好，放入高压灭菌锅中灭菌(121°C，60min)。考虑到灭菌过程中增加的湿含量，最终灭菌结束后培养基的湿含量在50%左右即可。
[0038](2)设备灭菌单元操作:发酵罐在实验前需要提前进行蒸汽消毒，用蒸汽锅炉生产121°C的过热蒸汽，通过蒸汽管路进入罐内进行杀菌消毒，消毒时间为60min。所有管路均需要用蒸汽进行高温灭菌，保证管路的无菌。
[0039](3)黑曲霉麸曲培养基二次灭菌:将灭菌后的黑曲霉菌种培养基放入空消完成后的发酵罐中，通入121°C的过热蒸汽，持续灭菌60min，在灭菌过程中保持发酵罐转动，夹套水温度设置为100°C。
[0040](4)黑曲霉菌种培养基降温:将灭菌完毕的物料在无菌空气的保护下进行降温，并通过夹套，转动以及通气等方式辅助降温，将物料温度降到35°C。
[0041](5)黑曲霉菌丝接种:利用蠕动栗将黑曲霉菌丝液接种到培养基中，接种比为10%，接种过程中保持发酵罐一直转动，便于种子液与培养基均匀混合。
[0042]3培养过程参数的调节:
[0043](1)通过PLC调节夹套水流量从而控制发酵罐的换热，保证罐内温度在33?37°C范围内。
[0044](2)每隔一个小时转动一次发酵罐(转速3r/min，时间为5?lOmin，当物料温度达到35°C时停止转动)。物料的翻转，不仅有利于热量的散失，而且可以保证发酵过程产生二氧化碳的排出以及氧气与物料的充分接触。
[0045](3)在整个发酵过程中，无菌空气均需先进入空气增湿系统再进入发酵罐内，时刻补充物料水分。
[0046](4)物料在发酵过程中消耗的水分会很多，所以在黑曲霉对数生长期以及稳定生长前期(2—4d)时发酵过程需要单独为物料补水。补水过程也需要灭菌操作，保证加水过程中不会染菌。
[0047](5)发酵过程持续6?7天，前四天发酵罐内温度变化会比较剧烈，发酵温度升温较快，能达到2?3°C/h，为菌丝加速生长阶段，所以此过程中温度以及湿度必须要保证控制在合理范围内(33?37°C)，后三天为孢子生长阶段，温度变化较为平缓，且孢子生成时物料湿含量不宜过高，因此不需要单独加水，只要湿空气(相对湿度80%以上)通入即可。
[0048](6)发酵过程中要测定发酵温度(33?37°C)，湿度，氧气浓度15%)，二氧化碳浓度(< 25% )等参数，保证各个参数均维持在适宜的培养条件内。
【主权项】
1.一种固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:该方法的步骤包括: 1).将黑曲霉菌种接种于PDA斜面上进行活化培养，得到纯种的黑曲霉斜面菌种； 2).采用配制好的液体培养基培养纯种黑曲霉菌种获得液态黑曲霉种子液； 3).利用过滤筛筛取合适粒径的麸皮作为固态培养基，并进行含水量调配，调配完成后放入发酵罐进行消毒； 4).利用蠕动栗将培养好的液态黑曲霉种子液均匀的接种到发酵罐中进行扩大培养； 5).黑曲霉种子培养过程中通入无菌空气，调节夹套水温以及调节发酵罐转速来保证供氧量与生长温度。2.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤1)中，黑曲霉斜面菌种的活化培养温度为35?37°C，培养时间是5?7天。3.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤2)中的液体培养基的制备方法为:取10-20wt %玉米淀粉，0.2-lwt %豆柏粉装入烧杯中，加入蒸馏水，并加入0.2-lwt%高温淀粉酶，放到石棉网上加热，并不断搅拌至溶液由乳白色变白色透明淀粉水解后，停止加热，待烧杯冷却后，补水至1000ml。4.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤2)中，接种完纯种黑曲霉菌种的液体培养基放置于恒温摇床中进行培养，培养温度为33-37°C，培养时间为20-28h，转速为160-200r/h，得到液体黑曲霉接种子液。5.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤3)中用60-80目的筛子筛取麸皮，取筛上麸皮，灭菌结束后培养基湿含量在50%。6.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤4)中，发酵罐在实验前进行蒸汽消毒，用蒸汽锅炉生产121°C的过热蒸汽，通过蒸汽管路进入罐内进行杀菌消毒，消毒时间为60min，将灭菌后的黑曲霉菌种培养基放入空消完成后的发酵罐中，通入121 °C的过热蒸汽，持续灭菌60min，在灭菌过程中保持发酵罐转动，夹套水温度设置为100°C。7.根据权利要求1所述的固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，其特征在于:所述步骤5)中发酵罐控制包括如下步骤: (1)通过PLC调节发酵罐夹套水流量从而控制发酵罐的换热，保证发酵罐内温度在33?37°C范围内； (2)每隔一个小时转动一次发酵罐，转速3r/min，时间为5?lOmin，当物料温度达到35°C时停止转动； (3)在整个发酵过程中，无菌空气均先进入空气增湿系统再进入发酵罐内，时刻补充物料水分； (4)在黑曲霉的第2—4天的对数生长期以及稳定生长前期，单独为物料补水，以补充物料在发酵过程中消耗的水分。
【专利摘要】本发明涉及一种固态发酵法规模化制取黑曲霉孢子的方法，包括黑曲霉接种液配制、菌种固态培养基制备、培养过程参数控制等。本发明首先对纯种的黑曲霉斜面菌种进行培养，获得纯种黑曲霉斜面菌种，然后采用液态培养法获得液态黑曲霉接种液，利用蠕动泵将黑曲霉接种液均匀的接种到发酵罐中进行固态扩大培养，控制好培养参数，培养5-7天后可获得所需黑曲霉菌种。本发明采用发酵罐规模化培养技术制备黑曲霉菌种，有效的减少了三角瓶，培养箱等设备的使用，减少了培养过程染菌的几率，对节约生产成本，提高菌种品质具有重要意义。
【IPC分类】C12N3/00, C12N1/14, C12R1/685
【公开号】CN105462846
【申请号】CN201510891838
【发明人】李占勇, 徐庆, 刘建波, 任超杰, 王瑞芳, 王娟, 王祥河, 魏呐
【申请人】天津科技大学, 天津市工业微生物研究所有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月7日