[0026]1、培养基配制:
[0027]1)菌种保藏培养基(固体，1L):蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，加水至lL，pH7.5;
[0028]2)菌种活化培养基(液体，1L):蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，加水至1L，pH7.5;
[0029]3)种子培养基(液体，101^):]\%5041.(^，1012?045.(^，恥(:1 5.0g，K2HP04l5.0g，糖蜜200g，酵母膏 50g，加水至 10L，pH7.5;
[0030]4)发酵培养基(液体，200L):MgS0420g，KH2P04l00g，NaCl 100g,K2HP04300g, (NH4)2SO40.5kg，糖蜜 10kg，豆饼粉 2kg，加水至 200L，pH7.5;
[0031]以上培养基均在115°C灭菌25min。
[0032]2、菌种活化:挑取有机磷农药降解菌接种至菌种保藏培养基平板，30°C连续划线、挑单菌落培养两次后，挑取单菌落接种于菌种活化培养基中，于30°C，160r/min摇床振荡培养 16h ；
[0033]3、液体种子制备:向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5%的接种量接种步骤2活化的有机磷农药降解菌，于35°C，通空气培养16h，得到液体种子。
[0034]4、液态发酵:向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5%的接种量接种有机磷农药降解菌液体种子，于35°C，通空气培养16h，得到活菌体培养物。
[0035]5、菌剂制备:培养好的发酵液经细菌计数后，超滤浓缩，调节至101()CFU/mL，加入质量分数为0.6%的甘氨酸、质量分数为1%的甘油和质量分数为1%的吐温80，灌装，保藏于阴凉处。使用时用水稀释500倍。
[0036]实施例2:有机磷农药降解菌剂对辣椒表面敌敌畏农药残留的降解效果
[0037]1)选取两个完全相同的辣椒地块，各30m2，均匀喷洒1000倍稀释的80%敌敌畏乳油农药；
[0038]2)8h后，一地块均匀喷施用清水稀释500倍的农药降解菌剂作为处理组，另一地块以喷施清水作对照组；
[0039]3)24h后，五点取样法检测辣椒表面敌敌畏残留，结果显示，处理组较对照组敌敌畏残留量减少85%左右。
[0040]实施例3:有机磷农药降解菌剂对辣椒叶面乐果的降解效果
[0041 ] 1)选取两个完全相同的辣椒地块，各30m2，均匀喷洒1000倍稀释的50 %乐果乳油农药；
[0042]2)8h后，一地块均匀喷施用清水稀释500倍的农药降解菌剂作为处理组，另一地块以喷施清水作对照组；
[0043]3)36d后，五点取样法检测辣椒表面乐果的残留，发现处理组较对照组乐果残留量减少75%左右。
[0044]从上述实施例可以看出，本发明提供的有机磷农药降解菌剂，可以有效降低有机磷农药在植物表面的残留，从而降低有机磷农药对食用植物叶、果实的人畜的毒性。
【主权项】
1.一种有机磷农药降解菌剂，其特征在于:包含质量分数为95-98.5%的浓度为101()CFU/mL的地衣芽孢杆菌，质量分数为0.5-1 %的甘氨酸，质量分数为0.5_2%的甘油和质量分数为0.5-2 %的吐温80 ； 其中，该地衣芽孢杆菌的菌种分类名称为:地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)B4，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为:北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏日期:2012年10月15日，保藏编号:CGMCC N0.6677。2.如权利要求1所述的有机磷农药降解菌剂的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: 步骤1.培养基配制: 1)菌种保藏培养基:蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，加蒸馈水至1L，调pH7.0-7.8,115°C 灭菌 20-30min，每 100mL 倒一块平板； 2)菌种活化培养基:蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，加蒸馏水至1L，调pH7.0-7.8,115°C 灭菌 20_30min; 3)种子培养基:MgS041.0g，KH2P04 5.0g，NaCl 5.0g,K2HP04 15.(^，糖蜜20(^，酵母膏50g，加蒸馏水至 10L ,pH7.0-7.8,115°C 灭菌 20_30min ； 4)发酵培养基:MgS0420g，KH2P04 100g，NaCl 100g,K2HP04 300g, (NH4)2S04 0.5kg，糖蜜 10kg，豆饼粉 2kg，加水至 200L，pH7.0-7.8，115°C 灭菌 20_30min ； 步骤2.菌种活化:挑取权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，接种至菌种保藏培养基平板，30°C连续划线、挑单菌落培养两次，然后，挑取单菌落接种于菌种活化培养基中，30°C，150-200r/min摇床振荡培养12-20h; 步骤3.液体种子制备:向装有经高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照3-8%的接种量接种步骤2活化的地衣芽孢杆菌，32-37°C，通空气培养15-20h，得到液体种子； 步骤4.液态发酵:向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照3-8%的接种量接种步骤3制备的液体种子，32-37°C，通空气培养15-20h，得到活菌体培养物； 步骤5.菌剂制备:培养好的发酵液经细菌计数后，超滤浓缩，调节至101()CFU/mL，加入质量分数为0.5-1 %的甘氨酸、质量分数为0.5-2 %的甘油和质量分数为0.5-2 %的吐温80，灌装，保藏于阴凉处。
【专利摘要】本发明提供一种有机磷农药降解菌剂，包含质量分数为95-98.5％的浓度为1010CFU/mL的地衣芽孢杆菌，质量分数为0.5-1％的甘氨酸，质量分数为0.5-2％的甘油和质量分数为0.5-2％的吐温80；其中，该地衣芽孢杆菌的菌种分类名称为：地衣芽孢杆菌(Bacillus？licheniformis)B4，保藏编号：CGMCC？No.6677。该菌剂的制备方法包括：培养基配制、菌种活化、液体种子制备、液态发酵、菌剂制备，发酵培养基以糖蜜和豆饼粉为主要原料。本发明提供的有机磷农药降解菌剂能原位高效降解植物果实表面和叶片上有机磷农药残留，保障食品安全，保护生态环境。CGMCC No. 667720121015
【IPC分类】C12N1/20, A62D101/26, A62D101/04, A62D3/02, C12R1/10
【公开号】CN105483066
【申请号】CN201610104111
【发明人】李祖明, 陈琳, 杨翠, 安君, 白志辉
【申请人】北京联合大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2016年2月25日