一种葵花籽粕绿原酸的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及绿原酸制备的技术领域。具体的说，本发明涉及葵花籽柏绿原酸的制 备方法及应用的技术领域。
【背景技术】
[0002] 绿原酸又名咖啡单宁酸、咖啡鞣酸，是由一分子奎尼酸与一分子咖啡酸脱水缩合 而成的缩酸酸，分子式为C 16H18O9，恪点为208°C，相对分子质量为354. 30,为白色或淡黄色 针晶，且在ll〇°C脱水转变为无水化合物，比旋光度[a ]D = 35. 2、绿原酸在水中的溶解 度约为4%，溶解度与水温呈正相关关系，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等强极性有机溶剂，微溶 于乙酸乙酯，难溶于苯、氯仿、乙醚等弱极性有机溶剂，绿原酸类物质是许多中药材的主要 功效成分，也是多种成品药质量控制的重要指标之一。
[0003] 葵花籽一般含绿原酸1. 1% -4. 5%。但葵花籽柏中的蛋白质容易被绿原酸氧化， 降低葵花籽柏蛋白的营养价值。目前，葵花榨油厂一般把榨油后的饼柏作为饲料，这样严重 浪费了自然资源。如果首先从葵花籽柏中提取绿原酸，然后进一步提取优质的蛋白质，这样 就可以大幅度地提高葵花籽柏的利用率，对葵花籽柏实现多次经济增值。
[0004] 经检索，目前有很多关于利用葵花籽柏做为饲料的应用研究，而关于提取葵花籽 柏中绿原酸、利用超声辅助离子提取法和NKA-2大孔树脂-溶致结晶联用技术提取葵花籽 柏中的绿原酸和纯化葵花籽柏绿原酸的研究较少。因此，探索和研究提取率高、纯度高、制 备的葵花籽柏绿原酸具有较强活性的制备方法具有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 针对目前未见利用超声辅助离子提取法和NKA-2大孔树脂-溶致结晶联用技术提 取葵花籽柏中的绿原酸和纯化葵花籽柏绿原酸的研究现状，本发明旨在于提供一种葵花籽 柏绿原酸的制备方法及其应用，目的在于利用超声辅助离子提取法和NKA-2大孔树脂-溶 致结晶联用技术提取葵花籽柏中的绿原酸和纯化葵花籽柏绿原酸。本发明制备的葵花籽柏 绿原酸为淡黄色，提取率为5. 72%，绿原酸纯度为67. 56%，同时，本发明制备的葵花籽柏 绿原酸具有较强的总抗氧化活性、清除·OH自由基和DPPH ·自由基的能力；对大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌、黑曲霉均有抑制作用；将本发明制备的葵花籽柏绿原酸添加到面包中，可以 使面包的贮藏期延长33. 3%。
[0006] 本发明通过以下技术方案实现的。
[0007] 本发明以葵花籽柏为原料，采用超声辅助离子提取法提取葵花籽柏绿原酸，利用 NKA-2大孔树脂-溶致结晶联用技术对提取获得的葵花籽柏绿原酸进行纯化，其中，超声辅 助离子液体提取法的条件为：功率220W，温度41°C，[Bmim]BF4与水的体积比1 :4,料液比 为1:15,提取时间34min ;NKA-2大孔树脂-溶致结晶联用技术的工艺条件为上样液浓度为 I. 06-1. 59mg/mL、上样流速为2BV/h、上样量为3BV，用3BV 60%乙醇以2BV/h进行洗脱，结 晶时，葵花籽柏绿原酸的PH = 2. 0,萃取时间25min，萃取四次，真空冷冻干燥获得葵花籽柏 绿原酸。同时，本发明制备的葵花籽柏绿原酸具有较强的总抗氧化活性、清除· OH自由基 和DPPH ·自由基的能力；对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉均有抑制作用；将本发明制 备的葵花籽柏绿原酸添加到面包中，可以使面包的贮藏期延长33. 3%。
[0008] 本发明具体提供一种葵花籽柏绿原酸的制备方法及其应用，具体的制备方法步骤 如下：
[0009] (1)葵花籽柏的预处理：挑选无霉变的葵花籽柏，脱脂，脱脂试剂为石油醚，脱脂 温度为40°C，时间为12h ;低温烘干，粉碎，过100目筛。
[0010] (2)超声处理：称取步骤（1)制备的葵花籽柏于萃取容器中，按照料液比为1:15 的比例添加混合萃取溶剂，进行超声处理，其中超声功率为220W、温度41°C、时间34min。
[0011] 所述的混合萃取溶剂：按照[8!11加]8?4与水的体积比为1:4的比例混合，制备获 得。
[0012] (3)离心：对步骤⑵制备的混合溶液进行离心处理，其中离心时间为10分钟，转 速为8000r/min，取上清液，上清液在30°C的条件下进行浓缩，浓缩液在_50°C的条件进行 冷冻干燥。
[0013] (4)纯化：将步骤（3)冷冻干燥后的绿原酸，制备为浓度为I. 06mg/mL-l. 59mg/mL 的绿原酸溶液，上NKA-2大孔树脂柱，上样量的流速为2BV/h，上样量为3BV ;用3BV的60% 的乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱液浓缩，得到葵花籽柏浓缩液，冷冻干燥得到绿原酸 I 〇
[0014] (5)溶致结晶纯化技术：步骤（4)制备的葵花籽柏浓缩液调节pH，使葵花籽柏浓缩 液的pH值为2. 0 ;以乙酸乙酯为萃取溶剂，按体积比1: 1，震动萃取时间25min，萃取四次， 并在40°C下真空干燥2h，得到淡黄色葵花籽柏绿原酸。
[0015] 本发明采用超声辅助离子液体提取法提取葵花籽柏中的绿原酸，相比传统提取 法和超声辅助提取法，本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率明显高于其它两 种。本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率为5. 72 %，传统提取法的提取率为 4. 46%，超声辅助提取法的提取率为4. 88% ;本发明采用的超声辅助离子液体提取率比传 统回流法、超声辅助法分别高28. 25%、17. 21%。
[0016] 本发明采用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离葵花籽柏绿原酸，其中利用 NKA-2大孔树脂对提取的绿原酸进行纯化，并利用乙酸乙酯溶致结晶技术进行进一步的纯 化，使得制备的葵花籽柏绿原酸的纯度为67. 56%。
[0017] 对于采用现有公知常识作为现有技术基础的问题。事实上，除了开创性的发明外， 任何一项发明创造都是离不开现有技术手段和技术要素为基础，都是采用现有技术手段基 础上经过进一步创新的结果。对于超声处理、粉碎、离心、纯化等技术都是现有技术基础， 但是应用哪种试剂使得葵花籽柏中的绿原酸得到充分的提取，提取绿原酸的条件是什么， 如何应用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化葵花籽柏绿原酸，并获得高纯度的葵花籽柏绿 原酸以及如何保留葵花籽柏绿原酸的活性都需要通过科学实验验证，都需要经过系列不可 预见的科学试验反复验证。正是由于这些原因，本申请虽然利用了常规技术手段为基础， 并在此基础上经过科学实验提供了葵花籽柏绿原酸的制备方法和应用，采用超声辅助离 子液体提取法使得葵花籽柏绿原酸的提取率为5. 72%，比传统回流法、超声辅助法分别高 28. 25%、17. 21% ;采用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离葵花籽柏绿原酸，使得制备 的葵花籽柏绿原酸的纯度为67. 56% ;葵花籽柏绿原酸的总抗氧化能力高于Ve，葵花籽柏绿 原酸清除羟基自由基、DPPH ·自由基能力比Vc分别高110. 34%、17. 75%;葵花籽柏绿原酸对 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉的MIC、MBC的浓度分别为I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 2mg/ mL，I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 5mg/mL，表明本发明制备的葵花籽柏绿原酸具有较强的抑菌能 力；可见，本发明提供的葵花籽柏绿原酸的制备方法和应用具有广泛的应用价值。
[0018] 通过实施本发明上述具体的
【发明内容】
可以达到以下有益效果：
[0019] ⑴本发明采用超声辅助离子液体提取法提取葵花籽柏中的绿原酸，相比传统提 取法和超声辅助提取法，本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率明显高于其它两 种。本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率为5. 72 %，传统提取法的提取率为 4. 46%，超声辅助提取法的提取率为4. 88% ;本发明采用的超声辅助离子液体提取率比传 统回流法、超声辅助法分别高28. 25%、17. 21%。
[0020] (2)本发明采用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离葵花籽柏绿原酸，其中利 用NKA-2大孔树脂对提取的绿原酸进行纯化，并利用乙酸乙酯溶致结晶技术进行进一步的 纯化，使得制备的葵花籽柏绿原酸的纯度为67. 56%，本发明采用的NKA-2大孔树脂-溶致 结晶联用技术纯化获得的绿原酸纯度比单一采用NKA-2大孔树脂纯化获得的绿原酸纯度 提尚了 192.09%。
[0021] (3)本发明制备的葵花籽柏绿原酸的总抗氧化能力高于Vc，葵花籽柏绿原酸的清 除羟基自由基、DPPH ·自由基能力比Vc分别高110. 34%、17. 75%，说明本发明制备的葵花 籽柏绿原酸具有良好的抗氧化活性。
[0022] (4)本发明制备的葵花籽柏绿原酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉均有一定 的抑制作用，葵花籽柏绿原酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉的MIC、MBC的浓度分别 为 I. 2mg/mL、I. 5mg/mL、I. 2mg/mL，I. 2mg/mL、I. 5mg/mL、I. 5mg/mL。研究表明本发明制备的 葵花籽柏绿原酸具有较强的抑菌性。
[0023] (5)将本发明制备的葵花籽柏绿原酸添加到面包中，可以使面包的贮藏期延长 33. 3%
【附图说明】
[0024] 图1显示为不同V[B_]BF4/水体积比对绿原酸提取得率的影响图。
[0025] 图2显