(1-(4-硝基苯基）-1,2,3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲酸 乙酯（IV-4)的合成
[0067]
[0068] 按照实施例1的方法，对氯苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合，Gould-Jacobs 环合，制得中间体6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯；对硝基苯基叠氮与溴丙炔经"Click Chemistry"制得4-溴甲基-1-(4-硝基苯基2, 3-三唑，白色固体，产率72. 7% ; 6_氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯和4-溴甲基-1-(4-硝基苯基）-1H-1，2, 3-三唑经N的 烷基化制得6-氯-1- ((1- (4-硝基苯基）-1，2, 3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲 酸乙酯（IV-4)，浅黄色固体，产率77.l%，m.p. 282-283°C。IV-4的结构表征如下：IlUcm1) v:3170(quinoline=C-H)，3133(triazole=C-H)，1748(C= 0)，1565,1479(C=C); (400MHz,DMSO)δ： 1. 27 (t, 3H,CH3of0CH2CH3,J= 7. 2Hz), 4. 23 (q, 2H,CH2of0CH2CH3,J =7. 2Hz),5. 71(s, 2H,CH2ofNCH2), 7. 51-7. 60 (m, 2H,ArH), 7. 73 (d, 2H,ArH,J= 7. 2Hz) ,8. 12-8. 19(m, 3H,ArH,), 8. 40(s, 1H,C=CHoftriazole), 8. 63 (s, 1H, 2-H) ；E.A.for C21H16ClN505:Calcd :C55. 58, Η3· 55, Ν15· 43 ;found :C55. 54, Η3· 58, Ν15· 47。
[0069] 实施例5
[0070] 6-氟-1-( (1-(4-氯苯基）-1,2,3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲酸乙 酯（IV-5)的合成
[0071]
[0072] 按照实施例1的方法，对氟苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合，得2-((4-氟苯 胺）亚甲基）丙二酸二乙酯：白色固体，产率71. 2%;Gould-Jacobs环合，得到6-氟-4-羰基 喹啉-3-甲酸乙酯：白色粉末，产率61. 7%，再和4-溴甲基-1-(4-氯苯基）-1，2, 3-三唑N 烷基化反应制得6-氟-1-((1-(4-氯苯基）-1，2, 3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲 酸乙酯（IV-5)，白色固体，产率79.2%，m.p.258-259°C。IV-5的结构表征如下：IlUcm1) v：3186(quinoline=C-H), 3118(triazole=C-H), 1750(C= 0), 1581,1460(C=C) NMR (400MHz, DMSO)δ：1. 30 (t, 3H, CH3of 0CH2CH3,J= 7. 2Hz), 4. 24(q,2H, CH2of 0CH2CH3,J=7. 2Hz), 5. 73(s,2H, CH2of NCH2), 7. 65 (d, 2H, ArH,J= 7. 6Hz), 7. 73 (d, 2H, ArH,J= 8. 4H z)，8. 04-8. 11(m,3H, ArH,)，8. 35(s,1H, C = CH of triazole)，8. 65(s,1H, 2-H)。E.A. for C21H16C1FN403, Calcd：C59. 09, H3. 78, N13. 13 ；found：C59. 10, H3. 75, N13. 17〇
[0073] 实施例6
[0074] 6-氟-1-( (1-(4-甲基苯基）-1, 2, 3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲酸 乙酯（IV-6)的合成
[0075]
[0076]按照实施例1的方法，对氟苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合，得2-((4-氟 苯胺）亚甲基）丙二酸二乙酯：白色固体，产率71.2% ;Gould_Jacobs环合，得到 6_氟-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯：白色粉末，产率61.7 % ;对甲基苯基叠氮与溴丙炔 经"ClickChemistry"制得4-溴甲基-1-(4-甲基苯基）-1，2, 3-三唑；6-氟-4-羰 基喹啉-3-甲酸乙酯和4-溴甲基-1-(4-甲基苯基）-1，2, 3-三唑N烷基化制得 6_氟-1-((1-(4-甲基苯基）-1，2,3_三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲酸乙 酯（IV-6)，白色固体，产率75. 3%，m.p. 223-224 °C。IV-6的结构表征如下：IlUcm1)v:3180(quinoline=C-H)，3115(triazole=C-H)， 1746(C= 0)， 1561，1455(C=C); 4 匪R(400MHz，DMS0)δ(ppm) :1.26(t，3H，CH3of0CH2CH3，J= 7.2Hz)，2.43(s，3H，-C H3), 4. 21 (q, 2H,CH2of0CH2CH3,J= 7. 2Hz), 5. 70 (s, 2H,CH2ofNCH), 7. 60 (d, 2H,ArH,J =8. 0Hz), 7. 81(d, 2H,ArH,J= 8. 0Hz), 7. 90-8. 01 (m, 3H,ArH), 8. 30 (s, 1H,C=CHof triazole) ,8. 63 (s, 1H,ArH) ；E.A.forC22H19FN403,Calcd：C65. 02,H4. 71,N13. 79；found： C65. 05,H4. 73,N13. 76。
[0077] 实施例7
[0078] 6-甲基-1-( (1-(4-氯苯基）-1,2,3-三唑-4-基）甲基）-4-羰基喹啉-3-甲酸 乙酯（IV-7)的合成
[0079]
[0080] 按照实施例1的方法，对甲基苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合制得2-((4-甲 基苯胺）亚甲基）丙二酸二乙酯：白色固体，产率8L3% ;Gould-Jacobs环合制得6-甲 基-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯：白色粉末，产率75. 1%，再与4-溴甲基-1-(4-氯苯 基）-1，2, 3-三唑经N烷基化反应制得6-甲基-1- ((1- (4-氯苯基）-1，2, 3-三唑-4-基） 甲基）-4_羰基喹啉-3-甲酸乙酯（IV-7)，白色固体，产率81. 3%，m.p. 239-240°C。IV-7 的结构表征如下：IR(cm丨）v:3171(quinoline=C_H)，3111(triazole=C_H)，1740(C =0)，1580，1461(C=C)JHNMR(400MHz，DMS0)δ(ppm) :1.23(t，3H，CH3of0CH2CH3，J =7. 2Hz), 2. 45 (s, 3H, -CH3), 4. 18 (q, 2H,CH2of0CH2CH3,J= 7. 2Hz), 5. 69 (s, 2H,CH2of NCH), 7. 58 (d, 2H,ArH,J= 8. 0Hz), 7. 79 (d, 2H,ArH,J= 8. 0Hz), 7. 91-7. 99 (m, 3H,ArH), 8 .27 (s, 1H,C=CHoftriazole), 8. 61 (s, 1H,ArH) ；E.A.forC22H19C1N403,Calcd：C62. 49, H4. 53,N13. 25;found:C62. 47,H4. 54,N13. 26。
[0081] 根据上述的实施例相似的原料和方法，制备了如下表1所示化合物，但本发明所 要求保护的化合物不限于此：
[0082]表1
[0083]
[0084] 体外抗肿瘤活性测试
[0085] 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够使噻唑蓝（MTT)还原为不溶于水的 蓝紫色针状结晶甲瓚（Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞则没有该功能。二甲基亚砜 (DMS0)能溶解细胞中的蓝紫色结晶，并且在490mn波长处有最大吸收峰。因此在在490mn 波长处测定吸光度可反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，甲瓒形成的量与细胞数成正 比。
[0086] 供试细胞
[0087] 人肝癌细胞IfepG2、结肠癌细胞HT-29、宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞A549、白血病细 胞HL60,该5种肿瘤细胞株均购自中国科学院上海生命科学院细胞库。
[0088] 主要仪器与耗材
[0089] 生物安全柜，力康发展有限公司，HFsafe_1200TE;
[0090] C02培养箱，力康发展有限公司，HF160W;
[0091] 倒置生物显微镜，奥林巴斯，BDS200;
[0092] 空气浴恒温摇床，国华企业，ZD-85型；
[0093]EXL800uv全自动酶标仪，Bio-Rad公司，168-1000XC;
[0094] 精密可调微量移液器，Eppendorf(德国）公司；
[0095] 96孔细胞培养板，Corning(美国）公司；
[0096] 细胞培养瓶，Corning(美国）公司。
[0097] 主要试剂
[0098] 阳性对照品DPP，南京制药厂有限公司；
[0099] 优级胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；
[0100] 胰蛋白酶，Gibco公司；
[0101] RPMI1640 培养液、DMS0 和四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyl tetrazolium,MTT),美国Solarbio公司。
[0102] 实验步骤如下：
[0103]MTT溶液的配制：称取MTT50mg，溶于10mL的磷酸缓冲液（PBS)中，用