入干燥粉末磷脂10g，再分别加入浓度为85%的乙醇，将烧杯 放入水浴锅中加热，水浴锅的温度分别为20°〇、30°〇、40°〇、50°〇和60°〇，并用玻璃棒不断搅 拌，使磷脂乙酰胆碱溶解到乙醇中，乙醇呈棕黄色时停止搅拌，静置一会分离固体，向固体 中再加入乙醇重复上述操作直至乙醇洗液为无色透明为止，合并乙醇洗液；
[0035]将乙醇洗液进行蒸馏，蒸馏温度为45°C，残压为0.3-1.33kPa，直至无馏出物，将蒸 馏后的固体切割为小块进行真空干燥，温度为60-65°C，残压为0.3-1.33kPa，时间为90-95min，得到磷脂酰胆碱，称重记录。
[0036]考查蒸馏温度因素对磷脂酰胆碱得率的影响：
[0037]在5个烧杯中分别加入干燥粉末磷脂10g，再分别加入浓度为85%的乙醇，将烧杯 放入水浴锅中加热至40°C，并用玻璃棒不断搅拌，使磷脂乙酰胆碱溶解到乙醇中，乙醇呈棕 黄色时停止搅拌，静置一会分离固体，向固体中再加入乙醇重复上述操作直至乙醇洗液为 无色透明为止，分别合并乙醇洗液；
[0038]将乙醇洗液进行蒸馏，蒸馏温度分别为25°C、30°C、40°C、50°C、60°C，残压为0 · 3- 1.33kPa，直至无馏出物，分别将蒸馏后的固体切割为小块进行真空干燥，温度为60-65°C， 残压为0.3-1.331^&，时间为90-951^11，得到磷脂酰胆碱，称重记录。对单因素实验结果进行 分析处理，结果如下：
[0039]表1、乙醇浓度单因素实验结果（乙醇浸洗温度40°C、蒸馏温度45°C)
[0040]
[0045]~3、正交试验
[0046]正交试验采用三因素三水平，三因素为乙醇浓度、乙醇浸洗温度和蒸馏温度，三水 平为单因素实验中确定的较优提取参数范围的附近取值，正交实验方案如下：
[0047]表4、三因素三水平正交实验方案
[0049] 按照单因素实验中的方法步骤进行实验后记录结果并计算极差，结果如下：
[0050]
[0051]从正交试验的结果中可以分析出，在利用乙醇萃取-蒸馏制备大豆磷脂酰胆碱的 方法中，乙醇浓度最优值为85%、乙醇浸洗温度最优值45°C、蒸馏温度最优值35°C，在此条 件下，用IOg的粉末磷脂可以得到3.06g大豆磷脂酰胆碱，得率为30.6%。
[0052] 实施例2、
[0053]按照本发明提供的方法制备大豆磷脂酰胆碱 [0054]粉末磷脂的制备
[0055]在烧杯中加入大豆浓缩磷脂300g，均分3次加入，再加入3倍量(体积比）丙酮，将烧 杯放入水浴锅中加热至40-45°C，并用玻璃棒不断搅拌，使油和脂肪酸溶于丙酮，丙酮呈棕 黄色时停止搅拌，静置片刻将上层含杂丙酮分离，向固体中再加丙酮重复上述操作，直至丙 酮洗液至无色透明为止，一般需浸洗五次，第三次之后的浸洗丙酮量降低为体积比为2倍 量，每次洗液均倒入烧杯中回收;将滤纸折好，置于长颈漏斗上，将最后一次浸洗的含固体 的丙酮洗液进行过滤，滤液同前面的洗液合并，截留滤纸中的滤渣即为湿状粉末磷脂;将湿 状粉末磷脂在真空干燥箱中进行干燥，干燥条件为温度60_65°C、残压0.3-1.33kPa、时间为 70-80min，得到干燥粉末磷脂。
[0056]大豆磷脂酰胆碱的提取
[0057]在烧杯中加入干燥粉末磷脂IOg，再加入浓度为80 %的乙醇，将烧杯放入水浴锅中 加热至35°C，并用玻璃棒不断搅拌，使磷脂乙酰胆碱溶解到乙醇中，乙醇呈棕黄色时停止搅 拌，静置一会分离固体，向固体中再加入乙醇重复上述操作直至乙醇洗液为无色透明为止， 合并乙醇洗液；
[0058]将乙醇洗液进行蒸馏，蒸馏温度为35°C，残压为0.3-1.33kPa，直至无馏出物，将蒸 馏后的固体切割为小块进行真空干燥60-65°C、残压0.3-1.331^&、时间为90-951^11，得到磷 脂酰胆喊2.46g，得率为24.6 %。
[0059] 实施例3、
[0060]与实施例2不同的地方在于，乙醇浓度为85%、乙醇浸洗温度为40°C、蒸馏温度为 40°C，其他步骤与实施例2相同，最后得到大豆磷脂酰胆碱2.66g，得率为26.6%。
[0061 ] 实施例4、
[0062]与实施例2不同的地方在于，乙醇浓度为90%、乙醇浸洗温度为45°C、蒸馏温度为 45°C，其他步骤与实施例2相同，最后得到大豆磷脂酰胆碱2.31g，得率为23.1 %。
[0063] 实施例5、
[0064]与实施例2不同的地方在于，乙醇浓度为85%、乙醇浸洗温度为45°C、蒸馏温度为 35°C，其他步骤与实施例2相同，最后得到大豆磷脂酰胆碱3.06g，得率为30.6%。
【主权项】
1. 大豆磷脂酰胆碱的提取条件优化方法，其特征在于，综合现有技术中利用乙醇萃取-蒸馏提取大豆磷脂酰胆碱的工艺，进行提取工艺中的单因素实验考查，然后利用正交试验 确定最优的提取条件。2. 按照权利要求1所述的大豆磷脂酰胆碱的提取条件优化方法，其特征在于，具体步骤 如下： 1) 综合现有技术中利用乙醇萃取-蒸馏提取大豆磷脂酰胆碱的工艺为：先用丙酮浸洗 大豆浓缩磷脂得到粉末磷脂，在20-60°C范围内用浓度为70 %-100 %的乙醇浸洗粉末磷脂， 得到大豆磷脂酰胆碱乙醇溶液，25-60°C温度范围内进行蒸馏至无乙醇馏出，对馏出物真空 干燥得到大豆磷脂酰胆碱； 2) 提取过程中单因素实验考查： 当步骤1)中乙醇浸洗温度为20-60°C、蒸馏温度为25-60°C时，在乙醇浓度为70%-100%范围内，分散选取5个以上的点进行单因素实验； 当步骤1)中乙醇浓度为70%-100%、蒸馏温度为25-60°C时，在乙醇浸洗温度为20-60 °C范围内，分散选取5个以上的点进行单因素实验； 当步骤1)中乙醇浓度为70%-100%、乙醇浸洗温度为20-60°C时，在蒸馏温度为25-60 °C范围内，分散选取5个以上的点进行单因素实验； 将用相等质量的粉末磷脂通过上述单因素实验制得的大豆磷脂酰胆碱真空干燥后称 重，得到大豆磷脂酰胆碱色状好、得率高的为提取工艺中较优的参数，通过单因素实验考 查，确定利用乙醇萃取-蒸馏提取大豆磷脂酰胆碱的较优提取参数范围为：乙醇浓度80-90%、乙醇浸洗温度35-45°C、蒸馏温度35-45°C; 3) 正交试验 采用三因素三水平的方法，三因素为乙醇浓度、乙醇浸洗温度和蒸馏温度，三水平为步 骤2)中确定的较优提取参数范围的两端值和中间值，进行9次试验后分析极差，确定利用乙 醇萃取-蒸馏提取大豆磷脂酰胆碱的最优提取参数为乙醇浓度85%、乙醇浸洗温度45°C和 蒸馏温度35°C。3. 大豆磷脂酰胆碱的提取方法，其特征在于，先用丙酮浸洗大豆浓缩磷脂得到粉末磷 月旨，再在35-45°C温度范围内用浓度范围80-90 %的乙醇浸洗粉末磷脂，得到大豆磷脂酰胆 碱乙醇溶液，在35-45°C温度范围内进行蒸馏至无乙醇馏出，对馏出物真空干燥得到大豆磷 脂酰胆碱。4. 按照权利要求3所述的方法，其特征在于，乙醇浓度为85%，乙醇浸洗温度为45°C，蒸 馏温度为35°C。5. 按照权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，用丙酮浸洗大豆浓缩磷脂时温度 为40-45°C。6. 按照权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，用丙酮浸洗大豆浓缩磷脂得到粉 末磷脂后，还包括真空干燥步骤，真空干燥条件为温度60-65°C、残压0.3-1.33kPa、时间为 70-80min〇7. 按照权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，蒸馏乙醇的残压为0.3-1.33kPa。8. 按照权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，对馏出物进行真空干燥的条件为： 温度60-65°C、残压0 · 3-1 · 33kPa、时间为90-95min。
【专利摘要】本发明属于大豆磷脂酰胆碱提取技术领域，具体涉及一种大豆磷脂酰胆碱的提取条件优化方法及提取方法，综合现有技术中利用乙醇萃取-蒸馏提取大豆磷脂酰胆碱的工艺，进行提取工艺中的单因素实验考查，然后利用正交试验确定最优的提取条件，实现对提取条件的优化，在优化范围内按照本发明提供的方法进行大豆磷脂酰胆碱的提取，得到的大豆磷脂酰胆碱色状好，得率高，适合大规模生产。
【IPC分类】C07F9/10
【公开号】CN105541900
【申请号】CN201610041943
【发明人】肇立春, 吴隆坤, 孟思, 张鹤男, 宋二立, 王佳佳
【申请人】沈阳师范大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月21日