 15石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮I，收集体积比100 : 20石油醚-丙酮 洗脱液得化合物桃儿七酮E。
[0013] 实施例2
[0014] 本发明在具体实施中，具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物还可由小叶 莲6kg为原料，以30L、体积比为75 %的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90°C，每次提 取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油 醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经 硅胶柱色谱分离，依次用体积比为 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、 100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1L洗脱液， 流速为lOmLmin\每350mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分 析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据 薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16个组份；将组份Fr. 5经S印hadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每 5. 5mL为一流份，收集36个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以 体积比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显 色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份 29 - 36,得到3个亚组份Fr. 5-1，Fr. 5-2,Fr. 5-3 ;将Fr. 5-2经硅胶柱色谱纯化，用体积比 100 : 10、体积比100 : 15、体积比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脱液进行梯度洗脱，分别 收集洗脱液，收集体积比100 : 10石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮H，收集体积比 100 : 15石油醚-丙酮洗脱液得化合物桃儿七酮I，收集体积比100 : 20石油醚-丙酮洗 脱液得化合物桃儿七酮E。
[0015] 实施例3<