一种利用表面官能团的检测瘦素的胶乳增强免疫比浊试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及体外诊断试剂领域，特别是涉及一种利用表面官能团的检测瘦素（Leptin）的胶乳增强免疫比浊试剂盒。本发明提供一种利用表面官能团的检测瘦素（Leptin）的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2由交联LP抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与LP抗体之间以共价交联方式连接，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基。本发明采用胶乳增强免疫比浊法，当血液中的LP与LP抗体反应时，带动了聚苯乙烯胶乳聚集产生一定的浊度，检测更为方便，容易在临床中应用。
【专利说明】-种利用表面官能团的检测瘦素的胶乳增强免疫比浊试剂 合 Sl
【技术领域】
[0001] 本发明涉及体外诊断试剂领域，特别是涉及一种利用表面官能团的检测瘦素 (Leptin)的胶乳增强免疫比浊试剂盒。
【背景技术】
[0002] 瘦素（L印tin)是一种分子量为16kDa，146个氨基酸组成的单链蛋白，它由肥胖基 因编码、脂肪细胞合成分泌的蛋白质类激素。人们普遍认为它进入血液循环后会参与糖、月旨 肪及能量代谢的调节，促使机体减少摄食，增加能量释放，抑制脂肪细胞的合成，进而使体 重减轻。还与炎性反应、神经内分泌、消化道肿瘤、妇产科疾病、肝脏疾病等有关，其代谢的 异常参与了相关疾病的发病过程。瘦素的主要功能是调节能量平衡，是维持正常体重的基 本激素，实验证明肥胖者血清瘦素浓度均高于非肥胖者。在恶性肿瘤方面，瘦素及其受体的 表达与肿瘤，如乳腺癌、胃癌、肝癌等发生和预后密切相关。在慢性肝病中，瘦素水平与病情 程度显著相关，不论肝功能异常程度如何，其血清瘦素水平均高于正常人。在正常妊娠中血 中瘦素水平随妊娠进展逐渐增加，妊高症时瘦素增加，故瘦素可作为一项临床指标。研究表 明早产儿体重下降与血浆瘦素浓度下降之间存在显著正相关。正常情况下胰岛素刺激瘦素 分泌，与此同时瘦素通过与胰岛细胞上的受体结合来抑制胰岛素的分泌，提示瘦素与胰岛 素及胰岛素抵抗关系密切。研究还发现，原发性高血压患者血清瘦素和胰岛素水平显著升 高，相互间成正相关。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是：提供一种制备成 本低廉，稳定性好，易于保存，数据重复性好，检测灵敏度高，可广泛应用于临床生化仪的 LP检测试剂盒。
[0004] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种利用表面官能团的检 测瘦素（Leptin)的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括试剂Rl和试剂R2,所述试 剂Rl由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2由交联LP 抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳 微球与LP抗体之间以共价交联方式连接。
[0005] 本技术方案中的防腐剂1和2是指可以抑制试剂中细菌和微生物污染的一类试 齐U，对试剂具有防腐杀菌的作用。试剂R2中的保护剂一类能够保护胶乳颗粒表面的抗体的 试齐U。稳定剂1和2可以保持试剂内的电荷平衡。本技术方案中的LP胶乳增强免疫比浊 试剂盒，将LP抗体交联在聚苯乙烯胶乳微球表面，当血液中的LP与LP抗体反应时，带动聚 苯乙烯胶乳微球聚集产生一定浊度，而浊度与血液中的LP含量在一定范围成正比，可以用 全自动生化仪在400-800nm波长下检测血液中LP的含量。
[0006] 优选的，所述试剂Rl中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓 冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的一种或多种的组合，其pH为7. O?9. 0， 浓度为25?500mmol/L ;所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸 缓冲液、H印es缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7. 0?9. 0,浓 度为 25 ?500mmol/L。
[0007] 本发明试剂Rl中的缓冲液1可使用上述本领域各种常用的缓冲液，但为了使得试 剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述试剂Rl中缓冲液1优选为包括下列组 分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸的水溶液，且水苏糖、明矾、果糖二磷 酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L，缓冲液的pH值为7. 2 - 7. 6。
[0008] 优选的，各组分在缓冲液1中的浓度为：
[0009]
【权利要求】
1. 一种利用表面官能团的检测瘦素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1和试剂 R2,所述试剂R1由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2 由交联LP抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯 乙烯胶乳微球与LP抗体之间以共价交联方式连接，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的 表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100?600nm。
2. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液1选自H印es 缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的一种或 多种的组合，其pH为7. 0?9. 0,浓度为25?500mmol/L ;所述试剂R2中的缓冲液2选自 PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一 种或几种，其pH为7. 0?9. 0,浓度为25?500mmol/L。
3. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂1选自KC1、 似(：1、0&(：1中的一种或多种的组合，其质量浓度为0.5(%?10(% ;所述试剂1?2中的稳定剂 2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na2C03、Na2S04或 K2S04,悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或葡萄糖。
4. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、 硫柳汞或者ProClin300 ;所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。
5. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的增凝剂为PEG8000 或者葡聚糖。
6. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚苯乙烯乳胶微球为表面官能 团为羧基的聚苯乙烯胶乳微球。
7. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的LP抗体为鼠抗人 LP抗体、山羊抗人LP IgG抗体或兔抗人LP IgG抗体的一种或多种的组合。
8. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的保护剂1为牛血清 白蛋白；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。
9. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述EDTA浓度为10?100mmol/L。
10. 如权利要求1-9任一权利要求所述的LP乳胶增强免疫比浊检测试剂盒的制备方 法，包括如下步骤： (1) 试剂R1的制备： 在缓冲液1中加入稳定剂1、增凝剂、防腐剂1、保护剂1和EDTA，搅拌混合均匀，即得试 剂R1 ; (2) 试剂R2的制备： 步骤一：将LP抗体进行4°C透析，再用缓冲液将LP抗体稀释至2mg/ml，得到LP抗体稀 释液；将聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心、洗涤3次； 步骤二：用缓冲液将经过步骤一洗涤后的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1%， 再加入质量浓度为〇. 01 % _〇. 1 %的EDC，在室温下搅拌反应30min，反应结束后15000rpm 离心洗涤以除去未反应的EDC，然后加入步骤一得到的LP抗体稀释液，室温下搅拌反应 30min，再加入终止液终止反应，将得到的反应液15000rpm离心，用缓冲液2洗涤沉淀，重复 离心洗涤3次，最后加入缓冲液2、防腐剂、稳定剂、保护剂搅拌混合均匀即得试剂R2。
【文档编号】G01N33/68GK104391120SQ201410736433
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】王晓东 申请人:重庆中元生物技术有限公司