。
[0076] (2)料液比对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响
[0077] 如附图2所示，在料液比1:10-1:15的范围内，随提取液用量的增加绿原酸提取得 率也显著增加，但提取液体积用量继续增大，提取得率保持平稳，所以最佳提取液用量应该 为 1:15〇
[0078] (3)超声功率对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响
[0079] 如附图3所示，在160W-200W，绿原酸的提取得率随超声功率的增加急剧增大，但 当超声功率超过200W时，绿原酸提取得率出现下降趋势，综合考虑，超声功率应选择200W。
[0080] (4)提取温度对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响
[0081] 如附图4所示，在20-40°C内，葵花籽柏绿原酸提取得率随着提取温度的增加而增 大，在40°C时出现了最大值，当超过40°C时，提取得率下降，所以最佳超声提取温度应选择 为 40°C。
[0082] (5)提取时间对葵花籽柏绿原酸提取得率的影响
[0083] 如附图5所示，葵花籽柏绿原酸提取得率在提取时间10_30min内随着超声时间的 增加而增大。在30min后，提取得率呈现下降趋势，所以最佳提取时间应为30min。
[0084] (6)响应面法优化葵花籽柏绿原酸提取工艺
[0085] 以葵花籽柏绿原酸提取得率为响应值，进行试验设计，结果如表2、表3、表4 :
[0086] 表2响应面实验方案及结果
[0088] 表3回归模型系数及方差分析结果
[0091] 注：* 为显著（p < 0· 05) ;** 为极显著（p < 0· 01)
[0092] 表4方差分析2
[0094] 由表3分析结果可以看出，F = 43. 68，p< 0.0001，表明回归模型显著。失拟项F =3. 71，p = 0. 2301 > 0. 05,不显著，说明该模型拟合程度良好，试验误差小，可以作为理论 预测模型。其中六，8，（：，0,8(：，厶2,82，〇2,02这9项显著。由表4可以看出，该模型1?2 = 0. 9808,预测R2 = 0. 9583与修正R2 = 0. 8924接近，说明该模型线性良好，且有着较好的 预测精度，Adeq Precision为23. 237,说明该模型有极强的响应信号，该模型预测精度高。 [0095] 经design7. 0软件分析得拟合回归方程，葵花籽柏绿原酸的超声辅助离子液体提 取响应面模型：
[0096] Y = -16. 50417+0. 0855A+0. 256B+0. 091333C+3. 13667D+0. 0005AB+0. 00 00625AC+0. 0003125AD-0. 00095BC+0.0015BD+0.00525-0.00028073A2-0. 0029416 7B2-0. 00127917Cz-0. 43667D2
[0097] 综合分析，葵花籽柏绿原酸超声辅助离子液体提取模型的回归显著，该模型实验 数据与理论预测值无显著差异，模型拟合效果较好。所以该回归方程模型可以对实验结果 进行分析预测。
[0098] 超声辅助离子液体提取法提取绿原酸工艺优化等高线图、响应曲面图如图6所 示，通过等高图和三维空间的响应图，可以直观地反映出该理论模型超声功率、温度、提取 时间、离子液体体积的交互作用及其对响应值的影响。经design7. 0软件分析得到回归 方程的最优提取工艺分别为功率218. 41W，温度40. 88°C，离子液体体积3. 94mL，提取时间 33. 95min，预测超声辅助离子液体提取得率为5. 80 %。考虑到实际问题，将提取工艺条件修 正为：功率220W，温度41°C，V[B_]BF4/水为1:4,提取时间34min，料液比为1:15,做五次平 行试验，超声辅助离子液体提取率为5. 72 %，与理论预测值相比，相对误差为1. 38 %。
[0099] 实施例三：葵花籽柏绿原酸的大孔树脂-溶致结晶联用技术纯化分离工艺研究
[0100] I、NKA-2大孔树脂动态吸附试验
[0101] ⑴大孔树脂的筛选
[0102] 表5树脂的吸附性能比较
[0104] 从表5可以看出，NKA-2大孔树脂的吸附量为24. 01mg/g，吸附率为69. 14%，均高 于其余几种树脂，所以本研究选择NKA-2大孔树脂进行葵花籽柏绿原酸的纯化试验。
[0105] (2)上样液中绿原酸浓度的选择
[0106] 如附图7所示，上样液浓度的增大，树脂对吸附率增大，当上样液浓度过高时候， 出现严重泄漏情况。上样液浓度在0. 7954-1. 56mg/mL时，大孔树脂的吸附率基本不变，但 是超过I. 56mg/mL时，吸附率下降，吸附量降低，若选择低浓度的上样量，则浪费人力物力， 所以上样浓度选择在I. 06-1. 59mg/mL范围内。
[0107] (3)上样流速的选择
[0108] 如附图8,上样流速越快大孔树脂的吸附率越低，所以应选择较小流速，但是绿原 酸属于多酚类物质，时间较长扩大了生产周期，增大了绿原酸的降解率。所以，上样液的流 速应为2BV/h。
[0109] (4)上样液pH的选择
[0110] 如图9所示，弱酸条件树脂的吸附趋于平稳，虽然在pH = 4时出现最大吸附率 97. 52%，但是吸附率和其他条件下差别不大。由于绿原酸溶液呈弱酸性，所以本实验研究 表明pH保持上样液本身的pH。
[0111] (5)NKA-2大孔树脂的动态吸附泄漏曲线
[0112] 绿原酸动态吸附泄漏曲线如图10所示，当吸附速度和洗脱附速度相等时，此时开 始出现泄漏。从图中可以看出，流出液中绿原酸的浓度随上样量的增加而升高，当上样量达 到3BV时，绿原酸开始出现大量泄漏，为了避免原料的浪费，所以确定最大上样量为3BV。
[0113] 2、NKA-2大孔树脂动态洗脱试验
[0114] (1)洗脱剂流速的选择
[0115] 如图11所示，洗脱速度越大解析率越小，所以洗脱速率不宜太快。但洗脱速度太 慢会消耗大量时间，所以洗脱速度应选择为2BV/h。
[0116] (2)洗脱剂最佳用量的选择
[0117] 如图12所示，洗脱液中绿原酸的浓度随洗脱液用量的增加而减少，洗脱剂用量达 到3BV时，吸附的绿原酸基本已经洗脱完全。所以，洗脱液的用量为3BV。
[0118] 3、粗绿原酸的纯化效果分析
[0119] 大孔吸附树脂纯化法是提高绿原酸纯度最有效、简便的方法之一。通过最优条件： 上样量I. 06mg/mL，上样量3BV，上样速度为2BV/h，再用3BV的60 %的乙醇以2BV/h的流速 进行纯化分析，得到绿原酸I产品，测得其纯度为23. 13% (w/w)。
[0120] 纯化前绿原酸纯度为11. 40 % (w/w)，经纯化后绿原酸纯度达到23. 13 % (w/w)，提 高了 100.02%。可见NKA-2大孔树脂对葵花籽柏绿原酸具有较好的纯化效果。
[0121] 3、葵花籽柏绿原酸I溶致结晶工艺
[0122] (1)萃取剂的选择
[0123] 如图13所示，乙酸乙酯和正丁醇对绿原酸I的萃取效果明显高于其余三种萃取 剂。但考虑到除去萃取剂对后续工作的影响，所以选择沸点较低的乙酸乙酯。
[0124] (2) pH值对绿原酸萃取率的影响
[0125] 如图14所不，在pH = 2. 0时，绿原酸的萃取率达到最大值。这个可能是因为绿原 酸在过酸或过碱性条件下易解离成离子状态，不易萃取，所以选择pH = 2. 0为溶液的最佳 pH〇
[0126] (3)萃取时间对绿原酸萃取率的影响
[0127] 如图15所示，随着时间的增加，萃取剂对绿原酸的萃取率增大，当达到25mim时， 萃取剂对绿原酸的萃取基本达到饱和。所以选择最佳萃取时间为25min。
[0128] (4)萃取次数对绿原酸萃取率的影响
[0129] 如图16所示，随着萃取次数的增大，萃取剂对绿原酸的萃取率增大，当萃取4次 时，萃取率保持在80%，基本不变，这时绿原酸在水相中含量很低，基本已经无法萃取出来。 综合考虑，萃取次数应该选择为4次。
[0130] 4、绿原酸的精制及检测分析结果
[0131] 以乙酸乙酯为萃取溶剂，溶致结晶的最优工艺为：pH2.0,萃取时间25min，萃取四 次，在40°C下真空干燥2h，得到淡黄色绿原酸II产品。经检测其纯度为67. 56%。
[0132] (1)化学分析：紫外灯下观察有相同蓝色荧光斑点，实验表明提取样液中含有绿 原酸。
[0133] (2)通过高效液相色谱分析，如附图17所示，得到葵花籽柏绿原酸与绿原酸标准 品的色谱图，从图中可以看出，葵花籽柏绿原酸与绿原酸标品具有相同的保留值，表明所得 葵花籽柏绿原酸产品是绿原酸，且葵花籽柏绿原酸产品纯度较高。
[0134] 实施例四：绿原酸的体外抗氧化性和抑菌性研究结果
[0135] 1、葵花籽柏绿原酸体外抗氧化性
[0136] (1)总抗氧化能力
[0137] 绿原酸的总抗氧化能力结果如附图18所示，