干物质计）含量为35-45g/L，黄豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麦芽浸膏 20-25 g，硫酸铵 0.5-0. 7g/L，硫酸镁 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧钾1.8-2. 3g/L，碳酸钙0.7 g/L，硫酸亚铁0.18 g/L，硫酸锰0.025 g/L;pH 4. 4〇
[0022] 湿黄蓝状菌细胞制备过程如下：黄蓝状菌ATCC34594经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。5L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至26-27 °C， 将黄蓝状菌种子液接种至发酵罐，接种比例为9-10%，通气比为0.9-1￥八￥分钟)，26-27 1€ 培养41-45小时，用过滤式离心机离心得到湿黄蓝状菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0023] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为5. 4,加入底 物2, 4' -二氯苯乙酮，使其浓度为90g/L，玉米浆（以干物质计）含量为19g/L，山梨坦单 月桂酸酯14g/L，木糖17g/L、麦芽糖12g/L、异丙醇6%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30 分钟；冷却至27°C时，加入湿黄蓝状菌细胞使其浓度为75g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)， 进行生物催化反应，反应时间为70小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液， 蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-2-氯-1- (4-氯-苯基）乙醇，反应转化率98%，产品收率 96%，对映体过量率99%。
[0024] 实施例3 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡 萄糖20g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体 培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0025] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35_45g/L，黄豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麦芽浸膏 20-25 g，硫酸铵 0.5-0. 7g/L，硫酸镁 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧钾1.8-2. 3g/L，碳酸钙0.7 g/L，硫酸亚铁0.18 g/L，硫酸锰0.025 g/L;pH 4. 4〇
[0026] 湿黄蓝状菌细胞制备过程如下：黄蓝状菌ATCC 34594经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至 26-27°C，将黄蓝状菌种子液接种至发酵罐，接种比例为9-10 %，通气比为0. 9-1V/ (V分 钟)，26-27°C培养41-45小时，用过滤式离心机离心得到湿黄蓝状菌细胞，用作生物催化反 应催化剂。
[0027] 生物催化转化：10L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为5. 4,加入底 物2, 4' -二氯苯乙酮，使其浓度为84g/L，玉米浆（以干物质计）含量为20g/L，山梨坦单 月桂酸酯13. 5g/L，木糖16g/L、麦芽糖13g/L、异丙醇5. 5%V/V(体积浓度），121°C高压灭 菌30分钟；冷却至28°C时，加入湿黄蓝状菌细胞使其浓度为73g/L，通气比为0. 15V/(V分 钟)，进行生物催化反应，反应时间为68小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应 液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-2-氯-l-(4-氯-苯基)乙醇，反应转化率98.5%，产品 收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
[0028] 实施例4 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡 萄糖20g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体 培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0029] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35_45g/L，黄豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麦芽浸膏 20-25 g，硫酸铵 0.5-0. 7g/L，硫酸镁 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧钾1.8-2. 3g/L，碳酸钙0.7 g/L，硫酸亚铁0.18 g/L，硫酸锰0.025 g/L;pH 4. 4〇
[0030] 湿黄蓝状菌细胞制备过程如下：黄蓝状菌ATCC 34594经斜面、摇瓶培养，得到 种子液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至 26-27°C，将黄蓝状菌种子液接种至发酵罐，接种比例为9-10 %，通气比为0. 9-1V/ (V分 钟)，26-27°C培养41-45小时，用过滤式离心机离心得到湿黄蓝状菌细胞，用作生物催化反 应催化剂。
[0031] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为5. 4,加入底 物2, 4' -二氯苯乙酮，使其浓度为86g/L，玉米浆（以干物质计）含量为19g/L，山梨坦单 月桂酸酯13. 5g/L，木糖156g/L、麦芽糖14g/L、异丙醇5. 5%V/V(体积浓度），121°C高压灭 菌30分钟；冷却至2. 5 °C时，加入湿黄蓝状菌细胞使其浓度为74g/L，通气比为0. 16V/(V 分钟)，进行生物催化反应，反应时间为69小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反 应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-2-氯-1-(4-氯-苯基)乙醇，反应转化率99%，产品 收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
【主权项】
1. 一种黄蓝状菌细胞生物催化制备（S)-2-氯-I-(4-氯-苯基)乙醇的方法，其特征 在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为5. 4,加入底物2, 4'-二氯苯乙酮，使底物2, 4'-二 氯苯乙酮添加量为80-90 g/L，玉米浆含量为19-20g/L，山梨坦单月桂酸酯13-14g/L，木糖 15-17g/L、麦芽糖12-15g/L、异丙醇5-6%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至27-28°C时， 加入湿黄蓝状菌细胞使其浓度为71-75g/L，通气比为0. 15-0. 16VAV分钟），进行生物催化 反应，反应时间为67-70小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙 酯，得到产物（S)-2-氯-1-(4-氯-苯基)乙醇，反应转化率98-99%，产品收率96-97%， 对映体过量率98. 5-99%。2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿黄蓝状菌细胞制备过程如下：黄蓝状菌ATCC 34594,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟， 冷却至26-27°C，将黄蓝状菌种子液接种至发酵罐，接种比例为9-10 %，通气比为0. 9-1V/ (V分钟)，26-27°C培养41-45小时，用过滤式离心机离心得到湿黄蓝状菌细胞，用作生物催 化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，黄豆粉 3-4 g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏20-25 g，硫酸铵0.5-0. 7g/L，硫 酸镁0.3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1.8-2. 3g/L，碳酸钙0.7 g/L，硫酸亚铁0.18 g/L，硫酸锰 0? 025 g/L;pH 4. 4。
【专利摘要】一种微生物生产光活性氯苯氯乙醇的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用黄蓝状菌细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12P7/22, C12R1/01
【公开号】CN105132471
【申请号】CN201510561222
【发明人】刘均洪, 王丽红, 张媛媛
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月7日