Health，152Bethesda，MD).计算存活的细胞数目。细胞 活性=待测组细胞数目/对照组细胞数目。细胞毒性检测结果见图8。
[0087] 由图8结果可知，当共辄聚电解质浓度达到200μΜ时，PPET3-N2和PPET3-N3表 现为几乎无毒，细胞存活率达90 %以上，ΡΡΕΤ3-Ν1相比之下，有轻微毒性，胞存活率达70 % 以上。
[0088] 实施例5 :细胞成像
[0089] 将HeLa细胞传代至直径为20mm的共聚焦用培养皿，在37 °C，二氧化碳含量为5% 的培养箱中培养24h;将实施例1-3中制备获得的共辄聚电解质加入HeLa细胞的培养液 中，其中，共辄聚电解质的浓度为5μM，共孵育0. 5h，之后移去培养液，用1XPBS清洗细胞 六次。在共聚焦显微镜下（OlympusFV1000_IX81confocallaserscanningmicroscope) 观测。激发光选用汞激光器（72.0% 405nm和69. 5% 488nm)。观测结果见图9。其中，图 9(a) -图 9(c)分别为HeLa细胞与PPET3-N1，PPET3-N2,PPET3-N3 共孵育 30min的共聚焦 显微照片。图9 (d)-图9 (f)分别为HeLa细胞与PPET3-N2共孵育30min的放大显微照片。 比例尺：图 9 (a)-图 9 (c)为 50μm,图 9 (d)-图 9 (f)为 10μm。
[0090] 由图9的结果可知，PPET3-N1，PPET3-N2,PPET3-N3由于侧链长度不同，与 细胞的相互作用有强弱之别，表现细胞成像上为随侧链长度增长亮度依次增加，即 PPET3-N1〈PPET3-N2〈PPET3-N3。由图9 (d)-图9 (f)可以清楚地看到PPET3-N2很好的包裹 在细胞膜上，并且具有一定的细胞透性。
[0091] 实施例6 :ATP半定量检测
[0092] 该实施例中，以实施例2制备的的PPET3-N2为例，探测细胞膜上的ATP浓度变化。 具体如下：
[0093] 将HeLa细胞传代至直径为20mm的共聚焦用培养皿，在37 °C，二氧化碳含量为5% 的培养箱中培养24h;将PPET3-N2加入HeLa细胞的培养液中，其中，PPET3-N2的浓度为 5μM，共孵育0. 5h，之后移去培养液，用1XPBS清洗细胞六次，之后分别加入0、200、500μΜ 的ΑΤΡ，在共聚焦显微镜下依次观测加入相应浓度ATP后0, 5,15, 25min时HeLa细胞的细胞 膜上的荧光强度变化。激发光选用汞激光器（72. 0% 405nm和69. 5% 488nm)。观测结果 见图10和图11，其中，图10为HeLa细胞分别与PPET3-N2共孵育30min后加入不同浓度 的ΑΤΡ(0, 200,或500μπι)，在不同时间点（0, 5, 15,或25min)拍摄的共聚焦显微照片，比例 尺：50μm;图11为HeLa细胞分别与PPET3-N2共孵育30min后加入不同浓度的ATP(0, 200， 或500μπι)，在不同时间点（0, 5, 15,或25min)，HeLa细胞表面的荧光强度变化，使用 ImageJ软件（WayneRasband,NationalInstitutesofHealth, 152Bethesda，MD)计算焚 光强度，F。为Omin加入0μMATP时细胞上的荧光强度，F为测试时间（0, 5,15, 25min)加 入所述的ATP测试浓度（0, 200, 500μM)时细胞上的荧光强度。
[0094] 由图10和图11可以看出，未加入ATP时，PPET3-N2的荧光强度25min内下 降了2%左右，表明PPET3-N2有良好的光稳定性。纵向对比显示，随着ATP浓度的增 加（0-500μΜ)，ΡΡΕΤ3-Ν2的荧光强度明显下降。横向对比显示，加入200μΜATP时， ΡΡΕΤ3-Ν2的荧光强度下降至初始强度的83. 7%，随着时间推移，25min中时下降至初始强 度的49. 4%;相比之下，加入500μMATP时，PPET3-N2的荧光强度急速内下降至初始强度的 39. 5%，之后随着时间推移仍有微弱下降，25min中时下降至初始强度的33. 8%。这些结果 显示，PPET3-N2对ATP的浓度以及共孵育时间有良好的响应，这一性质使得PPET3-N2可通 过细胞成像应用于在ATP浓度的检测中。
[0095] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任 一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结 合和组合。
[0096] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述 实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种共辄聚电解质，其特征在于，具有式I所示的化学结构：其中，m为2~12的整数，η为10~100的整数，Et为乙基。2. 根据权利要求1所述的共辄聚电解质，其特征在于，m为2、6或12。3. 根据权利要求1所述的共辄聚电解质，其特征在于，η为20~60的整数。4. 一种制备权利要求1~3中任一项所述的共辄聚电解质的方法，其特征在于，包括： 式1所示化合物与式2所示化合物接触，得到式I所示化合物，5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，以四三苯基磷钯和碘化亚铜为催化剂，使 所述式1所示化合物与所述式2所示化合物接触，得到所述式I所示化合物。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在有机溶剂中使所述式1所示化合物与所 述式2所示化合物接触，所述有机溶剂为四氢呋喃和三乙胺的混合物， 优选地，在所述有机溶剂中，所述四氢呋喃和三乙胺的体积比为3 :1。7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，于50~60摄氏度，优选55摄氏度下，使 所述式1所示化合物与所述式2所示化合物接触12~24小时。8. 权利要求1~3中任一项所述的共辄聚电解质在细胞成像或ATP半定量检测中的用 途。9. 一种细胞成像方法，其特征在于，包括： 将待观察细胞与权利要求1~3中任一项所述的共辄聚电解质共孵育； 将经过所述共孵育的所述待观察细胞置于荧光显微镜下观测。10. -种ATP半定量检测方法，其特征在于，包括： 将细胞与权利要求1~3中任一项所述的共辄聚电解质共孵育，得到第一共孵育体 系； 检测所述第一共孵育体系的荧光强度，得到第一荧光强度值； 向所述第一共孵育体系中加入ATP，并将所得到的混合体系进行共孵育，得到第二共孵 育体系； 检测所述第二共孵育体系的荧光强度，得到第二荧光强度值； 基于所述第一荧光强度值和所述第二荧光强度值，确定ATP半定量检测结果。
【专利摘要】本发明提供了种共轭聚电解质及其制备方法和生物应用，该共轭聚电解质具有式I所示的化学结构，其中，m为2～12的整数，n为10～100的整数，Et为乙基。该共轭聚电解质具有良好的细胞相容性、低毒性和优越的光物理性质(如亮度高、光稳定性好)，并且对ATP响应灵敏，能够有效用于细胞成像或ATP半定量检测。
【IPC分类】G01N21/64, C08G61/12, C12Q1/02
【公开号】CN105348493
【申请号】CN201510629293
【发明人】蒋宇扬, 谭春燕, 谭英, 陈志方, 吴盼
【申请人】清华大学深圳研究生院
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年9月28日