酶联免疫吸附检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种酶联免疫吸附检测方法，使用一种酶联免疫吸附检测盒，包括设有小槽的玻片，玻片背部设有用于支撑所述玻片的底座，玻片正面压接设有与小槽相对应的小孔的硅胶板，硅胶板的上方压接有盖子，盖子上设有与所述硅胶板其上的小孔相对应的通孔；操作步骤为：将洗涤后的细胞系涂布于玻片小槽内，将细胞系固定，风干；将玻片转入底座上，盖上硅胶板和盖子，加入待检测血浆，37℃下孵育，洗涤，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，37℃下孵育，将玻片取出，洗涤，染色，镜检观察结果。本发明采用酶联免疫吸附检测盒，杜绝了加样过程中各小槽之间的液体因流串而造成的交叉污染，提高了检测的精确度。
【专利说明】酶联免疫吸附检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及酶联免疫临床应用【技术领域】，尤其是一种酶联免疫吸附检测方法。
【背景技术】
[0002]酶联免疫吸附检测是将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法，因此，酶联免疫吸附检测试验对于临床医学疾病的预防和诊断具有指导作用。
[0003]传统的酶联免疫吸附检测方法是采用设有多个小槽的玻片，抗原抗体反应在玻片小槽内进行，但是各小槽仅能容纳40微升液体，各小槽间仅靠轻微隆起的油漆隔开，因此，相邻两个小槽的液体样品极易交叉污染，最终影响检测的精确度。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种酶联免疫吸附检测方法，它可以解决液体样品容易交叉污染的问题。
[0005]为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是:它使用酶联免疫吸附检测盒来检测，所述酶联免疫吸附检测盒包括其上设有24个小槽的玻片，所述玻片背部设有用于支撑所述玻片的底座，该底座为槽型底座，所述玻片为4张，并排设置在所述底座槽内；所述玻片正面压接设有与所述小槽相对应的小孔的硅胶板，所述硅胶板的上方压接有盖子，该盖子上设有与所述硅胶板其上小孔相对应的通孔；
酶联免疫吸附检测方法包括以下步骤:
A、用磷酸缓冲溶液洗涤培养的细胞系，然后将所述细胞系均匀涂布于玻片的小槽内，置于4°C冰箱中，采用预冷的丙酮溶液将细胞系固定，风干备用；
B、将所述玻片转入所述酶联免疫吸附检测盒的底座上，依次盖上硅胶板和盖子，从盖子表面的小孔加入待检测血浆，然后置于37°C下孵育30分钟；
C、采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，从盖子表面的小孔加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，然后置于37°C下孵育30分钟；
D、将玻片取出，采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，将所述玻片置于联苯胺显色液中，然后加入过氧化氢溶液，染色5分钟?10分钟，镜检观察结果。
[0006]上述技术方案中，更具体的技术方案还可以是:步骤A中所述细胞系的添加量为15微升?20微升。
[0007]进一步的，步骤B中待检测血浆采用磷酸盐缓冲溶液稀释5倍?10倍；步骤B中所述的稀释后的待检测血浆的添加量为15微升?20微升。
[0008]进一步的，步骤C中所述的辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体的添加量为15微升?20微升。
[0009]进一步的，盖子压接在所述底座的上端面；盖子的侧面设有与所述底座的侧围相嵌的卡扣。
[0010]进一步的,玻片表面一角设有一个用于方向定位的三角块,所述底座槽内表面设有多个用于控制玻片位置的凸点。
[0011]更进一步的，盖子的材质为有机玻璃。
[0012]由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比具有如下有益效果:
1、本发明采用酶联免疫吸附检测盒，酶联免疫吸附检测盒的玻片上方设置一层带有多个小孔的硅胶板，硅胶板上方设有一层带多个通孔的盖子，硅胶板小孔、盖子通孔的孔径均与玻片的小槽相同，并且硅胶板小孔、盖子通孔位置均与玻片小槽的位置一一对应，使得相邻的玻片小槽内的液体较好的隔离开来，杜绝了加样过程中各小槽之间的液体因流串而造成的交叉污染，提闻检测的精确度。
[0013]2、本发明采用酶联免疫吸附检测盒，酶联免疫吸附检测盒的玻片小槽之间采用通用的96孔间距设计，使得加样可采用8道或者12道加样器，代替传统的手工加样的方式，从而提闻加样效率。
[0014]3、本发明采用酶联免疫吸附检测盒，酶联免疫吸附检测盒采用通用的96
孔间距设计，使得酶联免疫吸附检测盒的清洗能够与通用的洗板机兼容，从而减少了人工操作。
[0015]4、本发明适用于所有基于玻片介质的细胞系抗原或抗体的检测，在临床
上，除了常用的EB病毒特异性抗体检测之外，还适用于肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、嗜肺军团菌、流感病毒等呼吸道病毒的检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是本发明实施例的结构示意图。
[0017]图2是本发明的底座的俯视图。
[0018]图3是本发明的玻片的结构示意图。
[0019]图4是本发明的硅胶板的结构示意图。
[0020]图5是本发明的盖子的结构示意图。
【具体实施方式】
[0021]下面结合附图实施例对本发明作进一步详述:
实施例1
一种酶联免疫吸附检测方法，使用如图1?图4所示的酶联免疫吸附检测盒，如图1?图4所示，该酶联免疫吸附检测盒包括其上设有小槽2-1的玻片2，玻片2背部设有用于支撑所述玻片2的底座1，玻片2正面压接设有与所述小槽2-1相对应的小孔3-1的硅胶板3，所述硅胶板3的上方压接有盖子4，盖子4设有与所述硅胶板3其上的小孔3-1相对应的通孔4-2 ;底座I为槽型底座，玻片2和硅胶板3安装在所述底座槽内，盖子4压接在底座I的上端面；盖子4的侧面设有与底座I侧围相嵌的卡扣4-1，盖子4的材质为有机玻璃；本实施例中玻片2的数量为4张，4张玻片并排设置在所述底座槽内，每张玻片2设有24个小槽，每张玻片2表面的一角均设有一个用于方向定位的三角块，底座I槽内表面设有多个用于控制所述玻片2位置的凸点。盖子4上的通孔4-2以及所述硅胶板的小孔3-1的位置和孔径均与玻片2上的小槽2-1的位置与孔径相对应，从而加深玻片小槽2-1的深度，使得相邻的玻片小槽内的液体较好的隔离开来，避免加样时液体样品的交叉污染。
[0022]操作步骤为:
A、采用磷酸缓冲溶液洗涤培养的细胞系，将15微升细胞系均匀涂布于
玻片2的小槽2-1内，置于4°C冰箱中，采用预冷的丙酮溶液将均匀涂布于玻片小槽2-1内的细胞系固定，风干备用；
B、将玻片2转入酶联免疫吸附检测盒的底座I上，依次盖上硅胶板3和
盖子4，将20微升稀释后的待检测血浆从盖子4的小孔加入，置于37°C下孵育30分钟；
C、采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，加入20微升辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，置于37°C下孵育30分钟；
D、将玻片2取出，采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，将所述玻片置于联苯胺显色液中，然后加入过氧化氢溶液，染色10分钟，镜检观察结果。
[0023]本实施例中，待测血浆用磷酸缓冲溶液稀释10倍。
[0024]实施例2
本实施例中细胞系的添加量为20微升，待测血浆用磷酸缓冲溶液稀释5倍，待检测血浆的添加量为15微升，过氧化物酶标记的抗人IgA抗体的添加量为15微升；其他均与实施例I相同。
[0025]操作步骤为:
A、采用磷酸缓冲溶液洗涤培养的细胞系，将20微升细胞系均匀涂布于
玻片2的小槽2-1内，置于4°C冰箱中，采用预冷的丙酮溶液将均匀涂布于玻片小槽2-1内的细胞系固定，风干备用；
B、将玻片2转入酶联免疫吸附检测盒的底座I上，依次盖上硅胶板3和
盖子4，将15微升稀释后的待检测血浆从盖子4的小孔加入，置于37°C下孵育30分钟；
C、采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，加入15微升辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，置于37°C下孵育30分钟；
D、将玻片2取出，采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，将所述玻片置于联苯胺显色液中，然后加入过氧化氢溶液，染色5分钟,镜检观察结果。
【权利要求】
1.一种酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:使用酶联免疫吸附检测盒来检测，所述酶联免疫吸附检测盒包括其上设有24个小槽(2-1)的玻片(2)，所述玻片(2)背部设有用于支撑所述玻片(2 )的底座(I)，该底座(I)为槽型底座，所述玻片(2 )为4张，并排设置在所述底座槽内；所述玻片(2)正面压接设有与所述小槽(2-1)相对应的小孔(3-1)的硅胶板(3)，所述硅胶板(3)的上方压接有盖子(4)，该盖子上设有与所述硅胶板(3)其上小孔(3-1)相对应的通孔(4-2)； 酶联免疫吸附检测方法包括以下步骤: A、用磷酸缓冲溶液洗涤培养的细胞系，然后将所述细胞系均匀涂布于玻 片(2)的小槽内，置于4°C冰箱中，采用预冷的丙酮溶液将细胞系固定，风干备用； B、将所述玻片转入所述酶联免疫吸附检测盒的底座(I)上，依次盖上 硅胶板(3)和盖子(4)，从盖子(4)表面的通孔(4-2)加入待检测血浆，然后置于37°C下孵育30分钟； C、采用磷酸缓冲溶液洗涤3次，从盖子(4)表面的通孔(4-2)加入辣 根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体，然后置于37°C下孵育30分钟； D、将玻片(2)从酶联免疫吸附检测盒中取出，采用磷酸缓冲溶液洗涤3 次，将所述玻片(2)置于联苯胺显色液中，然后加入过氧化氢溶液，染色5分钟?10分钟，镜检观察结果。
2.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:步骤A中所述细胞系的添加量为15微升?20微升。
3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:步骤B中的待检测血浆采用磷酸盐缓冲溶液稀释5倍?10倍；步骤B中所述的稀释后的待检测血浆的添加量为15微升?20微升。
4.根据权利要求1或2所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:步骤C中所述辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体的添加量为15微升?20微升。
5.根据权利要求3所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:步骤C中所述辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体的添加量为15微升?20微升。
6.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:所述盖子(4)压接在所述底座(I)的上端面；所述盖子(4)的侧面设有与所述底座(I)的侧围相嵌的卡扣(4-1)。
7.根据权利要求1或6所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:所述玻片(2)表面一角设有一个用于方向定位的三角块，所述底座(I)槽内表面设有多个用于控制所述玻片(2)位置的凸点。
8.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于:所述盖子(4)的材质为有机玻璃。
【文档编号】G01N33/543GK104181293SQ201410423837
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月26日 优先权日:2014年8月26日
【发明者】汤敏中, 蔡永林, 黄宇璐, 覃炜玲, 李军, 郑裕明 申请人:梧州市红十字会医院