一种药用绿原酸的制备方法

一种药用绿原酸的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种药用绿原酸的制备方法，它包括如下步骤：a、样品水相处理；b、冷冻；c、解冻过滤；d、滤渣有机相处理；e、浓缩结晶；f、根据样品中绿原酸的含量的差异性，选择a-e步骤重复次数；g、干燥。通过该方法对绿原酸提取物分离纯化，能够很好地除去提取物中的水溶性杂质及脂溶性杂质，使得最终产品的杂质含量符合药用要求；同时该方法操作简单，有机溶剂可回收利用，成本低，适用于各种方法提取得到绿原酸提取物进一步的分离纯化，尤其适用于药用绿原酸的制备。
【专利说明】一种药用绿原酸的制备方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药用绿原酸的制备方法。

【背景技术】
[0002] 绿原酸具有较广泛的抗菌作用，但在体内能被蛋白质灭活。与咖啡酸相似，口服 或腹腔注射时，可提高大鼠的中枢兴奋性。可增加大鼠及小鼠的小肠蠕动和大鼠子宫的张 力。有利胆作用，能增进大鼠的胆汁分泌。对人有致敏作用，吸入含有本品的植物尘埃后， 可发生气喘、皮炎等。目前报道绿原酸的分离纯化方法较多，如：申请号：CN201010558366 发明名称：冰冻浓缩结晶制备绿原酸的生产方法，本发明公开了一种绿原酸结晶的生产方 法，属于天然产物提取液浓缩的新方法，可用于天然产物分离纯化过程中含水溶液的浓缩 和化合物的结晶分离。本发明是将50%甲醇绿原酸溶液在0°C结晶，过滤结晶体，将结晶 母液在-50°C冷冻结冰，然后将冰取出，用刨冰机将其破碎成粉末状。将冰末送到离心分 离机上进行离心分离，得到高浓度的甲醇绿原酸溶液。然后向溶液中加入水至甲醇浓度为 50%甲醇绿原酸溶液。将该溶液置于0°C条件下结晶，分离结晶体，真空冷冻干燥，得含量 为98%以上的绿原酸。申请号：CN201210543580,发明名称：一种从红腺忍冬叶制备绿原 酸的方法，一种从杜仲叶中同时提取车叶草苷和绿原酸的生产工艺。它是以干燥的杜仲叶 的原料，采用水浴加热提取、上柱、洗脱、浓缩、动态提取、析晶、重结晶等工艺流程得车叶草 苷纯品；再将析晶后留下的丙酮母液浓缩与动态提取后留下的稠膏合并后萃取绿原酸。申 请号：CN201010135116,发明名称：一种杜仲叶制备绿原酸精品的方法，本发明涉及一种杜 仲叶制备绿原酸精品的方法，采用去离子水常温浸泡提取，压榨（或离心），大孔吸附柱层 析富集，醋酸乙酯萃取，去离子水重结晶的工艺流程。
[0003] 常用的绿原酸精制方法还有：树脂柱层析法、聚酰胺柱层析法、凝胶色谱法、高效 液相色谱法、结晶及重结晶法等。树脂柱层析法，该方法能够富集纯化绿原酸，但仅通过该 方法无法使得样品纯度及杂质符合药用要求；聚酰胺柱层析法，该方法能使绿原酸与黄酮 类得到很好的分离，可纯化得到较高纯度的绿原酸，但操作麻烦，洗脱时间长、成本高，材料 不易再生，产业化投资较大；凝胶色谱法，通过该方法可获得高纯度绿原酸，但是由于凝胶 价格昂贵、产品得率低，很难实现工业化生产；高效液相色谱法，该方法可获得较高纯度的 绿原酸，但由于技术要求高、产量低，目前仍停留在实验室阶段；结晶及重结晶是常用的精 制方法，该方法能富集纯化高纯度绿原酸，但是通常采用单一溶剂进行结晶及重结晶纯化 处理，纯化除去的杂质针对性较强，无法同时对不同极性的杂质进行分离纯化，对提取物选 择性较大，无法广泛运用于不同工艺制备出的提取物。有部分研宄文献报道，采用复合溶 剂结晶及重结晶的精制方法，通过改变复合溶剂的种类及比例来除去不同极性杂质达到纯 化的目的，该方法能有效除去提取物中的不同极性的杂质，但是由于复合溶剂回收再利用 时存在很大困难，同样存在一定的局限性，同时产品中因残留有复合溶剂，存在极大安全隐 患。


【发明内容】

[0004] 本发明的技术方案是提供了一种绿原酸的制备方法。
[0005] 本发明提供了一种药用绿原酸的制备方法，它包括如下步骤：
[0006] a、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸20mg/ml-2000mg/ml的溶液， 过滤；其中样品由杜仲叶提取分离出绿原酸含量不低于60%的提取物；配制温度不高于 60 0C ；
[0007] b、冷冻：将过滤所得的滤液于o°c以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0008] C、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于5-60°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0009] d、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯及乙酸丁酯当中的一种；溶解温度不高于60°C ;
[0010] e、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度不高于60°C，真空度不低于0. 04Mp ;
[0011] f、根据样品中绿原酸的含量的差异性，选择a-e步骤重复次数；当提取物含量为 60-80%时，a-e步骤的重复两次操作；当提取物含量为80-90%时，a-e步骤的重复一次操 作；当提取物含量为90%以上时，无需重复操作；
[0012] g、干燥：将结晶体过滤后，低温条件下进行干燥；干燥温度不高于60°C，可常压或 负压条件下干燥。
[0013] 进一步优选地，它包括如下步骤：
[0014] a、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸500mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为90%的提取物；配制温度为40°C ;
[0015] b、冷冻：将过滤所得的滤液于o°c以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0016] c、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于25°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0017] d、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸乙酯；溶解温度为60°C ;
[0018] e、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为60°C，真空度为0. 08Mp ;
[0019] f、干燥：将结晶体过滤后，低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，常压条件下干 燥。
[0020] 本发明还提供了该方法制备得到的绿原酸。
[0021] 其中，绿原酸含量大于98 %，含有一至六种有关物质，其中包括有5-咖啡酰奎尼 酸、4-乙烯基邻苯二酚、咖啡酸、4-咖啡酰奎尼酸、3-香豆酰奎尼酸、绿原酸甲基化物，含量 均在0. 5%以下。
[0022] 本发明采用水与有机溶剂结合的方法，利用绿原酸与水溶性杂质在不同温度水中 溶解度的差异性，通过水相冷冻重溶的方法除去提取物中的水溶性杂质；再利用绿原酸与 脂溶性杂质在有机溶剂中溶解度的差异性，通过对有机溶液浓缩结晶的方法除去提取物中 的脂溶性杂质。通过这两种不同极性的溶剂对绿原酸提取物分离纯化，能够很好地除去提 取物中的水溶性杂质及脂溶性杂质，使得最终产品的杂质含量符合药用要求；同时该方法 操作简单，有机溶剂可回收利用，成本低，适用于各种方法提取得到的绿原酸提取物进一步 的分离纯化，尤其适用于药用绿原酸的制备。

【具体实施方式】
[0023] 实施例1本发明药用绿原酸的制备方法
[0024] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸500mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为90%的提取物；配制温度为40°C。
[0025] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0026] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于25°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0027] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸乙酯；溶解温度为60°C ;
[0028] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为60°C，真空度为0. 08Mp ;
[0029] 6、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，常压条件下 干燥。
[0030] 实施例2本发明药用绿原酸的制备方法
[0031] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸800mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为60%的提取物；配制温度为50°C ;
[0032] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0033] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于KTC条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0034] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸丙酯；溶解温度为60°C ;
[0035] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为60°C，真空度为0. 07Mp ;
[0036] 6、a-e步骤依法重复两次操作；
[0037] 7、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，常压条件下 干燥。
[0038] 实施例3本发明药用绿原酸的制备方法
[0039] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸20mg/ml的溶液，过滤；其中样 品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为85%的提取物；配制温度为20°C ;
[0040] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0041] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于5°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0042] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸甲酯；溶解温度为20°C ;
[0043] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为40°C，真空度为0. 04Mp ;
[0044] 6、a-e步骤依法重复一次操作；
[0045] 7、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为40°C，常压条件下 干燥。
[0046] 实施例4本发明药用绿原酸的制备方法
[0047] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸100mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为72%的提取物；配制温度为30°C ;
[0048] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0049] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于60°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0050] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸丁酯；溶解温度为60°C ;
[0051] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为60°C，真空度为0. 09Mp ;
[0052] 6、a-e步骤依法重复两次操作；
[0053] 7、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，负压条件下 干燥。
[0054] 实施例5本发明药用绿原酸的制备方法
[0055] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸2000mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为68%的提取物；配制温度为60°C ;
[0056] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于(TC以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0057] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于60°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0058] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸乙酯；溶解温度为50°C ;
[0059] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为50°C，真空度为0. 05Mp ;
[0060] 6、a-e步骤依法重复两次操作；
[0061] 7、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为40°C，负压条件下 干燥
[0062] 实施例6本发明药用绿原酸的制备方法
[0063] 1、样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸1500mg/ml的溶液，过滤；其中 样品由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为95%的提取物；配制温度为60°C ;
[0064] 2、冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻；
[0065] 3、解冻过滤：将冷冻所得的冰块于60°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于 5°C，过滤；
[0066] 4、滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂 为乙酸丙酯；溶解温度为60°C ;
[0067] 5、浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结 晶；浓缩温度为60°C，真空度为0. 08Mp ;
[0068] 6、干燥：将结晶体过滤后，于低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，负压条件下 干燥
[0069] 实施例7本发明实施例1-6药用绿原酸的质量
[0070] 含量的检测方法为：
[0071] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0. 1 %甲酸溶 液-乙腈（92:8)为流动相；检测波长215nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000,绿原 酸峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求；
[0072] 测定法取本品适量，精密称定，加流动相制成每Iml约含10 μ g的溶液，作为供试 品溶液，精密量取20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图；另取绿原酸对照品适量，精密称定， 加流动相制成每Iml含10 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；
[0073] 杂质的检测方法为：
[0074] 取本品适量，精密称定，加流动相制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为供试品溶液；取 供试品溶液Iml置IOOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液；另取咖啡酸对照品 适量，精密称定，加流动相制成每Iml中含2 μ g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下 的色谱条件，取对照溶液20 μ 1注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约 为满量程的20%，再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20 μ 1，分别注入液相 色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍；供试品溶液色谱图中如有咖啡酸杂质峰， 按外标法计算；如有其它杂质峰，按自身对照法计算。
[0075] 表1各实施例中药用绿原酸的质量
[0076] 有关物质（％) _ 含量 实施例 5-咖啡酰4-乙烯基 4-咖啡酰3-香豆酰绿原酸甲 咖啡酸 （％) 奎尼酸 邻苯二酚 奎尼酸 奎尼酸 基化物 丈Mi例1 -- -- -- -- 0.016 -- 99.9! 、文:施例 2 0 032 0.081 0.064 0.056 0.223 0.115 99.25 ·、；)、:施例 3 -- 0.063 -- -- 0,152 -- 99.64 ''义:施例 4 0.042 0.09S 0.025 -- 0.133 -- 99.49 丈施例5 -- 0.192 0.123 -- 0.257 -- 99.14 、义:施例 6 -- 0.246 0.081 -- 0.163 -- 99.34
【权利要求】
1. 一种药用绿原酸的制备方法，它包括如下步骤： a、 样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸20mg/ml-2000mg/ml的溶液，过滤； 其中样品由杜仲叶提取分离出绿原酸含量不低于60%的提取物；配制温度不高于60°C ; b、 冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻； c、 解冻过滤：将冷冻所得的冰块于5-60°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于5°C， 过滤； d、 滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂溶解，过滤，得有机溶液；其中有机 溶剂为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯及乙酸丁酯当中的一种；溶解温度不高于60°C ; e、 浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有沉淀产生，静置结晶；浓缩温 度不高于60°C，真空度不低于0. 04Mp ; f、 根据样品中绿原酸的含量的差异性，选择a-e步骤重复次数；当提取物含量为 60-80%时，a-e步骤的重复两次操作；当提取物含量为80-90%时，a-e步骤的重复一次操 作；当提取物含量为90%以上时，无需重复操作； g、 干燥：将结晶体过滤后，低温条件下进行干燥；干燥温度不高于60°C，可常压或负压 条件下干燥。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、 样品水相处理：将样品用纯化水配制成含绿原酸500mg/ml的溶液，过滤；其中样品 由杜仲叶中提取分离出绿原酸含量为90%的提取物；配制温度为40°C ; b、 冷冻：将过滤所得的滤液于0°C以下冷冻，直至滤液完全冰冻； c、 解冻过滤：将冷冻所得的冰块于25°C条件下解冻，并保持解冻液温度不高于5°C，过 滤； d、 滤渣有机相处理：将过滤所得滤渣，用有机溶剂充分溶解，过滤；其中有机溶剂为乙 酸乙酯；溶解温度为60°C ; e、 浓缩结晶：将有机溶液于低温负压条件下浓缩，直至有少量沉淀产生，静置结晶；浓 缩温度为60°C，真空度为0. 08Mp ; f、 干燥：将结晶体过滤后，低温条件下进行干燥；干燥温度为60°C，常压条件下干燥。
3. 权利要求1或2的方法制备得到的绿原酸。
4. 权利要求3所述的绿原酸，其特征在于：绿原酸纯度大于98 %，含有一至六种有关物 质，其中包括有5-咖啡酰奎尼酸、4-乙烯基邻苯二酚、咖啡酸、4-咖啡酰奎尼酸、3-香豆酰 奎尼酸、绿原酸甲基化物，含量均在0. 5 %以下。
【文档编号】C07C67/48GK104496815SQ201410696450
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月26日 优先权日:2014年11月26日
【发明者】张洁, 张亮, 黄望 申请人:四川九章生物科技有限公司