一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法
【专利摘要】本发明公开了一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法。本发明提供的辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法，包括如下步骤：（1）将NF-κB-luc转基因小鼠或TNF-α-luc转基因小鼠分为两组，第一组饲喂普通饲料，第二组饲喂待测饲料，所述待测饲料为待测食品与普通饲料的混合物；（2）所述步骤（1）进行3-14天（如3-7天、7-14天、3天、7天或14天）后，通过活体成像分别检测第一组小鼠的荧光强度和第二组小鼠的荧光强度，如果第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠的荧光强度，待测食品中含有转基因植物成分。本发明提供的方法操作简便，成本低廉，结果判断简易，具有非常大的推广和应用价值。
【专利说明】一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法。
【背景技术】
[0002]转基因生物在联合国公约《生物安全议定书》上，各个国家全部都接受的一个概念，称做“改性活生物体” Living Modified Organisms,简称LMOs,或者叫“遗传饰变生物”Genetically Modified Organisms,GMOs。LMOs或GMOs就是指凭借现代生物技术获得的遗传材料新异组合的活生物体。实际上就是将外源DNA导入生物体基因组，引起了遗传改变，改变了遗传组成的生物，就是转基因生物。
[0003]从1996年开始，转基因植物大面积的推广，如转基因大豆、转基因玉米、转基因番茄等。在世界上，美国是转基因技术发展最快的国家，其国内转基因农作物种类最多，种植面积也最大。目前美国60%以上的加工食品都是以转基因农作物为原料。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法。
[0005]本发明提供了一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法，包括如下步骤:(I)将NF-K B-1uc转基因小鼠分为两组，第一组饲喂普通饲料，第二组饲喂待测饲料，所述待测饲料为待测食品与普通饲料的混合物；(2)所述步骤(I)进行3-14天(如3-7天、7-14天、3天、7天或14天)后，通过活体成像分别检测第一组小鼠的荧光强度和第二组小鼠的荧光强度，如果第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠的荧光强度，待测食品中含有转基因植物成分。所述待测饲料具体可为将I体积份待测食品与3体积份普通饲料混合得到的混合物。所述普通饲料具体可为北京华阜康生物科技股份有限公司的大小鼠维持料(产品代号为1022)。所述活体成像是采用精诺真活体动物成像系统进行的。所述转基因植物可为转基因玉米，更具体可为NK603转基因玉米。
[0006]本发明还保护NF-K B-1uc转基因小鼠在辅助检测食品中是否含有转基因植物成分中的应用。所述转基因植物可为转基因玉米，更具体可为NK603转基因玉米。
[0007]本发明还保护一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法，包括如下步骤:(I)将TNF-a -1uc转基因小鼠分为两组，第一组饲喂普通饲料，第二组饲喂待测饲料，所述待测饲料为待测食品与普通饲料的混合物；(2)所述步骤(I)进行3-14天(如3-7天、7-14天、3天、7天或14天)后，通过活体成像分别检测第一组小鼠的荧光强度和第二组小鼠的荧光强度，如果第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠的荧光强度，待测食品中含有转基因植物成分。所述待测饲料具体可为将I体积份待测食品与3体积份普通饲料混合得到的混合物。所述普通饲料具体可为北京华阜康生物科技股份有限公司的大小鼠维持料(产品代号为1022)。所述活体成像是采用精诺真活体动物成像系统进行的。所述转基因植物可为转基因玉米，更具体可为ΝΚ603转基因玉米。
[0008]本发明还保护TNF-α -1uc转基因小鼠在辅助检测食品中是否含有转基因植物成分中的应用。所述转基因植物可为转基因玉米，更具体可为NK603转基因玉米。
[0009]本发明提供的方法操作简便，成本低廉，结果判断简易，具有非常大的推广和应用价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为实施例1中通过精诺真活体动物成像系统IVIS? 100观察小鼠的照片。
[0011]图2为实施例1中左肺、右肺和腹部的总荧光强度。
[0012]图3为实施例2中通过精诺真活体动物成像系统IVIS? 100观察NF- κ B-1uc转基因小鼠的照片。
[0013]图4为实施例2中NF-K B-1uc转基因小鼠每个时间点，所有部位的荧光强度之和。
[0014]图5为实施例2中通过精诺真活体动物成像系统IVIS? 100观察TNF- a -1uc转基因小鼠的照片。
[0015]图6为实施例2中TNF-a -1uc转基因小鼠每个时间点，所有部位的荧光强度之和。
[0016]图7为实施例3中各组TNF-a -1uc转基因小鼠的相对荧光强度。
[0017]图8为实施例3中各组NF-κ B-1uc转基因小鼠的相对荧光强度。
【具体实施方式】
[0018]以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0019]NF-K B-1uc转基因小鼠:购自南京模式动物研究所，产品目录号为D0161。
[0020]TNF- a -1uc转基因小鼠:购自南京模式动物研究所，产品目录号为D0089。
[0021]脂多糖:购自SIGMA公司，产品目录号为L2880。
[0022]荧光素酶底物(D-Luciferin)=Caliper 公司，货号为 122796。
[0023]血管紧张素II (Angiotension II，Ang II):SIGMA 公司，货号为 Α9525。
[0024]实施例中所用的转基因玉米为NK603转基因玉米(又称转基因玉米NK603，是在普通玉米中导入抗草甘膦基因得到的)。
[0025]实施例1、应用脂多糖诱导炎症相关转录因子NF-K B
[0026]食物中的蛋白成分可通过影响肠道细菌引起机体的炎症反应。本实施例中利用小鼠摄入脂多糖的方法模拟体内肠道细菌变化导致的炎性条件，利用精诺真小动物活体成像技术，检测炎症相关转录因子NF-κ B的激活情况。
[0027]取NF-K B-1uc转基因小鼠，腹腔注射脂多糖(用pH7.2的PBS缓冲液作为溶剂)，剂量为“ Img脂多糖/Kg小鼠”，分别于注射脂多糖后O小时(即刚完成注射)、I小时和2.5小时后，腹腔注射荧光素酶底物(I50mg荧光素酶底物/kg体重),然后立即通过精诺真活体动物成像系统IVIS? 100观察小鼠，照片见图1。左肺、右肺和腹部的总荧光强度见图2。
[0028]可以观察到，腹腔注射脂多糖I小时和2.5小时后，均可在小鼠左肺、右肺和腹部观察到明显的荧光，即小鼠左肺、右肺和腹部的NF-K B被明显激活。
[0029]实施例2、应用Ang II诱导炎症相关转录因子NF- κ B或炎症因子TNF- α
[0030]高盐饮食会引发机体内Ang II增高，而增高的Ang II可引发体内部分炎症相关基因活性变化。本实施例中，在转基因小鼠中利用Ang II灌泵(背部)，然后检测炎症相关转录因子NF-κ B或炎症因子TNF-α的变化。
[0031]取NF-κ B-1uc转基因小鼠，在背部植入Ang II灌泵(用ρΗ7.2的PBS缓冲液作为Ang II的溶剂)，剂量为“1500ng/(lKg小鼠.分钟)”，分别于植入后O天(即刚完成植入)、I天、3天、5天和7天后，腹腔注射荧光素酶底物，然后立即通过精诺真活体动物成像系统IVTS^ 100观察小鼠，照片见图3。每个时间点，所有部位的荧光强度之和见图4。
[0032]取TNF- a -1uc转基因小鼠，在背部植入Ang II灌泵(用ρΗ7.2的PBS缓冲液作为AngII的溶剂)，剂量为“1500ng/(lKg小鼠.分钟)”，分别于植入后O天(即刚完成植入)、I天、3天、5天和7天后，腹腔注射荧光素酶底物，然后立即通过精诺真活体动物成像系统IVIS? 100观察小鼠，照片见图5。每个时间点，所有部位的荧光强度之和见图6。
[0033]实施例3、检测食品中是否含有转基因植物成分
[0034]一、采用TNF-α -1uc转基因小鼠检测食品中是否含有转基因植物成分
[0035]1、将TNF- a -1uc转基因小鼠进行分组饲喂，每组3只，分组饲喂方式如下: [0036]第一组:喂养正常饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司的大小鼠维持料，产品代号为1022)；
[0037]第二组:饲喂混合鼠料甲(将I体积份转基因玉米的籽粒粉末与3体积份正常饲料混合，得到混合鼠料甲)；
[0038]第三组:饲喂混合鼠料乙(将I体积份普通玉米的籽粒粉末与3体积份正常饲料混合，得到混合鼠料乙);
[0039]第四组:饲喂混合鼠料丙(将I体积份玉米品种屯玉68的籽粒粉末与3体积份正常饲料混合，得到混合鼠料丙)。
[0040]分组饲喂前(O天)、饲喂3天、7天和14天后，腹腔注射荧光素酶底物(150mg荧光素酶底物/kg体重)，然后立即通过精诺真活体动物成像系统IVIS* 100观察小鼠(饲喂7天后的照片见图7)。
[0041]第一组小鼠和第二组小鼠饲喂7天后的照片见图7。O天时，第一组小鼠和第二组小鼠荧光强度相同(每个小鼠个体所有部位的荧光强度之和)，将O天时小鼠的荧光强度作为1，计算饲喂3天、7天和14天后，各组小鼠的相对荧光强度，见图7。结果表明，从饲喂3天开始，第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠。饲喂3天、7天和14天后，第三组小鼠的荧光强度、第四组小鼠的荧光强度均与第一组小鼠没有显著差异。饲喂3天、7天和14天后，同组小鼠之间的荧光强度均没有显著差异。
[0042]二、采用NF-K B-1uc转基因小鼠检测食品中是否含有转基因植物成分
[0043]将NF- κ B-1uc转基因小鼠代替TNF- a -1uc转基因小鼠进行步骤一。
[0044]第一组小鼠和第二组小鼠饲喂14天后的照片见图8。O天时，第一组小鼠和第二组小鼠荧光强度相同(每个小鼠个体所有部位的荧光强度之和)，将O天时小鼠的荧光强度作为1，计算饲喂3天、7天和14天后，各组小鼠的相对荧光强度，见图8。结果表明，从饲喂3天开始，第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠。饲喂3天、7天和14天后，第三组小鼠的荧光强度和第四组小鼠的荧光强度均与第一组小鼠没有显著差异。饲喂3天、7天和14天后，同组小鼠之间的荧光强度均没有显著差异。
【权利要求】
1.一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法，包括如下步骤: (1)将NF-KB-1uc转基因小鼠分为两组，第一组饲喂普通饲料，第二组饲喂待测饲料，所述待测饲料为待测食品与普通饲料的混合物； (2)所述步骤(I)进行3-14天后，通过活体成像分别检测第一组小鼠的荧光强度和第二组小鼠的荧光强度，如果第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠的荧光强度，待测食品中含有转基因植物成分。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述活体成像是采用精诺真活体动物成像系统进行的。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述待测饲料为将I体积份待测食品与3体积份普通饲料混合得到的混合物。
4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于:所述普通饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司的大小鼠维持料。
5.NF- K B-1uc转基因小鼠在辅助检测食品中是否含有转基因植物成分中的应用。
6.一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法，包括如下步骤: (1)将TNF-a-1uc转基因小鼠分为两组，第一组饲喂普通饲料，第二组饲喂待测饲料，所述待测饲料为待测食品与普通饲料的混合物； (2)所述步骤(I)进行3-14天后，通过活体成像分别检测第一组小鼠的荧光强度和第二组小鼠的荧光强度，如果第二组小鼠的荧光强度显著高于第一组小鼠的荧光强度，待测食品中含有转基因植物成分。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于:所述活体成像是采用精诺真活体动物成像系统进行的。
8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于:所述待测饲料为将I体积份待测食品与3体积份普通饲料混合得到的混合物。
9.如权利要求6至8中任一所述的方法，其特征在于:所述普通饲料为北京华阜康生物科技股份有限公司的大小鼠维持料。
10.TNF- a -1uc转基因小鼠在辅助检测食品中是否含有转基因植物成分中的应用。
【文档编号】G01N21/64GK103926224SQ201410117225
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年3月26日 优先权日:2014年3月26日
【发明者】杜杰, 朴春梅, 刘婷婷, 郑师, 谢道昕 申请人:北京市心肺血管疾病研究所