用于微嵌合检测和个体识别的引物、探针、试剂盒及方法

用于微嵌合检测和个体识别的引物、探针、试剂盒及方法
【专利摘要】本发明属于基因工程技术领域，公开了一种用于微嵌合检测和个体识别的引物和探针组合、含有该引物和探针组合的试剂盒以及采用该引物和探针组合或试剂盒进行微嵌合检测和个体识别的方法。本发明基于最新的InDel位点数据库，以亚洲人群为基准，筛选出针对亚洲人群高个体识别率的15个InDel位点，并针对每一InDel位点，进一步设计特异性引物和探针组合。与现有技术相比，本发明方法具有多态性强、特异性好、灵敏度高和简便快捷的优点，为亚洲人群进行微嵌合检测和个体识别提供了非常重要的检测手段。
【专利说明】
用于微嵌合检测和个体识别的引物、探针、试剂盒及方法
技术领域
[0001] 本发明设及基因工程技术领域，具体设及用于微嵌合检测和个体识别的引物、探 针、试剂盒及方法。
【背景技术】
[0002] 现代遗传学家认为，基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核巧 酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。基因不仅可W通过复制把遗传信息传递给 下一代，还可W使遗传信息得到表达。运种遗传信息蕴含在人的骨骼、毛发、血液等所有人 体组织或器官中。通过人类基因组多态性位点的差异，进行基因检测来识别不同个体，目前 已被广泛运用于法医和临床试验。
[0003] 近来已开发出多种遗传标记用于个体识别。其中，短串联重复序列（Shod Tandem R邱eats,STR)由于检测方法简便、快速、准确性高、扩增片段大小适中，被认为是法医DNA鉴 定中最标准、最权威的途径和方法，能够解决大多数的实际问题。但是，由于STR存在局突变 率(一般为1〇- 2~1〇-4)，检测的片段较长（100~400bp)，不易实现对降解检材的DNA分型，同 时嵌合率检测灵敏度在5 %左右，而临床上进行微移植或者微治疗的时候，一般嵌合率需要 维持在1~2 % W下，无法满足要求。
[0004] 嵌合体是指同一个体体内存在不同遗传性状的细胞嵌合现象，即含有两套或两套 W上染色体组的状态。其中，微嵌合是指不同个体来源的细胞成分低于1%的现象。微嵌合 检测要求更高灵敏度的检测方法。因此，STR不能进行微嵌合分析。
[0005] 随着基因组研究的进展，多态性位点相继受到了广泛的关注。其中，单核巧酸多态 性（Single Nucleotide Polymo巧Msm,SNP)具有相对较低的自发突变率（IQ-S);而单个的 SNP位点扩增产物可W控制在2(K)bpW下，有利于降解检材的分型。然而SNP等位基因间差异 只有一个碱基，因此难W设计高灵敏度的检测方案，检测灵敏度只能达到1%，仍然不适用 于微嵌合检测。而且SNP定量方法复杂，实验仪器昂贵，使用成本高，操作繁琐，通量小，并 不适合在常规的法医学实验室推广。
[0006] 近年来新一代的多态性位点--插入或缺失多态性（Insertion or Deletion Polymorphisms , InDeI或DIP)，即基因组中插入或缺失不同类型和大小的DNA片段（4~ 2化P)所形成的多态性遗传标记，在法医物证鉴定、亲子鉴定和其他医学检验方面有着广泛 运用。从法医学物证检验的角度来看，InDel标记具有W下特点：（1)在人类基因组中含量丰 富，数量仅次于SNP; (2)与SNP具有相近的自然突变率(~2.3 X 1(T9); (3)InDel扩增片段更 短（低于160bp)，更适于检测高度降解和低拷贝的DNA模板，增加 DNA降解检材分型的成功 率；（4)InDel位点存在显著的人群和种族差异；（5)可通过巧光PCR扩增技术进行InDel检 ，技术平台普遍适用性强；（6)基于InDel位点，使用双色巧光定量PCR方法，确定区分供者 和受者的特异性位点后，进行定量PCR，最低嵌合率检测可W达到0.01~0.05%。因此，近些 年来日渐引起国内外许多法医学者的关注。然而，截止到目前为止，基于InDel遗传标记的 商业上比较成熟的用于微嵌合检测和个体识别的试剂盒还非常少见，只有荷兰的 Investigator DIP试剂盒是比较成熟的商业化产品。同时，由于遗传标记存在人群和种族 的差异，Investigator DIP试剂盒对于亚洲人群来说，适用性并不是特别强。因此，研发一 套适用于亚洲人群的用于微嵌合检测和个体识别的InDel遗传标记试剂盒就显得非常必 要。

【发明内容】

[0007] 本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，基于最新的InDel位点数据库，并W亚洲 人群为基准，重新设计了用于微嵌合检测和个体识别的引物和探针W及检测方法。本发明 的检测方法多态性强、特异性好、灵敏度高且简便快捷。
[0008] 为此，本发明一方面提供了一种用于微嵌合检测和个体识别的引物和探针组合， 其由SEQ ID NO. 1-75所示的引物和探针组成。
[0009] 在本发明优选的实施方案中，该引物和探针组合进一步由第1-15组引物和探针组 成，其中第1组由SEQ ID NO. 1-4所示的引物和SEQ ID NO.5所示的探针组成，第2组由SEQ ID NO.6-9所示的引物和沈Q ID NO. 10所示的探针组成，第3组由沈Q ID NO. 11-14所示的 引物和SEQ ID NO. 15所示的探针组成，第4组由SEQ ID NO. 16-19所示的引物和SEQ ID NO.20所示的探针组成，第5组由SEQ ID NO.21-24所示的引物和SEQ ID NO.25所示的探针 组成，第6组由沈Q ID NO.26-29所示的引物和SEQ ID NO.30所示的探针组成，第7组由沈Q ID NO.31-34所示的引物和沈Q ID NO.35所示的探针组成，第8组由沈Q ID NO.36-39所示 的引物和SEQ ID NO. 40所示的探针组成，第9组由SEQ ID NO.41-44所示的引物和SEQ ID NO.45所示的探针组成，第10组由SEQ ID NO.46-49所示的引物和SEQ ID NO.50所示的探针 组成，第11组由SEQ ID NO.51-54所示的引物和SEQ ID NO.55所示的探针组成，第12组由 沈Q ID NO.56-59所示的引物和沈Q ID NO.60所示的探针组成，第13组由沈Q ID NO.61-64 所示的引物和SEQ ID NO.65所示的探针组成，第14组由SEQ ID NO.66-69所示的引物和SEQ ID NO. 70所示的探针组成，第15组由SEQ ID NO. 71-74所示的引物和SEQ ID NO. 75所示的 探针组成。
[0010] 本发明基于最新的InDel位点数据库，W亚洲人群为基准，从中筛选出针对亚洲人 群高个体识别率的15个InDel位点，它们分别为:化-1片32308010)、化-2片334855933)、化-3(rs4646006)、N2-l(rs3042783)、N5-l(rsl610937)、N5-4(rsl610932)、N7-l(rsl6458)、 N9-l(rs2308112)、Nll-l(rs2307696)、Nll-2(rsl40790)、N13-l(rs3038530)、N13-2 (rs3049448)、N14-l(rs56024302)、N16-2(rs2067204)和 N21-l(rsl6663)，括号中的 rs 号表 示该位点在化SNP数据库的编号。
[0011] 本发明进一步针对上述每一个InDel位点，分别设计一条共用的上游引物(F)、下 游引物(R)、插入特异性引物F( + )和缺失特异性引物F(-)，其中扩增片段长度(Amplified Fragment Length,AFL)为该引物与对应的上游引物或下游引物配对所得到的扩增片段长 度，例如F( + )与R用来特异性扩增插入片段，R(-)与F用来特异性扩增缺失片段，F与R用来扩 增非特异性片段(其中：灰色底色代表插入/缺失的特异性碱基）。
[0012] 针对上述亚洲人群高个体识别率的15个InDel位点，本发明设计的具体引物和探 针情况如表1所示。
[001引表1、本发明的引物和探针情况表
[0015]
[0016] 本发明另一方面提供了一种用于微嵌合检测和个体识别的试剂盒，其包含本发 明所述的引物和探针组合。该试剂盒保存于-20°C，并由W下试剂组成。
[0017] 1、全血基因组DNA提取试剂，购于QIAamp DNA Blood Mini kit试剂盒；
[001 引 2、RNase-Free ddH20;
[0019] 3、2XS叩er Real PreMix反应液，购于天根生化科技（北京）有限公司，货号： FP206；
[0020] 4、50XR0X Reference Dye,购于天根生化科技(北京)有限公司，货号:FP206;
[0021] 5、分别分装在相应编号离屯、管中的引物和探针组合。
[0022] 在本发明优选的实施方案中，试剂盒中每种引物的浓度为6iiM，每种探针的浓度为
[0023] 本发明另一方面提供了本发明所述的引物和探针组合在制备微嵌合检测和个体 识别试剂盒中的应用。
[0024] 本发明再一方面提供了本发明所述的引物和探针组合，或者本发明所述的试剂盒 在微嵌合检测和个体识别中的应用。
[0025] 本发明最后一方面提供了一种微嵌合检测和个体识别的方法，其包含W下步骤：
[0026] 1、获取待测样品的DNA。
[0027] DNA提取可W采用QIAamp DNA Blood Mini kit试剂盒。
[0028] 2、采用本发明所述的引物和探针组合，或采用本发明所述的试剂盒，W步骤1中获 取的DNA为模板，进行巧光PCR扩增，并收集巧光信号。
[00巧]巧光PCR扩增的体系为20化：IOuL 2 XS叫er Real PreMix反应液(天根生化科技 (北京)有限公司，货号:FP206);0.化L 50XR0X Reference Dye(天根生化科技(北京)有限 公司，货号：FP206);luL 6uM 引物 F( + )/F(-);luL 6uM 引物 R;luL 4uM 探针；IuL 20ng/uL DNA;用RNase-Free d地2〇补足反应体系。
[0030] 巧光PCR的反应条件为:95。(：预变性15min，然后95。(：变性3s-6(TC退火延伸32s， 共进行40个循环，在6(TC处收集巧光信号。
[0031] 3、根据Ct值判断待测样品在15个InDel位点上的多态性差异，从而对待测样品进 行微嵌合检测和个体识别。
[0032] 通过Ct值来判断每个遗传标记阳性样本和阴性样本的Ct值区间范围，阳性样本Ct 值落在24-29之间，阴性样本Ct值在38W上，阳性样本和阴性样本Ct值相差12W上，表示引 物和探针的特异性良好。
[0033] 在本发明优选的实施方案中，采用的引物和探针是针对亚洲人群高个体识别率的 15个InDel位点设计的。
[0034] 在本发明进一步优选的实施方案中，每种引物的浓度为6測，每种探针的浓度为化 M。
[0035] 由上述描述可知，与现有技术相比，本发明具备如下优点。
[0036] 1、多态性强:通过本发明筛选的15个InDel位点，对随机选取的94个样本进行基因 频率测试，结果表明运15个InDe 1位点等位基因频率分布均衡，多态性强。根据运15个InDe 1 位点的多态性信息，能够进行微嵌合检测和个体识别。
[0037] 2、特异性好:通过本发明筛选的15个InDel位点，对阳性样本和阴性样本进行检 ，结果表明特异性好、稳定性强、重复性好，分型结果准确(在测序结果基础上进行比较）。
[0038] 3、灵敏度高:进行嵌合状态分析时，利用本发明筛选的15个InDel位点，进行巧光 PCR扩增，当模板量仅为14化g时，即可进行精确的定量分析，最低嵌合率检测可达0.025%。
[0039] 4、本发明的检测方法采用双巧光标记扩增技术，该技术简便、快捷，只需一台 Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System即可，结果进行自动分析，能够保证不 同实验室数据的准确性。
【附图说明】
[0040] 图1:本发明用于检测引物和探针特异性的PCR扩增结果图。
[0041] 图2:本发明试剂盒用于个体识别检测的PCR扩增结果图。
[0042] 图3:本发明遗传标记N13-U + )的检测结果图。
[0043] 图4:本发明遗传标记 N13-U + )的标准品（100%、90%、50%、10%、1%、0.1%、 0.05%、0.025%)扩增曲线图。
【具体实施方式】
[0044] 下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定 本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可W对本 发明进行若干改进和修饰，运些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
[0045] 实施例1:引物的设计与合成
[0046] ( -HnDel 位点筛选
[0047] 采用如下原则对InDel位点进行筛选：
[004引 UInDel等位基因片段长度差异(插入或缺失碱基数目）大于3bp小于30bp;
[0049] 2、位于人类22条常染色体上；
[(K)加]3、同一条染色体上的InDel位点间距大于5Mb;
[0化1] 4、最小等位基因频率(Minimum allele打equency,MAF)介于0.30到0.50之间（W 东亚人群为基准）；
[0052] 5、总位点数不少于30个，累积个体识别率达到0.9999W上；
[0053] 6、同一染色体上不形成连锁，在人群中的分布符合化rdy-Weinbe巧遗传平衡；
[0054] 7、避免InDel位点与某些特殊的疾病表型相关联，多态性位点最好位于内含子区 域。
[0055] 采用上述原则，分别通过http : //www . ensembl . org/index . html和http : // www.ncbi .nlm.nih.gov/projects/SNP/所示的网址，对多态性较强的InDel位点进行初步 筛选，最终选定了 15个InDel位点，分别为:Nl-l(rs2308010)、Nl-2(rs：34855933)、Nl-3 (rs4646006)、N2-l(rs3042783)、N5-l(rsl610937)、N5-4(rsl610932)、N7-l(rsl6458)、N9-1(rs2308112)、N11-1(rs2307696)、N11-2(rs140790)、N13-l(rs3038530)、N13-2 (rs3049448)、N14-l(rs56024302)、N16-2(rs2067204)、N21-l(rsl6663)，括号中的 rs 号表 示该位点在化SNP数据库的编号。
[0056] (二)样本选择、基因频率测试和引物序列修改
[0057] 随机选取94个中国人群DNA样本，进行扩增和基因测序。采用初步选定的引物对94 个健康人基因组DNA样本进行检测，用W评估引物的扩增效率和各位点的基因频率。
[0化引 UDNA提取
[0059] DNA提取按照QIAamp DNA Blood Mini kit试剂盒进行，随后采用RNase-^ee d地2〇稀释到20ng/uL备用。
[0060] 2、PCR扩增体系
[0061] 采用25uL的PCR扩增体系：2.5uL 10 Xbuffer反应液；0.7加 L IOmM dNTP; IuL SuM 引物F;1.8uL 加 M引物R;1.4uL 加 M引物F( + )/F(-);化L DNA;0.2uL Hot Stad Taq;luL Mg2+;0.1 uL DMSO，用RNase-Free d地2〇补足反应体系。
[0062] 3、PCR反应条件
[0063] 采用如下的PCR反应条件:95°C预变性30s，然后95°C变性30s-58°C退火30s-68 。(:延伸30s，共进行30个循环，最后68 °C延伸5min。
[0064] 4、电泳检测和引物序列修改
[0065] PCR产物经2%琼脂糖电泳30min后进行检测，验证设计的特异性引物是否合适。W 一代测序结果为准，针对电泳假阳性和假阴性的情况，修改引物序列，重新进行检测。
[0066] 经过检测和修改之后，最终确定的15个InDel位点的引物及探针序列如表1所示， 委托上海英驗生物技术有限公司合成上述引物和探针。
[0067] 分别用15个InDel位点的引物和探针对94个样本进行检测，结果表明等位基因频 率分布比较均衡，具体多态性信息如表2所示。其中：V'代表插入多态性；代表缺失多态 性；"+/+"代表插入纯合子多态性；代表插入/缺失杂合子多态性；代表缺失纯合 子多态性。
[006引表2 15个InDel位点的多态性信息（测序结果）
[0069]
[0070]
[0071 ] 实施例2:引物和探针特异性测试
[0072]在实施例1的测序结果下，分别选取5个插入纯合子、缺失纯合子和杂合子，进行巧 光PCR，用于检测引物和探针的特异性。
[0073] I、巧光PCR扩增体系
[0074] 采用20uL的巧光PCR扩增体系：IOuL 2 X Super Real PreMix反应液(天根生化科 技(北京)有限公司，货号:FP206);0.2uL 50XR0X Reference Dye快根生化科技(北京)有 限公司，货号：FP206);luL 6uM引物F( + )/F(-);luL 6uM引物R;luL 4uM探针；IuL 20ng/uL DNA;用RNase-Free d地2〇补足反应体系。
[00巧]2、巧光PCR反应条件
[0076] 采用如下的巧光PCR反应条件:95°C预变性15min，然后95°C变性3s-60°C退火延 伸32s，共进行40个循环，在6(TC处收集巧光信号。
[0077] 3、引物和探针特异性判断
[0078] 通过Ct值来判断每个遗传标记阳性样本和阴性样本的Ct值区间范围，阳性样本Ct 值落在24-29之间，阴性样本Ct值在38W上，阳性样本和阴性样本Ct值相差12W上，表示引 物和探针的特异性良好。
[0079] WNl-2( + )插入遗传标记为例，阳性样本(插入纯合子和杂合子)的Ct值落在范围 26-28内（参见说明书附图la)，阴性样本(缺失纯合子)的Ct值检测不到（即在40个PCR循环 数下，没有检测到巧光信号，Ct值大于40)(参见说明书附图Ib),表明引物和探针的特异性 良好。
[0080] 实施例3:本发明试剂盒的组成
[0081] 本发明用于微嵌合检测和个体识别的InDel遗传标记试剂盒，保存于-20°C，由W 下试剂组成。
[0082] 1、全血基因组DNA提取试剂:购于QIAamp DNA Blood Mini kit试剂盒。
[0083] 2、RNase-Free (1地2〇。
[0084] 3 JXSuper Real PreMix反应液，购于天根生化科技（北京）有限公司，货号： FP206。
[0085] 4、50XR0X Reference Dye,购于天根生化科技(北京)有限公司，货号:FP206。
[0086] 5、分别分装在相应编号离屯、管中的引物和探针组合，每种引物的浓度为6uM，每种 探针浓度为4uM。
[0087] 实施例4:本发明试剂盒用于个体识别的检测
[0088] 随机选取两个不同来源的DNA样本(分别命名为A和B)，用本发明试剂盒中的InDel 遗传标记进行多态性检测。
[0089] 巧光PCR扩增体系及反应条件同实施例2"PCR扩增反应后，对于每一个遗传标记， 扩增后可能出现四种结果，具体参见说明书附图2。图2a中，样本A和B均为阳性；图化中，样 本A和B均为阴性；图2c中，样本A为阳性，样本B为阴性；图2d中，样本A为阴性，样本B为阳性。 图2a和2b没有多态性差异，图2c和2d具有多态性差异，根据多态性差异即可判断出样本是 否来源于不同个体。
[0090] 根据Ct值进行判断，在15个InDel位点中，样本A和样本B有14个遗传标记(N1-1 (+)、Nl-2(-)、Nl-3(-)、N2-l(+)、N2-l(-)、N5-4(+)、N7-l(+)、N9-l(+)、Nll-l(-)、Nll-2 (-)、N13-l( + )、N13-l(-)、N14-l( + )、N16-2(-))具有多态性差异。因此，可判断样本A和样本 B来源于不同的个体。
[0091 ] 实施例5:引物和探针准确性和灵敏性测试
[0092] 选取40对DNA样本进行InDel遗传标记定性检测，W获得每对样本的InDel位点多 态性信息。
[0093] 针对每一对样本，选出可用的遗传标记（可用遗传标记需符合W下特点：Ct<28阳 性样本定为受者，Ct〉38阴性样本定为供者），W不同比例混合，得到不同比例的标准品，通 过巧光PCR进行灵敏度和准确性检测。同时，为了达到ICT 5的检测灵敏度，初始DNA模板的量 至少为140ng。
[0094] 选择其中一对样本为例(样本命名为C和D)，具体实施方法如下。
[0095] 1、对样本C和样本D进行InDel位点多态性测试
[0096] 巧光PCR反应体系及条件同实施例2。W样本C为受者，样本D为供着，按照Ct值的大 小(C: Ct<28阳性样本;D: Ct〉38阴性样本），选出可用的遗传标记。
[0097] 2、标准品构建
[009引针对样本C和样本D，W不同比例混合（受者C/供者0:90%、50%、10%、1%、 0.1%、0.05%、0.025%)，得到不同比例的浓度为20ng/uL的标准品。
[0099] 3、通过定量分析的方法检测引物和探针的准确性和灵敏性
[0100] 将制备的嵌合比例分别为 100%、90%、50%、10%、1%、0.1%、0.05%、0.025% 的 标准品作为定量分析的模板，同时WRNase-Free d加 2〇为模板作为空白对照。为了达到 14化g DNA初始模板（1〇-5的检测灵敏度），需添加7uL 20ng/uL的标准品，其它巧光PCR反应 体系及条件同实施例2。
[0101] 4、定量分析
[0102] 通过巧光PCR，获得不同比例的标准品检测所得的遗传标记和内参基因的Ct值，并 计算两者所得Ct值的差值（A Ct)。
[0103] 说明书附图3为遗传标记N13-U + )的检测结果。看图3可W看出，遗传标记N13-1 (+ )和内参基因扩增曲线形态良好，PCR产物特异性高、无非特异性扩增，同时对照空白组无 扩增。
[0104] 说明书附图4为遗传标记N13-U + )的标准品扩增曲线。图中显示，标准品扩增曲线 形态良好。WC作为手术移植前的样本，CD作为移植后的样本，根据移植后与移植前A Ct的 差值（A A Ct)，可W计算获得CD嵌合率％ = X 100%，其中A A Ct= A Ct移醋-A Ct纖節 =(Ct极鑑g-Ct膨标IOTfBtrC咕。通过比较理论值和巧光PCR计算获得 的测试值，可W用来判断各个遗传标记的灵敏度和准确性。
[0105] 对于N13-U + )遗传标记，测试值分别为93.34% (理论90%)、65.19% (理论50%)、 13.25% (理论10% )、0.9452% (理论1%)、0.1053% (理论0.!%)、0.0598%(理论0.05%) W及0.0282% (理论0.025 % )，表明引物和探针测试准确性良好，灵敏度可W达到0.025% JjL -?" O
【主权项】
1. 一种用于微嵌合检测和个体识别的引物和探针组合，其由SEQ ID NO.1-75所示的引 物和探针组成。2. 根据权利要求1所述的引物和探针组合，其进一步由第1-15组引物和探针组成，其中 第1组由SEQ ID NO. 1-4所示的引物和SEQ ID NO.5所示的探针组成，第2组由SEQ ID NO.6-9所示的引物和SEQ ID NO. 10所示的探针组成，第3组由SEQ ID NO. 11-14所示的引物和SEQ ID NO. 15所示的探针组成，第4组由SEQ ID NO. 16-19所示的引物和SEQ ID NO.20所示的探 针组成，第5组由SEQ ID NO.21-24所示的引物和SEQ ID NO.25所示的探针组成，第6组由 SEQ ID NO.26-29所示的引物和SEQ ID NO.30所示的探针组成，第7组由SEQ ID NO.31-34 所示的引物和SEQ ID NO.35所示的探针组成，第8组由SEQ ID NO.36-39所示的引物和SEQ ID NO.40所示的探针组成，第9组由SEQ ID NO.41-44所示的引物和SEQ ID NO.45所示的探 针组成，第10组由SEQ ID NO.46-49所示的引物和SEQ ID NO.50所示的探针组成，第11组由 SEQ ID NO.51-54所示的引物和SEQ ID NO.55所示的探针组成，第12组由SEQ ID NO.56-59 所示的引物和SEQ ID NO.60所示的探针组成，第13组由SEQ ID NO.61-64所示的引物和SEQ ID NO.65所示的探针组成，第14组由SEQ ID NO.66-69所示的引物和SEQ ID NO.70所示的 探针组成，第15组由SEQ ID NO.71-74所示的引物和SEQ ID NO.75所示的探针组成。3. 根据权利要求1或2所述的引物和探针组合，其是针对亚洲人群高个体识别率的15个 InDel位点设计的。4. 一种用于微嵌合检测和个体识别的试剂盒，其包含权利要求1-3中任一项所述的引 物和探针组合。5. 根据权利要求4所述的试剂盒，其中每种引物的浓度为6μΜ，每种探针的浓度为4μΜ。6. 权利要求1-3中任一项所述的引物和探针组合在制备微嵌合检测和个体识别试剂盒 中的应用。7. 权利要求1-3中任一项所述的引物和探针组合，或者权利要求4或5所述的试剂盒在 微嵌合检测和个体识别中的应用。8. -种微嵌合检测和个体识别方法，其包含以下步骤： (1) 获取待测样品DNA; (2) 采用权利要求1-3中任一项所述的引物和探针组合，或采用权利要求4或5所述的试 剂盒，以步骤(1)中获取的DNA为模板，进行荧光PCR扩增，并收集荧光信号； (3) 根据Ct值判断待测样品在15个InDel位点上的多态性差异，从而对待测样品进行微 嵌合检测和个体识别。9. 根据权利要求8所述的方法，其中采用的引物和探针是针对亚洲人群高个体识别率 的15个InDel位点设计的。10. 根据权利要求8或9所述的方法，其中每种引物的浓度为6μΜ，每种探针的浓度为4μ Μ〇
【文档编号】C12N15/11GK105861675SQ201610268840
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】郑仲征, 杜金伟, 谢桂贞, 翼丽军, 潘捷
【申请人】上海荻硕贝肯生物科技有限公司