实例1化合物制备的相同量的 D0PC。在初始免疫后的2周和4周使用相同的组合对小鼠进行追加。在7周的免疫后，将 小鼠放血且确定HA--特异性IgG2a的滴度。由标准血清化ISA在HA--涂覆的微量滴定板 上通过血清样品的系列稀释进行测定。IgG2a数据示于实现端点（2X基线）的血清稀释度 且为每组5只小鼠的几何平均值。
[0053]表1
[0054]
[00巧]连俩I3
[0056] 在由相同动物构建的脾细胞培养物中确定抗原依赖性干扰素-丫（IFN丫）的反 应，其中IgG2a抗体对相同动物的反应在实例2中确定。移除该动物的脾脏，合并W形成每 组5只动物的两组，切碎W产生单细胞悬浮液且置于96孔微量滴定板的培养物中。每组产 生S个孔用于对照PBS测试且S个孔用于IOmg的HA测试。然后将培养物在37°C溫育72 小时。然后移除培养基且通过ELISA分析测量产生的干扰素-丫（pg/ml)(表。。IFN丫数 据报告为每组使用=个重复测量值的几何平均值。
[0057]表2
[0058]
[0059]
[0060]连俩I4
[00川对小鼠体内N-(4-{[4-氨基-2-下基-IH咪挫并[4,5-C]哇嘟-1-基]氧基}下 基）硬脂酷胺（实例1中的化合物）诱导系统肿瘤坏死因子（TN巧的形成进行评估。使用 四种不同的制剂测量系统TNF的诱导。（1.PBS(对照）；2.瑞哇莫德（比较制剂）；3.在二 油酷基卵憐脂值0PC)中制得的瑞哇莫德（比较制剂）；4.在二油酷基卵憐脂值0PC)中制 得的实例1中的化合物（脂质体）。
[0062] 在二油酷基卵憐脂值0PC)脂质体中制得的实例1中的化合物如实例2所述的那 样制备。在DOPC中制得的瑞哇莫德W与DOPC中实例1化合物相类似的方式制备。瑞哇莫 德制剂在PBS中制得为水性悬浮液。
[006引用包含Img/Kg每组测试化合物（即，瑞哇莫德或实例1中的化合物）的制剂皮 下注射小鼠。在给药后一小时和S小时，将小鼠放血且通过化ISA分析在血清中测量系统 TNF(pg/mL)。结果W五只动物每组所获得的几何平均值示出。表3的数据示出多种形式瑞 哇莫德的皮下注射诱导系统TNF反应，然而N-(4-{[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C] 哇嘟-1-基]氧基}下基）硬脂酷胺（实例1中的化合物）不会诱导系统TNF反应。运对 提供无系统TNF副作用的局部免疫系统的增强是重要的。
[0064]表 3
[0065]
[0066]连俩I5
[0067] 用IOyg的HA抗原，单独或者与表4中所引用的增加量的N-(4-{[4-氨基-2-下 基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下基）硬脂酷胺（实例1中的化合物）/DOPC 各自皮下免疫5只小鼠的群组。在初始免疫后的2周和4周用相同的组合对小鼠进行追 加。在7周的免疫后，将小鼠放血且确定HA-特异性IgG2a的滴度。由标准血清ELISA在 HA-涂覆的微量滴定板上通过血清样品的系列稀释进行测定。IgG2a数据为实现端点（2X 基线）的血清稀释液且为每组5只小鼠的几何平均值。
[0068]表 4
[0069]
[0070]连俩I6
[0071] 在由相同动物构建的脾细胞培养物中确定抗原依赖性干扰素-丫（IFN丫）的反 应，其中IgG2a抗体对相同动物的反应在实例5中确定。移除该动物的脾脏，合并W形成每 组5只动物的两组，切碎W产生单细胞悬浮液且置于96孔微量滴定板的培养物中。每组产 生S个孔用于对照PBS测试且S个孔用于IOmg的HA测试。然后将培养物在37°C溫育72 小时。然后移除培养基且通过ELISA分析测量产生的干扰素-丫（pg/ml)(表W。IFN丫数 据报告为每组使用=个重复测量值的几何平均值。
[0072]表 5
[0074]连俩I7
[0075] 确定N-(4-{[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下基） 硬脂酷胺（实例1中的化合物）诱导人外周单核细胞（PBMC)产生肿瘤坏死因子（TN巧的 能力。从人类志愿者中制备人外周血单核细胞且放置在96孔微量滴定板的培养物中。将 实例1中化合物W下列浓度添加至孔中：30、10、3. 3、1. 1、0. 37、0. 13、0. 043和0. 014yM。 然后将细胞在37°C溫育过夜。移除培养基且通过化ISA分析测量TNF的浓度（ng/mL)(表 6)O
[0076] 表6
[0077]
[0078]连俩I8
[0079]N-(4-{[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下基）硬脂 酷胺（实例1中的化合物）的病毒保护活性在Ba化/c雄性小鼠中（马萨诸塞州威尔明顿 的查尔斯河（QiarlesI^iver,Wilmington,MA))进行评估，用小鼠适应的HINIA/F^uerto 化co/8/34(可购自弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中屯、（AmericanType QiltureCollection,Manassas,VA))对该雄性小鼠进行鼻内感染。感染前四周，10只小鼠 的群组分别各自用W下物质进行免疫I.PBS;2.IOiigHA;或3.IOiigHA+0.Img/Kg的DOPC脂质体的实例I中的化合物。在感染前两周，相同的群组用它们对应的免疫药追加。在鼻 内给药感染后11天检测小鼠的存活且数据W每天存活的百分比示于表7中。组1中的一 只小鼠和组2中的两只小鼠未能实现感染，由于小鼠感染的前3天无重量损失确定。因此， 到第5天时，组1由9只小鼠构成，组2由8只小鼠构成且组3和组4各由10只小鼠构成。
[0080]表 7
[0081]
[0082]
[0083]连俩I9
[0084] N- (4- {[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下基）硬脂酷 胺（实例1中的化合物）的免疫活化活性在小鼠预防性的抗肿瘤免疫模型中评估。对巧7/ Bl的雄性小鼠群组（马萨诸塞州威尔明顿的查尔斯河）进行免疫且在两周间隔内用下述物 质追加两次1)PBS;2) 20yg卵清蛋白；或3) 20yg卵清蛋白+1.Omg/Kg实例1中的化合物。 在最终追加后一周，用4E5B160va黑素瘤肿瘤细胞皮内注射每只小鼠。在肿瘤注射后11天 处死小鼠，W肿瘤的最大直径和最小直径测量肿瘤且确定两次测量的结果。Wmm2+/-标准 偏差（s.d.)确定每组的平均肿瘤尺寸。结果示于表8中。
[0085]表 8
[0086]
[0087]连例 10
[008引 -(4- {[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下基）硬脂酷 胺（实例1中的化合物）的剂量节省活性在用不同量的具有或者不具有实例1中化合物的 HA的量免疫的小鼠进行评估。五只Ba化/c雄性小鼠（马萨诸塞州威尔明顿的查尔斯河）的 群组用1yg、5yg或15yg的带有或不带有0.Img/kg实例1中的化合物的HA免疫。然后 将小鼠在免疫后2周和4周用相同的制剂追加。在最终追加后的S周，将小鼠放血且HA-特 异性IgGl和IgG2a的滴度使用标准血清化ISA分析在HA-涂覆的微量滴定板上通过血清 样品的系列稀释来确定。IgGl和IgG2a数据W实现端点（2X基线）的血清稀释液示于表9 且为每组5只小鼠的几何平均值。将0.Img/Kg实施例1中化合物添加至HA很大的增强了 对运个抗原的抗体反应。
[0089]表 9
[0090]
[0091] 连例 11
[0092] 局部体内的N-(4-{[4-氨基-2-下基-IH-咪挫并[4, 5-C]哇嘟-1-基]氧基}下 基）硬脂酷胺（实例1中的化合物）的活性在四只Ba化/c雄性小鼠（查尔斯河）的群组 中评估且与瑞哇莫德（比较化合物）的活性进行比较。在给药后1小时、3小时、6小时和 18小时的时间点评估实例1化合物或瑞哇莫德溶液皮下注射小鼠的四个独立的群组。任一 化合物的最终剂量为l.Omg/kg。在每个时间点，将小鼠放血、杀死并移除引流轴和化淋己结 且放置在RNA保存流体中（RNAlater试剂可购自德克萨斯州奥斯汀的Ambion公司（Ambion Co;rporation，Austin，TX))。对于TNF蛋白浓度（pg/ml)，经由HJSA分析血清样品作为本 细胞因子系统存在的量度。处理引流淋己结用于通过定量的PCR(7900HT热循环仪，可购自 加利福尼亚州卡尔斯己德的美国应用生物系统公司（AppliedBiosystems,Carlsbad,CA)) 巧憶TNFmRNA的基因表达。报告的数据（表10)为每个群组的平均+/-标准偏差（s.d.)。 血清TNF浓度"未检测到"水平为小于lOpg/ml。在注射实例1化合物之后，在引流淋己结 中TNFmRNA基因表达而在血清中未检测到TNF蛋白的诱导表明实例1化合物中细胞因子 的诱导效应主要为局部