示为料液比对绿原酸提取得率的影响图。
[0026] 图3显不为超声功率对绿原酸提取得率的影响图。
[0027] 图4显示为超声温度对绿原酸提取得率的影响图。
[0028] 图5显示为超声时间对绿原酸提取得率的影响的影响图。
[0029] 图6显示为超声辅助离子液体提取法提取葵花籽柏绿原酸工艺优化响应曲面图。
[0030] 图7显示为绿原酸粗提液浓度对绿原酸吸附率的影响图。
[0031 ] 图8显示为上样流速对绿原酸吸附率的影响图。
[0032] 图9显示为上样液pH对吸附率的影响图。
[0033] 图10显示为绿原酸动态吸附泄漏曲线图。
[0034] 图11显示为绿原酸动态吸附泄漏曲线图。
[0035] 图12显示为洗脱剂的用量对解吸率的影响图。
[0036] 图13显示为不同萃取剂对绿原酸的萃取率图。
[0037] 图14显示为pH值对绿原酸的萃取率图。
[0038] 图15显示为萃取时间对绿原酸萃取率的影响图。
[0039] 图16显示为萃取次数对绿原酸萃取率的影响图。
[0040] 图17显不为绿原酸标准品和棉花好柏绿原酸的HPLC色谱图，
[0041] 图中A为绿原酸标准品，B为棉花籽柏绿原酸。
[0042] 图18显示为绿原酸的总抗氧化活性图。
[0043] 图19显示为绿原酸清除羟基自由基活性图。
[0044] 图20显示为绿原酸清除DPPH ·自由基活性图。
[0045] 图21显示为绿原酸对根霉孢子萌发的影响图。
[0046] 图22显示为绿原酸对匍枝根霉菌丝生长形态的影响图。
[0047] 图23显示为绿原酸对面包贮藏期的试验结果图。
【具体实施方式】
[0048] 本发明中选用的所有试剂、仪器、原辅材料都为本领域熟知选用的，但不限制本发 明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。 [0049] 实施例一：葵花籽柏绿原酸的制备
[0050] 葵花籽柏绿原酸的具体制备方法步骤如下：
[0051] (1)葵花籽柏的预处理：挑选无霉变的葵花籽柏，脱脂，脱脂试剂为石油醚，脱脂 温度为40°C，时间为12h ;低温烘干，粉碎，过100目筛。
[0052] (2)超声处理：称取步骤⑴制备的葵花籽柏于萃取容器中，按照料液比为1:15 的比例添加混合萃取溶剂，进行超声处理，其中超声功率为220W、温度41°C、时间34min。
[0053] 所述的混合萃取溶剂：按照[Bmim]BF4与水的体积比为1:4的比例混合，制备获 得。
[0054] (3)离心：对步骤⑵制备的混合溶液进行离心处理，其中离心时间为10分钟，转 速为8000r/min，取上清液，上清液在30°C的条件下进行浓缩，浓缩液在_50°C的条件进行 冷冻干燥。
[0055] (4)纯化：将步骤（3)冷冻干燥后的绿原酸，制备为浓度为I. 06mg/mL-l. 59mg/mL 的绿原酸溶液，上NKA-2大孔树脂柱，上样量的流速为2BV/h，上样量为3BV ;用3BV的60% 的乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱液浓缩，得到葵花籽柏浓缩液，冷冻干燥得到绿原酸 I 〇
[0056] (5)溶致结晶纯化技术：步骤（4)制备的葵花籽柏浓缩液调节pH，使葵花籽柏浓缩 液的pH值为2.0 ;以乙酸乙酯为萃取溶剂，萃取时间25min，萃取四次，并在40°C下真空干 燥2h，得到淡黄色葵花籽柏绿原酸。
[0057] 本发明采用超声辅助离子液体提取法提取葵花籽柏中的绿原酸，相比传统提取 法和超声辅助提取法，本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率明显高于其它两 种。本发明应用的超声辅助离子液体提取法的提取率为5. 72 %，传统提取法的提取率为 4. 46%，超声辅助提取法的提取率为4. 88% ;本发明采用的超声辅助离子液体提取率比传 统回流法、超声辅助法分别高28. 25%、17. 21%。
[0058] 本发明采用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离葵花籽柏绿原酸，其中利用 NKA-2大孔树脂对提取的绿原酸进行纯化，并利用乙酸乙酯溶致结晶技术进行进一步的纯 化，使得制备的葵花籽柏绿原酸的纯度为67. 56%。
[0059] 对于采用现有公知常识作为现有技术基础的问题。事实上，除了开创性的发明外， 任何一项发明创造都是离不开现有技术手段和技术要素为基础，都是采用现有技术手段基 础上经过进一步创新的结果。对于超声处理、粉碎、离心、纯化等技术都是现有技术基础， 但是应用哪种试剂使得葵花籽柏中的绿原酸得到充分的提取，提取绿原酸的条件是什么， 如何应用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化葵花籽柏绿原酸，并获得高纯度的葵花籽柏绿 原酸以及如何保留葵花籽柏绿原酸的活性都需要通过科学实验验证，都需要经过系列不可 预见的科学试验反复验证。正是由于这些原因，本申请虽然利用了常规技术手段为基础， 并在此基础上经过科学实验提供了葵花籽柏绿原酸的制备方法和应用，采用超声辅助离 子液体提取法使得葵花籽柏绿原酸的提取率为5. 72%，比传统回流法、超声辅助法分别高 28. 25%、17. 21% ;采用大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离葵花籽柏绿原酸，使得制备 的葵花籽柏绿原酸的纯度为67. 56% ;葵花籽柏绿原酸的总抗氧化能力高于Ve，葵花籽柏绿 原酸清除羟基自由基、DPPH ·自由基能力比Vc分别高110. 34%、17. 75%;葵花籽柏绿原酸对 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉的MIC、MBC的浓度分别为I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 2mg/ mL，I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 5mg/mL，表明本发明制备的葵花籽柏绿原酸具有较强的抑菌能 力；可见，本发明提供的葵花籽柏绿原酸的制备方法和应用具有广泛的应用价值，获得显著 的技术效果。
[0060] 实施例二：超声辅助离子液体提取葵花籽柏绿原酸的工艺优化
[0061] 1、单因素实验
[0062] V[B_]BF4/水体积比对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响：准确称取1.0 OOg脱脂葵花 籽柏粉5份，分别配置15mL的[Bmim]BF4和水的混合萃取溶剂5份，[Bmim]BF 4和水的体积 比分别为：1:14、2:13、3 :12、4:11、5:10，将配置的离子液体分别加入到葵花籽柏粉中，超声 功率200W、40°C萃取30min，离心10分钟，取上清液定容至50mL，测其吸光度A 326并计算绿 原酸提取得率。
[0063] 料液比对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响：准确称取LOOOg脱脂葵花籽柏粉 6份，分别加入4:11的[Bmim] BF4和水的混合萃取溶剂的体积分别为：IOmL、15mL、20mL、 25mL、30mL，将离子液体分别加入到葵花籽柏粉中，超声处理，超声功率200W、40 °C萃取 30min，进行离心，离心时间为10分钟，取上清液定容至50mL，测其吸光度A326并计算绿原酸 提取得率。
[0064] 超声功率对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响：准确称取1.0 OOg脱脂葵花籽柏粉 6份，分别加入4:11的[Bmim]BF4和水的混合萃取溶剂15mL，超声功率分别为120W、160W、 2001、2401、2801、3201，40°(：超声辅助条件下萃取301^11，进行离心，离心时间为10分钟，取 上清液定容至50mL，测其吸光度A 326并计算绿原酸提取得率。
[0065] 提取温度对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响：准确称取1.0 OOg脱脂葵花籽柏粉6 份，分别加入4:11的[Bmim]BF4和水的混合萃取溶剂15mL，超声功率200W、分别在20、30、 40、50、60、70°(：超声辅助条件下萃取301^11，进行离心，离心时间为10分钟，取上清液定容 至50mL，测其吸光度A 326并计算绿原酸提取得率。
[0066] 提取时间对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响：准确称取1.0 OOg脱脂葵花籽柏粉6 份，分别加入4:11的[Bmim]BF4和水的混合萃取溶剂15mL，超声功率200W、40°C，分别在超 声辅助条件下萃取10、20、30、40、50、6011^11，进行离心，离心时间为10分钟，取上清液定容 至50mL，测其吸光度A 326并计算绿原酸提取得率。
[0067] 2、响应面实验
[0068] 在单因素试验的基础上，采用design软件，用Box-Behnken的中心组合设计原理， 对影响绿原酸提取效果的主要因素进行试验设计，对葵花籽柏中绿原酸提取工艺进行优化 分析。
[0069] 以超声功率、离子液体/水体积、提取温度、提取时间4个因素为自变量，每个因素 取三水平，进行试验设计，因素水平设计见表1。
[0070] 表1响应面法分析因子及水平表
[0073] 3、实验结果
[0074] (1)单因素试验结果
[0075] 如附图1所示，提取液中离子体积的增大，提取得率增加，当离子液体体积增大到 3 :15时，提取得率趋于稳定，但当[Βπ?πι]ΒΡ"ψ积继续增加时，提取得率下降，因此，选择 V[B_m/V7X比为3 :12为最佳绿原酸的萃取溶剂