以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺的制作方法
【专利摘要】以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺，属于微生物【技术领域】。生产工艺包括：（1）对桔皮进行干燥、粉碎、筛分预处理；（2）将经过预处理的桔皮粉与麸皮和去离子水按一定比例混合，高压蒸汽灭菌；（3）在灭菌后的物料上接种木霉进行固态发酵；（4）固体发酵产物经干燥处理后即得木霉制剂产品。该工艺生产的木霉菌剂具有促进植物生长，诱导植物产生抗逆境抗病害的能力，可用于防治土传病害和促进污染土壤的植物修复；同时也为桔皮的资源化利用提供了一条新途径。
【专利说明】以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物发酵【技术领域】，尤其涉及一种利用桔皮固态发酵生产木霉菌剂的方法。
[0002]
【背景技术】
[0003]木霉菌577/7)在自然界中分布广泛,生物量大,环境适应性强,是一种历史悠久的生防真菌，目前国际上已开发注册的木霉菌剂产品有50多种，大多数都可以用来防治作物土传病害和促进植物生长。近年来，亦有研究表明木霉菌具有吸附重金属的功能，其逐渐被应用于污染土壤的植物-微生物联合修复技术中。由于木霉是活菌制剂，主要通过孢子来实现其生物活性，因此选择廉价且产孢量高的发酵基质，优化人工发酵工艺，对于降低该活菌制剂的生产成本，推广该制剂的田间应用具有重要的意义。
[0004]我国是柑橘生产大国，每年都会产生大量的副产物-柑橘皮。柑橘皮富含果胶、纤维素、可溶性糖及多种矿物质元素，是一种良好的微生物生长基质。过去这种富有营养的物质被丢弃，不但大量浪费资源，而且污染环境。目前，对柑橘皮的研究主要集中在两个方面:一方面是内含成分的提取，包括果胶、香精油、橙皮苷、黄酮类、色素等物质的提取利用；另一方面是微生物发酵，主要以柑橘皮为营养物质发酵生产饲料和酶制剂，而以桔皮作为培养基来生产木霉菌剂的方法还未见报道。鉴此，本专利以里氏木霉FSlO-C为出发菌株，以桔皮为主要原料进行固态发酵制备木霉菌剂，不仅可以降低制剂的生产成本，而且还可有效解决了桔皮的资源化利用问题。
[0005]
【发明内容】
[0006]解决的技术问题:本发明的目的在于提供一种利用桔皮固态发酵生产木霉菌剂的方法，该方法不仅可以降低制剂的生产成本，而且还可有效解决了桔皮的资源化利用问题。此外，通过本方法制得的木霉菌剂可用于防治土传病害和促进污染土壤的植物修复中。
[0007]技术方案:以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺，工艺步骤如下:
(O桔皮的预处理
将收集的桔皮烘干粉碎过筛后，选择粒径0.84 _的桔皮粉用于后续工艺；
(2)物料灭菌
原料:桔皮粉50~65质量份，麦麸35~50质量份；加水，原料:水=1:0.8~1: 1.2(重量比)；将混合料采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理:温度121°C，时间30~50分钟；
(3)发酵
将灭菌处理后的混合料进行发酵，木霉菌接种量为原料重量的5%~10%，温度为28°C，发酵周期为8~10天，从第4天起隔天搅拌一次，混匀；
(4)后处理将长满分生孢子的木霉菌固体发酵培养物真空冷冻干燥，包装。
[0008]发酵时所采用的里氏木霉re^ei^SlO-C,该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2010年07月Ol日，保藏单位名称:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号=CGMCC N0.3970。
[0009]有益效果(I)木霉菌剂制备方法简单，产孢量大:以桔皮为主要原料，加入一定量的麦麸作为辅料即得到混合培养基，不需要额外添加营养物质即可实现木霉菌的高密度培养，制剂含孢量大于101°个/克，达到目前木霉菌固体发酵的平均水平(IX101°个/克)；
(2)桔皮麦麸作为有机质与木霉孢子混合添加入土壤，一方面可以为孢子的萌发提供营养，另一方面可以减轻土壤对孢子的抑制作用，同时增加土壤肥力；(3)采用本发明所述方法，能提高农业废弃物桔皮和麦麸的利用率，变废为宝。
[0010]
【具体实施方式】
[0011]以下结合实例对本发明作进一步的描述，但不作为对本发明实施范围的限定。
[0012]实施例1:桔皮麦麸组合对里氏木霉(re5；Si?i)FS10-C生长的促进作用
1.1试验设计
(I)孢子悬液的制备:取培养好的里氏木霉(Trichoderma ressei ) FSlO-C种子斜面，加5mL无菌水，振荡，将孢子洗脱到无菌三角瓶中，稀释至孢子浓度为IO6个孢子/mL待用。
[0013](2)固态发酵:将桔 皮70°C条件下烘干，粉碎过0.84mm筛；分别取桔皮粉100份；桔皮粉50份、麦麸50份；麦麸100份，按料水重量比1:1添加去离子水调，分装到15cm培养皿中，每个培养皿中约60g，3次重复，121°C灭菌30分钟，冷却至室温；按5%被的比例接种里氏木霉ressei) FSlO-C孢子悬液,混匀置于28°C恒温培养箱中静止培养，定时搅拌。
[0014](3)产孢量测定:发酵结束后，准确称取1.0g固体培养物，定量稀释，振荡混匀后，用血球计数板计数，3个重复。用常压干燥法测定发酵产物的含水量W，计算孢子产量[个/(克]。
[0015]1.2结果与分析
表1桔皮麦麸组合对里氏木霉ressei) FSlO-C生长的促进作用
【权利要求】
1.以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺，其特征在于工艺步骤如下: (O桔皮的预处理 将收集的桔皮烘干粉碎过筛后，选择粒径0.84 _的桔皮粉用于后续工艺； (2)物料灭菌 原料:桔皮粉50~65质量份，麦麸35~50质量份；加水，原料:水=1:0.8~1: 1.2(重量比)；将混合料采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理:温度121°C，时间30~50分钟； (3)发酵 将灭菌处理后的混合料进行发酵，木霉菌接种量为原料重量的5%~10%，温度为28°C，发酵周期为8~10天，从第4天起隔天搅拌一次，混匀； (4)后处理 将长满分生孢子的木霉菌固体发酵培养物真空冷冻干燥，包装。
2.根据权利要求1所述以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺，其特征在于发酵时所采用的里氏木霉(Trichoderma ressei ) FSIO-C,该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2010年07月01日，保藏单位名称:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号=CGMCC N0.3970。
【文档编号】B09C1/10GK103468629SQ201310411124
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】滕应, 罗洋, 骆永明, 马文亭, 李振高 申请人:中国科学院南京土壤研究所