一种中药组合物制剂及制备方法和质量检测方法

专利名称：一种中药组合物制剂及制备方法和质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物制剂及质量检测方法，特别涉及一种理气活血，通经 散结的中药组合物制剂及制备方法和质量检测方法。
背景技术：
前列腺病是男性多发病，具有病种多、发病率高、发病的时间长，且有逐年增多的 趋势。在少、青、壮、老年随时都可发病。占泌尿外科发病数的60% 70%，35岁以上的男 性患病率为50%以上，前列腺癌的发病率排在男性肿瘤的第二位.临床所见和大量统计资 料表明，因从幼到老、误诊与漏诊、症状轻重不一等因素，约有70%的男性都曾患过前列腺 疾病，只是患者不知罢了。此病逐年增加，严重危害了男性身体健康。

发明内容
本发明第一个目的在于提供一种理气活血，通经散结的中药组合物；本发明的第 二个目的在于提供该中药组合物制剂的制备方法。本发明的第三个目的在于提供该中药组 合物制剂的质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明一种理气活血，通经散结的中药组合物制剂的原料组成为丹参120-168重量份、泽兰24_72重量份、桃仁24_72重量份、红花120-144重量 份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陈皮72-120重量份、泽泻120-168重量份、王不 留行120-168重量份、败酱216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(盐制)72-120 重量份、黄柏(盐制)120-168重量份。本发明一种理气活血，通经散结的中药组合物制剂的原料组成优选为丹参144重量份、泽兰48重量份、桃仁48重量份、红花144重量份、赤芍48重量 份、白芷96重量份、陈皮96重量份、泽泻144重量份、王不留行144重量份、败酱240重量 份、川楝子96重量份、小茴香(盐制)96重量份、黄柏(盐制)144重量份。上述本发明理气活血，通经散结的中药组合物制剂的制备方法为泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用40-80%乙醇回流提取1-3次，每次1-4小 时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液另器收集； 药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮1-3次，每次1-5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液 合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混勻，干燥，加入上述小茴香等挥 发油及常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶 囊齐IJ、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂 或口服液体制剂。本发明一种理气活血，通经散结的中药组合物片剂的制备方法优选为以上十三 味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取 液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时，第二次以6倍量水 煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽 泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制成片，包糖衣，即得。本发明一种理气活血，通经散结的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为以上 十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并 提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后的水溶液另器收 集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时，第二次以6倍 量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加 入泽泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，混勻，即得。
本发明一种理气活血，通经散结的中药组合物胶囊剂的制备方法优选为以上 十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并 提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后的水溶液另器收 集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时，第二次以6倍 量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加 入泽泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，混勻，装胶囊，即得。本发明提供一种的理气活血，通经散结的中药组合物制剂的质量检测方法，该方 法包括如下含量测定和/或鉴别中的一种或几种A、含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 60-80 20-30 比例的 0. 01-0. lmol/1 NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 2. 5-4. 0)-乙 腈为流动相；检测波长为260 280nm ；对照品溶液的制备称定盐酸小檗碱，加甲醇制 成Iml含5-15 μ g的溶液；供试品溶液的制备称取该组合物制剂0. l-2g，精密加入甲 醇25-75ml，称定重量，超声处理10-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 勻，用0. 2-0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别吸取对照品 液、供试品液各5 15 μ 1注入液相色谱仪，测定即得；组合物制剂0. 2-lg含盐酸小檗碱 (C20H17N04 · HCl)不得少于 0. IOmg0B、鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇25_75ml超声提取 15 45min,滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，2. 5 7. 5g，内径10-15mm)上，用 20% 60%甲醇25 75ml洗脱，洗脱液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水饱和正丁 醇提取1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗1_3次，每次5 15ml ； 弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品， 加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品2 6 μ 1，供试品6 12 μ 1，分别 点样于同一硅胶G板上，以10-16 5-9 2的氯仿-甲醇-水混合溶剂的下层溶液为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在 与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；C、鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取粉末5g，加甲醇25_75ml超声提取 15 45min,滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，2. 5 7. 5g，内径10-15mm)上，用 20% 60%甲醇25 75ml洗脱，洗脱液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水饱和正丁 醇提取1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗1_3次，每次5 15ml ； 弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；取芍药苷对照品，力口乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品，供试品各2_10μ 1，分别点样 于同一硅胶G板上，以35-50 4-6 8-12 0. 2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸混 合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；D、鉴别该组合物制剂粉末0. I-Ig加甲醇2-15ml超声5 30min，滤过，蒸干，残渣加甲醇0. 5-5ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含 0. l-5mg的溶液，作为对照品溶液；分别吸取上述两种溶液各0. 1-2 μ 1，分别点样于同一硅 胶G板上，以5-8 2-4 1-3 1-4 0. 3-0. 9比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓 氨试液混合溶剂为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光 灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。上述质量检测方法优选包括如下含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八 烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0. 05mol/l NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈 (73 27)为流动相；检测波长为270nm;对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适 量，加甲醇制成Iml含10μ g的溶液；供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂内容物粉 末0. 5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减 失的重量，摇勻，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别精 密吸取对照品液、供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定即得；上述质量控制方法中优选包括如下鉴别法陈皮薄层鉴别取该组合物制剂内容 物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝 柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解， 水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次 IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对 照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；吸取上述对照品4 μ 1，供试品8 μ 1，分别点样于 同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位 置上，显相同颜色的荧光斑点；赤芍薄层鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声 提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲 醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为 对照品溶液；分别吸取对照品，供试品各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑占.黄柏薄层鉴别该组合物制剂粉末0. 3g加甲醇IOml超声5min，滤过，蒸干，残渣 加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液，各1 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以苯-醋酸 乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6 3 1.5 1.5 0.5)为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。本发明组合物具备极佳的理气活血，通经散结的作用，对治疗前列腺增生症、尿闭 有很好的疗效。本发明对中药组合物制剂中盐酸小檗碱含量测定和陈皮、芍药、黄柏的薄层 检测，经实验证明本发明含量测定方法检测专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更 加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明片剂，但 是本发明实验结果并不仅限于该片剂。实验例1 药效学实验本发明组合物对前列腺增生的影响1、实验材料实验动物雄性SD大鼠72只，8周龄，体重200 250g。药品与试剂该组合物制剂；阳性药保列治；免疫组化试剂bFGF兔多克隆抗体 (克隆系147)、VEGF兔多克隆抗体(克隆系165)；相应二抗及试剂盒。2、实验方法2. 1造模及给药方法大鼠驯化喂养1周后，按随机数字表法随机分为睾酮组48只，空白组(N) 16只，去 势组(C)8只。其中，睾酮组大鼠经3%戊巴比妥钠以lml/kg剂量腹腔注射麻醉后，无菌切 除双侧睾丸，经1周自然恢复后，每日经皮下注射丙酸睾丸酮0. 5mg造模；空白组大鼠麻醉 后，无菌手术切开下腹部，游离睾丸，但不切除睾丸，术后1周自然恢复后，给予皮下注射注 射用水0. Iml而不予注射丙酸睾丸酮；去势组大鼠切除双侧睾丸，经1周自然恢复后，也给 予皮下注射注射用水0. Iml而不予注射睾酮。10天后，空白组及睾酮组分别随机取8只大鼠 处死，摘除前列腺，计算前列腺指数，空白组为0. 21 士 0. 03(% )，睾酮组为0. 29 士 0. 03(% ) (P <0.05)，表明造模成功。将睾酮组大鼠随机分为5组，即该组合物制剂高剂量组(H， 6. 24g/kg)、中剂量组(M，3. 12g/kg)、低剂量组(L，1. 56g/kg)、保列治组(F，1. 67mg/kg)和 模型组(M)。连续给药30d(中间每周称重1次以调整给药量)，末次给药24h后，称大鼠体 重后，经股动脉放血处死，摘除前列腺。2. 2检测指标2. 2. 1前列腺重量、体积及指数的测定用电子天平称大鼠前列腺重量，并计算前列腺指数(前列腺重量/大鼠体 重X100% )；用水取代法测量前列腺体积，单位ml。2. 2. 2前列腺组织结构的观察取相同部位前列腺组织，FAA液固定48h，逐级酒精脱水、浸蜡，石蜡包埋，连续切 片5张，切片厚度4 μ m，其中第1张切片作常规HE染色，第2 5张切片作免疫组化染色， 在4X 10镜下观察HE染色片前列腺组织结构的变化。2. 2. 3免疫组化染色SP (生物素辣根过氧化酶)法，DAB (3，3_ 二氨基联苯胺)显 色，以试剂盒中提供的阳性片为阳性对照，以PBS液(磷酸盐缓冲液)替代一抗、二抗作阴 性对照。VEGF、bFGF均以血管内皮及间质细胞中出现棕黄色颗粒为其阳性细胞，每张切片中取具有阳性颗粒数目最多的5个间质区视野(400X)，用MIAS 2000型图形图像分析系统 定量检测积分光密度(IOD)来表示其在组织中表达的量的多少。2. 3统计学处理方法各项指标结果均以均数士标准差(X士s)表示，实验数据用 SPSS10.0软件进行处理，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐性者用LSD法，方差 不齐者用Games Howell法检验。3、结果与分析
3. 1对前列腺重量、体积及指数的影响各组大鼠体重无显著性差异(P > 0. 05)，组间具有可比性。模型组大鼠前列腺重 量、体积、前列腺指数明显高于空白组(P < 0.01)，去势组大鼠前列腺重量、体积、前列腺指 数明显低于模型组及空白组(P <0.01)。该组合物制剂各剂量组及保列治组与模型组比 较，前列腺重量、前列腺体积、前列腺指数均明显降低(P < 0.01)。结果表明模型组前列 腺体积、重量显著增大，造模成功。该组合物制剂可明显缩小BPH大鼠前列腺体积，见表1。3. 2对大鼠前列腺组织结构的影响HE染色片在4X 10倍光学显微镜下观察表明空白组腺体排列清楚，腺体间可见 明显的间质，腺腔无扩张，腺上皮单层柱状，可见少许基底细胞及明显基底膜。模型组腺体 排列密集，腺腔变大，部分腺体扩张，腔内分泌物增多，上皮细胞呈单层柱状，腺上皮变厚， 部分区域呈假复层，部分腺体呈乳头状突向腔内，可见较多基底细胞，间质小血管扩张充 血；间质平滑肌增多。去势组可见腺腔直径及腺上皮厚度均较模型组及空白组明显减小，小 血管未见扩张，间质组织疏松。该组合物制剂各剂量组及保列治组以上各种改变均有不同 程度的改善。由表2可见，模型组平均腺体周长、平均腺体面积均较空白组明显增大(P <0.01)，相同面积内腺体数目较空白组明显减少(P <0.01)。去势组大鼠腺体平均周长、 腺体平均面积均较空白组及模型组明显降低(P < 0.01)，相同面积内腺体数目较空白组及 模型组明显增加(P <0.01)。该组合物制剂各剂量及保列治组与模型组比较，腺体平均面 积、平均周长降低，相同面积内腺体总数目增加(P < 0.01)。结果表明模型组腺体增生， 该组合物制剂可降低BPH大鼠前列腺腺体增生。3. 3对大鼠前列腺组织bFGF、VEGF的表达bFGF、VEGF在前列腺血管内皮细胞、间质细胞及腺上皮细胞中都有表达。空白组大 鼠前列腺组织阳性着色分布较均勻，染色较淡；在模型组大鼠前列腺组织中染色普遍较深， 尤其在微血管成簇聚集部位的血管内皮细胞及血管周围间质细胞中强表达；在该组合物制 剂剂量组及保列治组阳性着色主要位于间质细胞中，染色较浅，明显低于模型组。各组前列 腺组织中bFGF、VEGF蛋白表达情况见表3。由表3可见，模型组bFGF、VEGF阳性颗粒积分光密度均显著高于空白组(P <0.01)；去势组上述两项指标均显著低于模型组(P <0.01)，与空白组无显著差异；该组 合物制剂各剂量bFGF表达显著低于模型组(P < 0. 01)，高剂量组前列腺组织中VEGF表达 明显低于模型组(P<0. 05)。表1各组前列腺重量、体积、指数比较(X土s) 注与空白组相比，ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；与模型组比较，*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01。表2各组间腺体数目、平均周长、平均面积比较(X土s) 注与空白组相比，ΔΡ < 005,ΔΔΡ < 001 ；与模型组相比，*Ρ < 005，**Ρ < 001，表3各组间前列腺组织VEGF、bFGF阳性颗粒积分光密度比较(X土S) 结果表明，该组合物制剂可缩小前列腺体积，降低前列腺重量及指数。镜下观察及形态计量学研究显示睾酮皮下注射所致的大鼠前列腺增生，腺体及间质组织均出现增生 而以腺体增生为主；该组合物制剂可缩小腺体面积、腺体周长及腺上皮面积。实验例2 盐酸小檗碱含量测定方法实验本发明组合物由黄柏(盐制)、赤芍、陈皮、白芷、丹参、泽兰、红花、川楝子、小茴香 (盐制 )等13味中药组成。盐酸小檗碱为黄柏的主要有效成份。盐酸小檗碱(C2tlH17NO4 ·Ηα) 是黄柏化学成分中一种重要的生物碱类化合物，《中国药典》2005年版I部以盐酸小檗碱作 为黄柏的高效液相色谱含量测定的对照品。测定本发明组合物中盐酸小檗碱的含量有助于 控制本中成药制剂的质量，确保临床用药的安全、有效。1、测定方法的选择根据文献报道，黄柏的含量测定方法有薄层色谱_紫外分光光度法，薄层色谱扫 描法，高效液相色谱法等。本实验采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量，分析速度快， 灵敏度高，专属性强，应用范围广，重现性与准确性均优于薄层色谱-紫外分光光度法、薄 层色谱扫描法。2、检测波长的选择通过盐酸小檗碱、本发明组合物片剂、黄柏药材、缺黄柏阴性对照溶液的全波长扫 描光谱比较可以看出盐酸小檗碱在270nm处有紫外最大吸收，且在270m下盐酸小檗碱峰 形对称，黄柏阴性对照溶液无干扰。故选择该波长为检测波长。3、流动相的优选本发明曾以乙腈-水(50 50)、乙腈-0. 磷酸溶液(50 50)、0. 05mol/l NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(55 45)、0. 05mol/l NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(73 27)、0. 05mol/l NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 3. 0士0. 5)-乙腈(85 15)等系统 作为流动相作了系列比较。结果表明，采用0.05mol/l NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调PH = 3.0士0.5)-乙腈(73 27)作为流动相，在该色谱条件下，盐酸小檗碱峰形及分离度最好， 盐酸小檗碱峰与之相邻峰的分离度不低于2.0。盐酸小檗碱的保留时间适中，盐酸小檗碱与 供试溶液中其它组分达到基线分离，阴性对照液溶液图谱在盐酸小檗碱峰位置无吸收峰， 阴性对照无干扰。4、色谱柱考察为了保证色谱条件的广泛适用性，考察不同品牌色谱柱对盐酸小檗碱的分离， 试验结果表明Diamonsil C18 (5 μ m，250mmX4. 6mm)、Agilent ZORBAX Extend-C18(5 μ m, 250mmX4. 6mm) ,Agilent ZORBAX Eclipse XDB (5 μ m，250mmX 4. 6mm)均对盐酸小檗碱有良 好的分离。5、本发明组合物片中盐酸小檗碱提取条件的考察为了确保测定结果真实、准确，本发明通过一系列考察，确保制备供试品溶液时将 本发明组合物片中的盐酸小檗碱提取完全。选择正交试验设计优选影响制剂中成分提取率的3个因素进行考察，分别为提 取溶剂、提取溶剂量、超声提取时间，每个因素设置3个水平。试验设计如下 按正交表L9 (34)安排实验。实验方法如下 各组样品用微孔滤膜(0.45μπι)滤过后，进液相分析，记录峰面积(对于提取溶 剂量为25ml组，吸取5 μ 1样品进样；50ml组，吸取10 μ 1样品进样；IOOml组，吸取20 μ 1 样品进样)，通过统计分析，以峰面积与取样量比值大为优，确定最终供试品制备方法如下 精密称本发明组合物去糖衣粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，称定重量超声处理30分钟，放 冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。综上试验最后确定本发明组合物片剂中盐酸小檗碱含量测定的色谱条件及对照 品和供试品制备方法为色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/l NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调PH = 3. 0 士 0. 5)-乙腈(73 27)为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成Iml含10 μ g的 溶液。供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂去糖衣粉末0.5g，精密加入甲醇 50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用微孔 滤膜(0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得。测定方法以上溶液，分别精密吸取对照品液、供试品 液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即得。实验例3 盐酸小檗碱含量测定方法验证实验
检测仪器(室温检测)=AgilentllOO型高效液相色谱仪色谱柱Agilent Zorbax C184. 6 X 150mm, 5 μ m流动相:0.05mol/l NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)检测波长270nm流速L0ml/min柱温室温对照品来源盐酸小檗碱(购于中国药品生物制品检定所)供试品批号02120401、02120502、02120603供试品制备精密称取该组合物制剂粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超 声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用微孔滤膜(0.45μπι)滤 过，取续滤液，即得。阴性对照样品溶液的制备按本发明组合物制备工艺制备缺黄柏的空白样品，并 按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品液。分别精密吸取阴性对照液，对照品液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测
定，即得。1.含量测定方法考察1. 1线性关系考察取对照品溶液(10μ g/ml)摇勻，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μ 1注入高效液相 色谱仪，测定峰面积，结果见下表，表明盐酸小檗碱在20ng-120ng间呈线性关系，其回归方 程为Area = 1. 21960305 X Amt-O. 9018775 (r = 0. 9999) 1.2稳定性试验对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小
时内基本稳定，结果见下表 1.3精密度试验精密吸取供试品溶液，(批号02120603) 10μ 1，重复进样5次，求得相对标准偏差
< 2%，结果见下表

1.4重现性试验按正文方法，取同一批号(批号02120603)样品五份，对每份进行测定，求得相对 标准偏差<2%，结果见下表 1.5回收率试验精密称取已知含量的同一批号(批号02120603)的样品0. 25g再分别精密称取 盐酸小檗碱对照品0. 25mg，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收 率，测定结果见下表 2.该组合物制剂测定结果见下表 根据以上数据，将含量限度定为本品中每素片含黄柏以盐酸小檗碱计 (C20H17NO4 · HCl)，不得少于 0. 10mg。实验例4 陈皮薄层鉴别试验陈皮中主要含有橙皮苷等黄酮苷类化合物，这类成分为极性偏大，能溶于极性溶 齐U，如甲醇等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测陈皮中的黄酮类成 分，以此鉴定制剂中含有陈皮药材。
1、薄层色谱方法的选择常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析等。硅胶薄层适用于低极性及中等极性成分，适用范围较广；纸层析适用于大极性成分如多糖类成分。陈皮中成分多为黄酮苷类成 分，中等极性，所以选择硅胶层析进行试验。2、供试品的制备2. 1陈皮有效成分的富集、纯化2. 2. 1陈皮有效成分的富集、纯化方法考察本处方中药味较多，成份复杂，需要对制剂中的陈皮成分进行富集、纯化。富集、纯 化中药成分常使用吸附法、萃取法及吸附_萃取结合法等。方法1:吸附法取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小 时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液1。方法2:萃取法取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小 时，滤过，蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶 解，作为供试品溶液2。方法3:吸附-萃取法取本品适量，去糖衣，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小时， 滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，洗 脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用 正丁醇饱和水洗两次，每次IOml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为 供试品溶液3。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液4 μ 1，供试品溶液1、2、3各8 μ 1，点样于同一硅胶G板 上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝 试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。实验结果如下供试品溶液1非常粘稠、混浊，点样困难，色谱中未在橙皮苷相对应的位置上显相 同颜色的荧光斑点；供试品溶液2色谱中所含成分较多，虽在橙皮苷对照品色谱相对应的位置上显相 同颜色的荧光斑点，但有杂质干扰；供试品溶液3色谱中在橙皮苷对照品色谱相对应的位置上显相同颜色的荧光斑 点，斑点位置确定，显色清晰。因此使用吸附法_萃取法进行富集、纯化方法。2. 2. 2吸附纯化部分的考察吸附法中吸附剂的种类、吸附剂用量、洗脱剂的种类、洗脱剂的用量之间存在着相 互影响的交互作用。因此，采用L93(4)正交实验设计，对吸附法进行考察。
通过上述实验方案制备了 9份供试品溶液。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液4 μ 1，供试品溶液1-9各8 μ 1，点样于同一硅胶G板上， 以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试 液，置于紫外光灯(365nm)下检视。实验结果如下采用硅胶做吸附剂时，由于洗脱溶剂中含有大量的水，使硅胶失活，吸附作用降 低，除杂的作用最弱。在供试品色谱中与对照品色谱相应位置上，有杂质干扰。采用聚酰胺做吸附剂时，用20% 60%甲醇25ml 75ml洗脱，在供试品色谱中， 很难在与对照品色谱相应位置上找到显相同颜色的荧光斑点。采用中性氧化铝做吸附剂时，用20% 60%甲醇洗脱，用量在25ml 75ml时，供 试品色谱中在与对照品色谱相应位置上，有显相同颜色的荧光斑点，且当用40%甲醇洗脱， 用量在50ml时，条件最优，阴性无干扰。2. 2. 3萃取法的考察采用萃取法的目标是富集供试品中的鉴别成分，正丁醇适宜萃取苷类化合物，除 去糖类、蛋白等大极性杂质干扰。为保证充分萃取，对萃取方法进行考察。取该组合物制剂内容物，按2. 2. 2方法制备后过中性氧化铝柱洗脱液两份，分别 蒸干，加水15ml溶解。水溶液1用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，弃去水层，正丁醇 提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液1。水溶液2用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗 2次，每次10ml，弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液2。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液4 μ 1，供试品溶液1、2各8 μ 1，点样于同一硅胶G板上， 以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试 液，置于紫外光灯(365nm)下检视。实验结果如下供试品色谱中1，在与对照品色谱相应位置上，相同颜色的荧光斑点模糊、不清晰， 且有杂质点干扰。供试品色谱中2，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且斑点清 晰，无杂质干扰。2. 3供试品溶液及对照药材溶液点样量的考察
按2. 2项下方法制备供试品溶液。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液2、4、6μ 1，供试品溶液6、8、12μ 1，点样于同一硅胶G板 上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝 试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。实验结果如下橙皮苷对照品溶液点样量为2μ 1时，荧光斑点强度较低，不宜观察；点样量为 4μ1时，橙皮苷对照品溶液薄层上荧光斑点清晰，大小适中；点样量为6μ 1时，斑点太大， 拖尾。因此，确定橙皮苷对照品溶液的最佳点样量为4μ 1。供试品溶液点样量为6μ 1时，在橙皮苷对照品相对应的位置上荧光斑点强度较 低，不宜观察；点样量为8μ 1时，在橙皮苷对照品相对应的位置上荧光斑点明显，斑点大小 适中，前后无干扰；点样量为12μ 1时，在橙皮苷对照品相对应的位置上荧光斑点较大，明 显拖尾，与前后荧光斑点相连。因次确定供试品的最佳点样量为8 μ 1。2. 4展开剂的选择按上述方法制备供试品溶液和对照药材溶液。吸取上述对照品溶液4μ 1，供试品 溶液8μ 1，分别用以下展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm) 下检视。试验结果如下方法1:展开剂为氯仿-甲醇-水(6 9 2)(下层)，展开剂极性较大，供试品、 橙皮苷斑点Rf值接近0. 85，供试品色谱中橙皮苷斑点与前后斑点未分开；方法2:展开剂为氯仿-甲醇-水(13 7 2)(下层)，极性适宜，橙皮苷斑点Rf 值接近0. 45，供试品色谱中橙皮苷斑点分离良好，前后无干扰；方法3:展开剂为氯仿-甲醇-水(26 5 2)(下层)，极性偏低，供试品色谱中 橙皮苷斑点与前后斑点未分开。因此，确定分离中药组合物制剂中陈皮成分的最优薄层展开剂为氯仿_甲醇-水 (13 7 2)(下层)。综上试验最后确定中药组合物制剂中陈皮的薄层色谱鉴别条件为取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小 时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶 解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品。吸取上述对照 品4μ1，供试品8μ1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)的下 层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。供 试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。实验例5 赤芍薄层鉴别试验赤芍中主要含有单萜类化合物如芍药苷等，为赤芍的有效成分。本处方药味较多， 成分复杂，薄层鉴别方法比较独特。
1、供试品制备方法的选择本发明中利用赤芍中的芍药苷与陈皮中的橙皮苷极性相似，在陈皮薄层鉴别供试品中也含有赤芍成分，以下对此进行验证取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半小 时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40 %甲醇50ml洗 脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml。弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶 解，作为供试品溶液。取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿_醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，加热至斑点显色清晰。结果表明供试品色谱中，在与芍药苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑 点。陈皮薄层鉴别供试品溶液制备方法同样适用于制备赤芍的薄层鉴别供试品。2、供试品溶液点样量的考察本发明，对供试品溶液点样量进行考察。分别吸取供试品溶液2、5、8μ 1点于同一硅胶G板上，展开、检识。试验结果如下供试品溶液点样量为2μ 1时，斑点强度较低，不宜观察；供试品溶液点样量为5μ 1时，薄层上荧光斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干 扰；供试品溶液点样量为8μ 1时，供试品溶液薄层上荧光斑点较大，与前后荧光斑点 相连。因此，确定供试品溶液的最佳点样量为5μ 1。综上试验最后确定中药组合物制剂中赤芍的薄层色谱鉴别条件为取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取芍药苷 对照品溶液，陈皮薄层鉴别供试品溶液各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑 点ο实验例6 黄柏薄层鉴别试验1、供试品制备方法的考察本发明通过一系列考察，对黄柏薄层鉴别供试品提取方法进行优选。选择正交试验设计优选影响制剂中成分提取率的3个因素进行考察，分别为提 取溶剂、提取溶剂量、提取时间，每个因素设置3个水平。试验设计如下 按正交表L9(34)安排实验。实验方法如下 通过以上试验共制备9份供试品溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取对照品溶液及9份供试品溶液，各1 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以 苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6 3 1.5 1.5 0.5)为展开剂，置氨试 液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。试验结果表明，最优供试品制备方法为该组合物制剂末0.3g加甲醇IOml超声 5min，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
具体实施例方式实施例1丹参144g 泽兰48g 桃仁48g 红花144g 赤芍48g白芷96g 陈皮96g 泽泻144g王不留行144g败酱240g川楝子96g小茴香(盐制)96g黄柏(盐制)144g以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每 次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后 的水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时，第二次以6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干 燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制 成1000片，包糖衣，即得。功能主治理气活血，通经散结。用于前列腺增生症，尿闭等。用法用量口服，一次4 6片，一日3次。每片重0. 35g。含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0. 05mol/lNaH2P04缓冲溶液(H3PO4调PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)为流动相；检测波长 为270nm ；对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂内容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用微孔滤膜 (0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别精密吸取对照品液、供试品液各 10μ 1注入液相色谱仪，测定即得；本品中每片含黄柏以盐酸小檗碱计(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. IOmg0陈皮薄层鉴别取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml 超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40% 甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml， 合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲 醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；吸取 上述对照品4μ1，供试品8μ1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2) 的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检 视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；赤芍薄层鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声 提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲 醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为 对照品溶液；分别吸取对照品，供试品各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑占.黄柏薄层鉴别该组合物制剂粉末0. 3g加甲醇IOml超声5min，滤过，蒸干，残渣 加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液，各1 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以苯-醋酸 乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6 3 1.5 1.5 0.5)为展开剂，置氨试液饱和的 展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色 谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例2丹参144g 泽兰48g 桃仁48g 红花144g 赤芍48g
白芷96g 陈皮96g 泽泻144g王不留行144g败酱240g川楝子96g小茴香(盐制)96g黄柏(盐制)144g以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后 的水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小 时，第二次以6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干 燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制 成1000片，包糖衣，即得。含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0. 05mol/lNaH2P04缓冲溶液(H3PO4调PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)为流动相；检测波长 为270nm ；对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂内容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用微孔滤膜 (0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别精密吸取对照品液、供试品液各 10 μ 1注入液相色谱仪，测定即得；本品中每片含黄柏以盐酸小檗碱计(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. 15mg。实施例3丹参144g 泽兰48g桃仁48g红花144g 赤芍48g白芷96g 陈皮96g泽泻144g王不留行144g败酱240g川楝子96g小茴香(盐制)96g黄柏(盐制)144g以上十三味，泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每 次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽(约4小时)蒸馏后的 水溶液另器收集；药渣与其余赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时， 第二次以6倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉 碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，混勻，装胶 囊，即得。含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0. 05mol/lNaH2P04缓冲溶液(H3PO4调PH = 3. 0 士0. 5)-乙腈(73 27)为流动相；检测波长 为270nm ；对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成Iml含10 μ g 的溶液；供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂内容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml， 称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用微孔滤膜 (0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别精密吸取对照品液、供试品液各 10μ 1注入液相色谱仪，测定即得；本品中每片含黄柏以盐酸小檗碱计(C20H17N04 · HCl)， 不得少于0. IOmg0陈皮薄层鉴别取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml 超声提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40% 甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml， 合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲 醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；吸取上述对照品4μ1，供试品8μ1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2) 的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检 视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；赤芍薄层鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声 提取半小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲 醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合 并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲 醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为 对照品溶液；分别吸取对照品，供试品各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以氯仿-醋酸 乙酯-甲醇-甲酸(40 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑占.黄柏薄层鉴别该组合物制剂粉末0. 3g加甲醇IOml超声5min，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液，各1 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以苯-醋酸 乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6 3 1.5 1.5 0.5)为展开剂，置氨试液饱和的 展开缸内，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色 谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
权利要求
一种理气活血，通经散结的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为丹参120-168重量份、泽兰24-72重量份、桃仁24-72重量份、红花120-144重量份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陈皮72-120重量份、泽泻120-168重量份、王不留行120-168重量份、败酱216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(盐制)72-120重量份、黄柏(盐制)120-168重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为丹参144重量份、泽兰48重量份、桃仁48重量份、红花144重量份、赤芍48重量份、白芷96重量份、陈皮96重量份、泽泻144重量份、王不留行144重量份、败酱240重量份、川 楝子96重量份、小茴香(盐制)96重量份、黄柏(盐制)144重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用40-80%乙醇回流提取1-3次，每次1-4小时， 合并提取液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮提取挥发油至尽，蒸馏后的水溶液另器收集；药 渣与其余赤芍等七味药加水煎煮1-3次，每次1-5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述药液合 并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉混勻，干燥，加入上述小茴香等挥发 油及常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊 齐U、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或 口服液体制剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物片剂的制备方法，其特征在于该方法为泽泻、白芷粉碎成细粉；丹参、川楝子用60%乙醇回流提取二次，每次2小时，合并提取 液，滤过，回收乙醇；小茴香、陈皮蒸馏提取挥发油4小时后的水溶液另器收集；药渣与其余 赤芍等七味药加水煎煮二次，第一次以8倍量水煎煮3小时，第二次以6倍量水煎煮2小时， 合并煎液，滤过，滤液与上述药液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，加入泽泻、白芷细粉 混勻，制成颗粒，干燥，加入上述小茴香等挥发油，压制成片，包糖衣，即得。
5、如权利要求1 或2所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定或鉴别中的一种或 几种A、含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 60-80 20-30 比例的 0. 01-0. lmol/1 NaH2PO4 缓冲溶液(H3PO4 调 PH = 2. 5-4. 0)-乙 腈为流动相；检测波长为260 280nm ；对照品溶液的制备称定盐酸小檗碱，加甲醇制 成Iml含5-15 μ g的溶液；供试品溶液的制备称取该组合物制剂0. l_2g，精密加入甲醇 25-75ml，称定重量，超声处理10-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻， 用0. 2-0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别吸取对照品液、供 试品液各5 15 μ 1注入液相色谱仪，测定即得；组合物制剂0. 2-lg含盐酸小檗碱不得少 于 0. IOmg0B、鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇25-75ml超声提取15 45min，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，2. 5 7. 5g，内径10_15mm)上，用20% 60%甲醇25 75ml洗脱，洗脱液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取 1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗1_3次，每次5 15ml ；弃去 水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品2 6μ 1，供试品6 12 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以10-16 5-9 2的氯仿-甲醇-水混合溶剂的下层溶液为展开 齐U，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；C、鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取粉末5g，加甲醇25-75ml超声提取15 45min，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，2. 5 7. 5g，内径10_15mm)上，用20% 60%甲醇25 75ml洗脱，洗脱液蒸干，加水10 25ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取 1 3次，每次10 25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗1_3次，每次5 15ml ；弃去 水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；取芍药苷对照品，加乙醇 制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品，供试品各2_10 μ 1，分别点样于同 一硅胶G板上，以35-50 4-6 8-12 0. 2比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶 剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色 谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；D、鉴别该组合物制剂粉末0.I-Ig加甲醇2-15ml超声5 30min，滤过，蒸干，残渣加 甲醇0. 5-5ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. l_5mg 的溶液，作为对照品溶液；分别吸取上述两种溶液各0. 1-2 μ 1，分别点样于同一硅胶G板 上，以5-8 2-4 1-3 1-4 0. 3-0. 9比例的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试 液混合溶剂为展开剂，置氨试液饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下 检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.如权利要求5所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定和 /或鉴别中的一种或几种含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0. 05mol/l NaH2PO4缓冲溶液(H3PO4调PH= 3. 0士0. 5)-乙腈(73 27)为流动相；检测波长 为270nm ；对照品溶液的制备精密称定盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成Iml含10 μ g的 溶液；供试品溶液的制备精密称取该组合物制剂内容物粉末0. 5g，精密加入甲醇50ml，称 定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，用0. 45 μ m微孔 滤膜滤过，取续滤液，即得；测定方法以上溶液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10 μ 1 注入液相色谱仪，测定即得； 鉴别陈皮薄层鉴别取该组合物制剂内容物，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超 声提取半小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm中性氧化铝柱上，用40%甲醇 50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并 正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇 2ml溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品；吸取上 述对照品4 μ 1，供试品8 μ 1，分别点样于同一硅胶G板上，以13 7 2氯仿-甲醇-水 的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视； 供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；赤芍薄层鉴别取该组合物制剂，粉碎成粉末，称取本粉末5g，加甲醇50ml超声提取半 小时，滤过，滤液加于100-120目，5g，内径10-15mm中性氧化铝柱上，用40 %甲醇50ml洗脱，洗脱液蒸干，加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取两次，每次15ml，合并正丁醇 液，用正丁醇饱和水洗2次，每次IOml ；弃去水层，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇2ml溶 解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶 液；分别吸取对照品，供试品各5μ1，分别点样于同一硅胶G板上，以40 5 10 0.2的 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至 斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；黄柏薄层鉴别该组合物制剂粉末0. 3g加甲醇IOml超声5min，滤过，蒸干，残渣加 甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成Iml含0. 5mg的 溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液，各 μ ，分别点样于同一硅胶G板上，以 6 3 1.5 1.5 0.5的苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液为展开剂，置氨试液 饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
7.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗前列腺增生症、尿闭药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种理气活血，通经散结的中药组合物制剂，该组合物由丹参120-168重量份、泽兰24-72重量份、桃仁24-72重量份、红花120-144重量份、赤芍24-72重量份、白芷72-120重量份、陈皮72-120重量份、泽泻120-168重量份、王不留行120-168重量份、败酱216-264重量份、川楝子72-120重量份、小茴香(盐制)72-120重量份、黄柏(盐制)120-168重量份制成，该组合物制剂对前列腺增生症、尿闭具有显著疗效。
文档编号G01N30/90GK101837076SQ20091008029
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月17日 优先权日2009年3月17日
发明者付建家, 付立家 申请人:北京亚东生物制药有限公司