适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪， 灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。
[0023] 进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR 反应液。所述内参为ACTIN。
[0024] 所述的试剂盒还包含RNA抽提试剂。
[0025] 本发明目的是提供了一种胃癌蛋白检测试剂盒，所述的检测试剂盒检测ADAMTS-2 蛋白。进一步的，所述的试剂盒还包括其他检测试剂。
[0026] 本发明目的是提供了一种检测胃癌的基因芯片，所述的基因芯片包括与ADAMTS-2 基因的核酸序列杂交的探针。
[0027] 本发明的药剂学上可接受的载体为在制剂时通常利用的载体，该载体包含乳糖 (lactose)、右旋糖（dextrose)、鹿糖（sucrose)、山梨醇（sorbitol)、甘露醇（mannitol)、 淀粉、阿拉伯橡胶、磷酸钙、藻酸盐（alginate)、凝胶（gelatin)、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙 稀P比略烧酮（polyvinylpyrrolidone)、纤维素（cellulose)、水、糖衆、甲基纤维素（methyl cellulose)、羟基苯甲酸甲酯（methylhydroxybenzoate)、丙基羟基苯甲酸丙酯（propyl hydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸儀（stearicacidmagnesium)及矿物油（mineraloil) 等，但并非局限于此。
[0028] 本发明的药剂学可接受的载体除了上述成分以外还可以包含润滑剂、湿润剂、甜 味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。药剂学上许可的适合的载体和制剂详细记载于雷 明登氏药学全书。
[0029] 本发明的药剂学组合物能通过口服或非口服进行给药，作为非口服给药时，能通 过静脉内注射，鼻腔内注射，局部注射，脑室内注射，脊髓腔注射，皮下注射，腹腔注射，经皮 给药等方式进行给药。
[0030] 本发明的药剂学组合物的适合的给药剂量根据制剂化方法、给药方式、患者的年 龄、体重、性别、病态、食物、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性之类的因素而可以 进行多种处方，通常，熟练的医生能够容易地决定及处方对所希望的治疗或预防有效的给 药剂量。
[0031] 本发明的药剂学组合物根据本发明所属技术领域的普通技术人员可以容易实施 的方法，利用药剂学上能接受的载体和/或赋形剂来进行制剂化，从而能够以单位用量形 态制备或者内装在多容量容器内来制备。此时，剂型是油性或者水性介质中的溶液、悬浮液 或乳化液形态，或者也可以是浸膏剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或者胶囊剂形态，还可以包括分 散剂或者稳定剂。
【附图说明】
[0032] 图1干扰后各组ADAMTS-2mRNA相对表达量
【具体实施方式】
[0033] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本 发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可 以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限 定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条 件实施检测。
[0034] 实施例1GE0数据的筛选及分析
[0035] 限制研究类型为"expressionprofilingbyarray"符合以下标准的数据集将纳 入我们的研究中：
[0036] ①所选数据集必须是全基因组的表达谱测序数据；
[0037] ②这些数据来自于胃癌病例组和/或对照组（无药物刺激或被转染）样本；
[0038] ③本研究均考虑经标准化或者原始数据集。
[0039] 最后，有6套芯片数据集纳入我们的研究。结果详见表1。
[0040] 表1胃癌数据集的基本情况 [0041 ]
[0042] 将所有的数据集整合得到17481个基因。根据芯片注释将探针ID转换为基因ID， 筛选所有表达谱共有基因，对于每套表达谱进行缺失数据填充，并标准化数据。利用limma 软件包分析差异表达基因。筛选方法：计算p-value并计算FalseDiscoveryrate(FDR)， FDR〈0. 01为差异表达基因。共筛选出2327个差异表达基因，通过人工筛选，上调表达差异 明显的ADAMTS-2基因纳入我们的研究范围。
[0043] 实施例2病例的收集
[0044] 所有组织标本均来医院2012年11月至2014年6月经确诊的胃癌患者。取材时， 分别取癌中央部位组织和癌旁正常胃粘膜组织，标本迅速放入小型液氮罐中保存。
[0045] 实施例3提取样本中的总RNA
[0046] 1)样本组织小块放在培养皿中，加入1mlTrizol，剪碎后移至匀浆器中匀浆；
[0047] 2)匀浆完成后，取出匀浆液置于EP管中，定容至lml，可冻存与-70°C;
[0048] 3) 15-30°C放置 5min，加入 200μ1 氯仿，剧烈震荡 15sec，15-30°C放置lOmin;
[0049]4) 2_8°C，低于 12000g/min离心 1Omin，弃上清，加入lml75% 乙醇，低于 7500g/ min离心5min，弃上清后，点离；
[0050]5)待沉淀干燥（呈半透明状，不用完全干燥，否则会降低稳定性），用RNase-free water55-60°C溶解，冻存于 _70°C。
[0051] 实施例4胃癌组及癌旁组ADAMTS-2基因表达情况
[0052] 一、材料和方法
[0053] 1、材料
[0054] 选取67例胃癌患者癌组织及癌旁组织，对其进行分组及编号。
[0055] 2、方法
[0056] 2. 1RNA的提取
[0057] 见实施例3。
[0058] 2. 2逆转录合成cDNA
[0059]米用Superscript?,inReverseTranscriptase(invitrogen，货号18〇8〇-〇44)进 行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：
[0060] 使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对1μg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用 25μ1反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。获得的cDNA保存放-20°C冰箱备 用。
[0061] 2. 3 Real-Time PCR
[0062] 2· 3· 1仪器及分析方法
[0063] 用ABI7500型荧光定量PCR仪，采用2-ΛΛCT法进行数据的相对定量分析。
[0064] 2. 3. 2引物设计
[0065]采用在线引物设计软件，基因序列参照NCBI:ΝΜ_014244. 4 (ADAMTS-2)，内参选 ACTIN，引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如下：
[0066]ADAMTS-2基因扩增引物：
[0067]上游引物：5'-TTAGCAGATGAAGCAGTT-3'（SEQIDN0.9)
[0068]下游引物：5' -GTATCGGTAAGCCAGAAT-3'（SEQIDNO. 10)
[0069] 扩增长度107bp。
[0070] 操作过程如下：
[0071] ( 一）反应体系：用PowerSYBR￥.GreenPCRMasterMix(invitrogen，货号 4367659)进行扩增：2Xmix10μ1 ;10uM的上游引物和下游引物各0. 5μ1;模板2μ1，加 入灭菌蒸馏水补平至25μ1。
[0072]扩增程序为：95°C 5min，（95°C 15sec，55°C 45sec) Χ35个循环。
[0073](二）引物筛选
[0074] 将各样本cDNA混合后，以此为模板进行5倍梯度稀释，稀释后样品各取2μ1作模 板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95Γ进行融解曲线分